Sambrook, Russell - Molecular cloning. Laboratory manual - v.1 (522940), страница 135
Текст из файла (страница 135)
Сагйпег, рег5. сопли.). ТЬе ехасс е!ессгорЬогецс ЪеЬа лог оГ а РХА Ггацшепс сп а ТАРЕ це1 !5 Еп((иепсес( Ьу йе е1ессгк Ее!8 асгепцсЬ, ри(ае силе, ЪиГГег сопсепсгаНоп, сешрегашге, апсс РЫА соро1оцу. Рог а с1есаЦес1 апа1уя5 оГ Ьосч сЬехе рагашесегх аГГесг йе пицгасюп оГ 1агце РЬ)А5 ш РРСЕ, р1еаае аее Сапсог ес а1. (1988) апс1 Майесч ес а1. (1988а,Ъ,с). 1п цепега!, сЬе!г сопс1ыюп5 аге арр1каЫе со ТАРЕ це15. Носчечег, а ргоЫеш епсоипсегес( диг!пц 5опсе ТАРЕ це1 ехрег!шеп(5 апае5 а5 а сопаес)иепсе оГ сЬе чегбса! рояНоп оГ сЬе ацагоае це1 !п сЬе аррагасы.
1Г сЬе це1 Ьох ог йе це1 5Ьои18 итагр, йе РХА сч!Н Ъе оГГ-сепсег ш йе е!есспс Ее!а, саияпц йе РЬ)А со ш!цгасе оис опе Гасе оГ сЬе це!. МАТЕК1АЕЦ СА()Т(ОЬЬс Р!еахе аее Аррепйх 12 Еог арргорпа1е Ьапс!11пц о( ша1епа15 шаг1сес! сч!(Ь <1>. Се15 Н(цЬ-г(иа!((у ацатохе 1с Ь еяепс1а! со иге а ВгаВе оЕ ацагоье арргорпасе Еог РРСЕ. Мапу прес!а1су ацагогет аге сопнпегс!а1!у ачаВаЫе Еог сЬ(5 ригроье (е.8., 5еа(сею 1.Е, В!о)Часа)сег).
ЪЧе Ьаче Ьаа юссета гч!сЬ Ацагоае 1.Е Ьотп Вес!опап сп йЬ ргососо1 апг) и41Ь геци1аг ЕМР ацагоге !гипс Ые ТесЬио1о8!еь. ВссГГег5 апд ЦО1о6оп5 Р1еаае аее Аррепйх 1 Еог сошропеп(5 о( 5(ос1с 5о!иооп5, Ьи((ега, апсс геацеп15. Р!1и1е 5(осЬ 5о1иооп5 Со йе арргорпасе сопсепсга1юп5, Репа(от(лц Ьийет 0.5 гс Нас)Н <1> 1.5 м НаС! ТАГЕ це! е!ес1торЬогеяа Ьиуует солсатюц 0.5 рц(т! ейсо5ит Ьтотсс(е от ал аррторла1е о5!ис(ол оЕ 5УВ(2 Со!с( <1> Рог а йьсимюи о( яагаспц ацетоне Ве!ь, р1еаге атее Ргососо! 2. ТАГЕ це! е!ес1торЬотеата ЬиИет 20 гам Тпаасесасе (РН 8.2) 0.5 шМ ВЕСТА Нас асеВс асса со айия йе РН оЕ сЬе Тг!5 ю!иВоп со 8.2; ые йе Ьее асгц оЕ ЕЕ)ТА, пос сЬе ьойшп ьа!с, Сопсеисгасег( ьо1ис!оит оЕ ТАРЕ Ьи((ег сап а1ю Ье ригсЬааед (е.ц., Егош ВесЬпао).
А ЬиЕЕег о( 0.045 м Тпс-Ьогасе (РН 8.2) апд 0.01 м ЕЕ!ТА Ьаа аЬо Ьееп паем юссем(иПу си сЬЬ ргососо1. ,В 1МРОВТАЫТ ТЬе ТАРЕ це! е1ессгорЬогея5 Ьи((ег лсия Ье соо!ес( 1о 14'С Ье(оге 68!лц (Ье це( аррагаси5. ТЕ ГрН 8.0) 5.76 СЬар|ег 5: бе! Е1ес|горЬогея| оу Р)чА апгЕ Ри1|ег7-ТсеЫАЕагоге бе! Е!ессгорЬогеги Нос!е!с АснЬ апе! О!коппс!еобе!е5 РАЕА я|ге агапе)агс75 Р!еаье аее 5сер 2. Яанйагй сан а1со Ье ригсЬаьес( Егош сонннегс|а1 шаннЕассигегь (е.8., Ъсесч Ен81ан|1 Вю!аЬЬ В!о-Рай ог б!ВСО-ВК!.).
Сепотгс РАЕА оЕ тсегеп Р1еаае аее пер 2, прес!а! Ес!осргпеп1 С)гси1абп8 сча|ег Ьа|И ТАРЕ Ве!а аге гин ас |4 С анс! ге|риге а Йе псе |Ьас Ьой с|гсн!асеа ана соо1ь |Ье е!ессгорЬогеяа ЪнЕЕег. ТЬеае |)еч!сея аге ехреняче (аечега) |Ьоыан6 г|о!!ага еасЬ) анд сан Ье ригсЬааес( еЬЬег аа рагс оЕ йе ТАРЕ Ее! аррагаша (сонннегснйу ача|1аЫе) ог аа а аерагасе р|есе оЕ едшршенс (е.8., Еаис(а ог ТесЬне геЕп8егасюн !нннегяон с|гси1асога ог с!гси1аин8 Ьа|Ь|). ТАГЕ Ве) арраса|на ТЬВ аррагасы Ь ача|1аЫе сонинегсга1!у ог сан Ье сонг!госсе|) аа с(еасг!Ъе|! Ьу Сагйнег ес а1.
(|986; Сагйнег ан|) Рапегюн |989). Игагег Ьай ргеьег Со 74 С ТЬе |часег ЬасЬ Ь геди!гед со соо! йе ТАРЕ Ве! е1ессгорЬогеяа Ъийег ЪеЕоге нее. Ае!Йбопа! КеарепЬ 57ер 2 оЕ Яга ргогосо1 геди|сея йе геадепга 1157ег7 т Ргососо)ь 73 ог 74, 75, апс7 76 оЕ ЕИ15 сИарсег.
5сера 9 апсЕ 70 оЕ сИ)5 ргососо1 геди|ге |Ие геа8епсь 115|ее( т СИарсег 6, Ргососо) 8. 57ер 7 7 оЕ |И|5 рго|осо1 геди|сея СИе геадепса 1|агег7 |п СИаргег 6, Рго|осо1 70. МЕТНО0 Берага6оп оГ 0Ь!А ГгаегпепЬ Ьу ТАГЕ 7. Санс а 198 а8агоье Ее! !п 1х ТАРЕ Ве! ЬиЕЕег иг(сЬоис есЬЫшш ЬгошЫе ап|1 а(!осч |Ье Ве1 со ьес. Роиг |Ье 8е1 нпсЬ йе каше ЬиЕЕег ао!ис!оп со Ъе нее|1 со 611 йе Ве1 аррагасия 2. Ргераге а8агоье р1и88 сопса|п!п8 |Ье РХА оЕ !псегевс (р)еазе нее Ргососо! 13 Еог ргерагас(оп оЕ |папина!!ап РХА ог Рго|осо1 14 Еог ргерагас(оп оЕ уеаас РХА егпЬе|Ыес( |и р!и88) ап|1 саггу оис Й8еяюп сч(сЬ геьсг!сс!оп епгушеа ав с)еаспЬес) ш Ргососо1 15.
Ргераге апс) ешЬес! |Ье арргорпасе Р)ч)А яке ьсапс)агс(5 аь с)еаспЬес) !п Ргососо1к 14 ап|1 16. 3. Е)пае а11 оЕ СЬе р1088 |п 10 чо1ишеь оЕ ТЕ (РН 8.0) 1ог 30 ш(пи|еь ъпСЬ ||чо сЬап8еа оЕЬиЕЕег. 4. ЕшЬе|1 йе с!!8еьсес) апс1 г!наес( РХА р1и88 ш шйчЫиа1 ъче118 оЕсЬе Ве1. 5еа1 йе р!и88 ш йе сче!!а ипсЬ пю!сеп 198 а8агоае |и 1х ТАРЕ Ее! Ьийег. 5. Р!асе |Ье Ве1 ш сЬе ТАРЕ аррагасиа Ес!1ес( М|Ь 1х ТАРЕ 8е! ЬиЕЕег ргечюив!у соо!е|1 со 14'С. 6. Соппесс йе Ве! аррагасиь со сЬе арргорпасе росчег |шрр!у вес со с(е!!чег 4-ачесон|! Ри!аеь ас а сопагапС сиггеп| оЕ 170 — 180 шА Еог 30 пипюея ТЬ!а аеСС!п8 Еогсеа СЬе РХА Со еп|ег СЬе Ве! гарЫ1у, АЕсег сЬ(з с!ше регюй с)есгеаае |Ье сиггепс !прис со 150 п|А, сЬап8е йе ри1ае С(ше Со а ьеСС!п8 орСипшп Еог СЬе яае гап8е оЕ РЬ)Аь Со Ье гено!чес) (р)еаае нее ТаЬ)е 5-10 оЕ сЬ!а ргоСосо!), ап|1 сопс(пие е1ессгорЬогеяз Еог 12-18 Ьоигя !п а Тпа-асесасе)ЕРТА ЬиЕЕег, а ри1|е 6|не оЕ |5 сесонсЬ чл1! ьерагасе Е|Ъ)А Ега8шенын йе 50 — 400-)сЪ а!ке ган8е.
ТЬ~| сансе ган8е оЕ Ега8шенсь сан Ье аерагасег( ш йе Тг!а-Ъогасе)Е)9ТА Ъийег иян8 а рго8га|н оЕ 8аесон|! Ри!аеа ас 350 шА Еог |2 Ьоша Ео!1осчес( Ьу | 5|есон|1 ри1|еа ас 550 н|А Еог ан адйс!она! |2 Ьоига. ТЬе гарЫ е)ессгорЬогеа!а оЕ йе РЬ)А шсо йе Ве! ас йе асагс оЕ |Ье гин ь орсюна!. 5о|пе !нче|6- Еасога а)ир йи |сер ан6 а!шр!у иае оне сонасанс сиггенс анс( ри!ае 6|не аегбн8 Еог йе ен6ге гин.
Ртосоео( 17: Риоег(-Есе1г1 бе! Е1еесторЬотзсг иа Ттатнчетте А(сетпас!пе Р!е(с( Е)ессторЬотезс3 Се!г 5.77 7. Р!асоппесс (Ье росчег аирр1у, йаспапс!е йе Пе! аррагасиа, апс( аса(п йе Пе! сп 1х ТАРЕ ЪиЕЕег соп(а!и!пц 0.5 ПП/гп1 еСЬЫшт Ьгопнс1е ог ап арргорпаСе с(!1иС!оп оЕ 5Ъ'ВК бо1й РЬоСодгарЬ сЬе це! ипс)ег 1Л) 1!ПЬс. ТЬе ссавс(агс( се<Ьв!Пие ыес! со с!есесс РЫАс ьерагасес( Ьу РРСВ ь сса!в!п8 счпЬ есЬссашп ЬгогпЫе ог 5УВК Со!П (р!еаье атее Ргососо1 2). То (асс!васе сЬе десесПов оЕ ввпог срес!еь оЕ ОНА сса(вес( члсЬ ейЫввп ЬгоспЫе, йе Ве!с шау Ье с)енса!вес) сп Н О Еог ир со 1 Ьоиг ЬеЕоге РЬосо8гарЬу. Рог ПесаПь оЕ псейосЬ йас сап Ье шее со псахвпае йе РЬосо8гарЫс с(есессюп оЕ ОЫА хса!вес( ввсЬ сЬехе Пуея р!еасе хее Ргососо! 2.
А1сегпаПче!у, сЬеье 8<1х спау Ье сса!вес( МЕЬ а я1чег зо1иноп аь ПесспЬеП ш сЬе раве! Ье!ою. АЕТЕКЫАТ1ЧЕ РКОТОСО(а 51ЕЧЕК 5ТА!Ы!(м(С РГСЕ СЕЕ5 Ап а((егпаПче, пюге аепяПче гпейос) Еог с!есесПпП 0ХА !п ТАРЕ ог СНЕЕ Пе!ь !а Со а(тПп СЬе Пе( мч!сЬ ърчет (Сагсйпет ес а!. 1986). Оп(огсипасе!у, (Ье асяйпП ргосес)иге ргечепса аиЬзес)иенс (ганс(ег оЕ (Ье 0ЫА со а гпегпЬгапе Еот ЬуЬпйгаПоп апа!уяя САС)Т101мг Р!еасе сее Арревспх 12 Еог арргорпасе Ьавс)Пв8 о( шасег!а(с шаг(сес( сч!сЬ < ! >.
АМ!1!опа1 Ма1еиа18 гает рарет С!огата)с(еЬус)е (Зум ч)ч) (п Н О <1> ИесаЬС (500 а) Рарет сосчеа 5!мет в!Ста(е ао!и(!оп !э шм тчаон 0.2 хтМН ОН О.С)С ( Ем) 48)ЧО, <1> МесЬос( 1. 0гу йе Пе! очеса!ПЬС ЬеСмчееп Вчо ьЬее(а о( П!Сег рарег апс) а 24псЬ агас)с о( рарег Сомче18 сче!ПЬес) с)омчп мч!СЬ а 500-д спася 2. 5оа1с йе с)пес( Пе! !п 100 гп! от 34 Ич) П)и!ага!ПеЬус)е Еот 7 гп!писеа ас гоогв сетпрегасиге !и а сЬетп!са! Еигпе Ьоой 3.
К!псе сЬе Пе! 1п Н О, роиг о(Е СЬе Н О, апс) тер!асе ъч!(Ь 100 гп! о( ЕгеаЫу ртератес) 58чег и!стасе ьо)ис!оп. сеаче (Ле Пе! !п (Ьь ьо(иПоп ипП! йе 0)м)А Ьапс(а аге ияЫе (сур!саПу 3 — 5 пиписеа). 4. Роиг о(Е (Ье ьПчег ао!ис!оп !псо а чмаасе соПес6оп спаса)пег апс) г!псе (Ье Пе! мч!(Ь Н О Еот ап ех(епс(ес( рет!ос) о( Пгпе. ОепаШгассоп апд Тгап5Тег ос 0МА 1о а (Ь(у!оп Меп)Ьгапе 8. К!псе СЬе 8(аЬпес1 Пе! Смч!се мчс(Ь Н,О.
Роиг оЕЕ йе аесопс( Н О Ппае апс1 гер1асе мч!СЬ с(епасиппц ЪШТег. 1псиЪасе сч!1Ь Пенс)е 8Ьа)с(пП Еог 30 пнписея СЬапце йе с(епасиг!пд ЪиЕЕег апс1 !псиЪасе Еог ап ас(с)!с!опа! 30 гп!потея 1в Певега1, ьсапдаЫ гпесЬой оЕ 5оийегп Ыошп8 аь с(еьсг!Ьес( ш СЬарсег 6 (р!еаза< сее Ргососо1с 8 авг) 9) сап Ье ыеП со с(есесс ЬуЬгЫиш8 Пепе с<Пи<всех ш ТАРЕ Пе!я 5оше шчеь68асогх ВпП йас сЬе мету !аг8е ОНА Ега8шевсс сур!саПу ава!урнес) Ьу РРСЕ ставь(ег со пу1ов шешЬгавеыпоге еЕПссепс1у айег рагПа1 Ьус(го1уяь оЕ йе 0)х)А Ьу асЫ сгеасспепс. ТЫь сгеавпепс сагаев рагПа! с(ериг!вас!оп авс( пссЫп8 оЕ 1аг8ег ОЫА Ега8шевсс апс( !в ьо с(о!в8 евЬавсеь сар!Пату сгавх(ег. То !вс1вс(е ав асЫ Ьус(го1уяь яер, а(сег сЬе е1ессгорЬогеьа Ь согпр!есе, г(все сЬе Ве! пчссе счвЬ Н,О ш 5сер 8, роиг оК йе сесовс( Н О г(все, авс( гер!асс сч!сЬ 25 шхс НС1.
5оа1с сЬе Ве1 ьвсЬ ПевПе аГПсасюп Еог 3-5 повисев раисе сЬе Ве1 чвсЬ Н О авс( совс!вие ввсЬ сЬе Пепасшасюв ргососо! оЕ 5сер 8 авс) овсчагс). )АтЬеп асЫ сгеасшепь аге ыеа !в сЬе ргососо1, и !с впропапс со яасп сЬе а8агоье Ве! а(сег ставя Еег оЕ йе 0ХА Со йе пу1оп шешЬгапе. А с1сВЫ геаЫиа( япеаг оЕ ОЬСА зЬов!8 Ье ляЫе. (Е по тес!Пиа! ОНА ы с1есессед, сЬеп йе а<Ы сгеасшевс свау Ьаче Ьеев соо ЬагьЬ (Ье., соо 1ов8 ог соо ссгов8). Тоо пшсЬ деригшаПов авс( ш<Ыв8 !в<терез йе става(ег оЕ йе Р)4А Ьис а!со севсЬ со тес!исе йе !псепясу о( сиЬье9иевс ЬуЬг!П!гас!ов я8па1я 5.78 СЬарсег 5: бе! Е1ессгорЬогев(в о~ОНА апд Ри!вед-Яе!г) АИагове бе! Е!ессгорЬогев(в 9. Тгапвуег сЬе О)ч)А д!гесс!у со а пу!оп шегпЬгапе Ьу сар!11агу Ыосс!п8 (п депасиг(п8 Ъиууег (1ог дега!1в, р!еаве вее СЬарсег 6, Ргососо1 8). 5опсе (пчевдбасогв бпд йас сгапвуег о( 1агбег ОЫА (габшепсв Ь епЬапсед гчЬеп бх 55С Ьи((ег Ь сьег) (п сар01агу Ыосдп8 гайег сЬап йе гпоге всапдагд 10х 55С ш1шюп.
10. АЕСег Сгапвуег, аЕЕх СЬе Р)ч)А Со СЬе пу!оп тетЬгапе Ьу ЪаЫп8 Еог 2 Ьоигв аС 80'С, Ьу Е)гг' сговв-1гпрдп8, ог Ъу сп!сгоигач(п8. 11. Савву оис ргеЬуЬг)д!хас!оп апс1 ЬуЬг!д(га1)оп ипй !аЪе!ед ргоЪев !п а Еоггпагпсде-сопсасп(п8 Ьиууег (Еог с1еса(1в, р!еаве вее СЬарсег 6, Ргососо! 10).
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
