Sambrook, Russell - Molecular cloning. Laboratory manual - v.1 (522940), страница 132
Текст из файла (страница 132)
1989) иаеа ап еЕЕес6че апд ятпр1ег аггау оЕ йодея С!аг1с ес а1. (1988) тиой6ед йе СНЕР тук(сит со иае сотирисег-сопсго11ед д!8!са1/апа!о8 сопчетсеть ас еасЬ е1ессгоде. ТЬ(а зуасети теса(па йе Ьеха8опа! аггау аид саи Вепегасе ап еааеис!а1!у ип!иидес1 чапе(у оЕ бе!д ьсгеп8(Ьь апт1 ап81ея ГАСТОтсй АРРЕСТПЧС !сЕЬОШТ!ОЬ! А11 сиггепс РРСЕ дея8ия а!(ЬоиВЬ д!ЕЕег(п8 гп Ыпд, пшиЬег, апд аггап8етиепс оЕ е1ессгодея Ьаче е1игииасес1 тиа)ог йасог6опя аид а!1 аге сараЫе оЕ геки!ч!и8 Ега8итепса ехсеед!п8 6000 1сЬ ти ыке. Кето!ис!оп (и а!1 ауьсепта а!ьо дерепда оп сЬе братие тес оЕе1ессгорЬоге6с рагатиесегя ри!зе 5.58 СЬаргет 5: Се! НестторЬотюи о! РХА аи|! РиЬе|1-)ге!т! Ариозе бе! Е!есгторЬотеыЬ 1200 |ООО воо .е м воо 400 гоо 0 0.0 0.2 0.4 0.8 0.8 1.0 1.2 не|41(ее пюо)!Пу Е!СУКЕ 5-9 Е(!ес( о! Р01ве Тние ои М| га|1оп о! 0ХА (Ьтои Ь а Р018ео-!(е10 Се! Мо)есн)ат нее!8Ьгнв.
|иоЬ8((у !в 8ЬО|чи (от Ьаидв о(а сопса1ететв тертевеи1ес( Ьу |паи8(ев (4" аид 15" рнее) от 5. сетече(ае сЬтогиовотиев тертевеи1ес( Ьу с!гс!ев (15" аиг( 60"). (Орви с(тс/ев) 60" 6 Ч!сов (с(овес( с(тс(еь) 15" 6 Ч(сои (ореи Гт(ап8!ев) 15" 8 Ч(сон (с!Овес( (пап8(ев) 4" 6 Ч((спи. гние, 6е!д 8(геп8(Ь, гешрегагнге, ЪОКег соп|роя|юп, |уре ап|1 сопсеп|гагюп ог а8агове, апг! аи оЬшве ап8!е Ьемееп |Ье 601сЬ (018оп 1989). 1и ргас6се, гиов| ог" йеве чаПаЫев аге 8епега1!у !серг сопв|ап|, аис! |Ье ыхе гаи8е |о Ье гево!че|1 18 |пап(рн1агег) Ьу шсгеаяп8 йе рн!ве |ние го верагаге 1аг8ег пю1есн1ев апг! Ьу г)есгеаяп8 6 Гог яиа!1ег шо!есн!ев. Ри!5е Типе р(8ше 5-9 1608|га|ев |Ье ге!а|юпвЬ~р Ьеьнееп шо!есн!аг яхе апс1 шоЬ16(у (нып8 ) сопса|ешегв апг! 5.
сетечегае сЬгопютюшев ав вгапс)агс!8) гог рн!ве гнпев ог'4", 15", апс( 60". 1п еасЬ саве, йе ге!а6опвЬ(р 18 !шеаг (Ьгон8Ь а гап8е |чЬеге ехсе11епг са!сн!а6оп ог' оп1 по|ни (га8шепг яхев |чан!6 Ье ровяЫе. (ТЬ~8 сопсгав(8 чн(й в(апанас|) е1есггорЬогеяв |чЬеге пюЬ~1||у о|Е)ХА пю!есн!ев 18 шнегве!у ргорог6опа) |о |Ье 1о8 ог ГЬе(г ию!есн!аг |не(8ЬГ.) Ьаг8ег 6 а8шепгв гнп аЪоче йе 1|пеаг гаи8е, (и |Ье "согиргеввюп гоне," а Ъгоа|1 Ьапг! ог п|агеПа) нр го 1500-2000 )сЪ |п яге. Мо (и!егепсе ге8аго(п8 яхе сап Ье шас!е аг апу рн!ве гине (ог апу (га8шепг (и йе сошргевяоп хопе.
рга8шеи(в >2000 )сЬ гиау Ье геса(иес) ъч((Ь(п йе |не!18 ог шау гнп ш йе "2опе ог ио гево1нгюп" Ьепнееп |Ье ъне1!в апг) |Ье со|пргевяоп 2опе. 1и |Ь|в !аггег саве, "|гаррш8" ог йе 01)А ш иш16р!е рогев ог йе а8агове Ьав ргечеигес) гево!06оп (018оп! 989). с)Негеп( сопс6|юпв гог верага6оп ш ГЬ18 яге с1авв аге гег!шге|1 (вее Ье10|ч). Чойаце р(8нге 5-9 а1во |1!нвггагев |Ьа| 1|'йе рн!ве гние 18 ЬеЫ сопв|апс (15"), шсгеаяп8 йе 6е16 8(геи8й (ггош 6 го 8 Ч(сш) шсгеавев йе яхе ог |Ье !аг8ев| ша|епа1 гево!ней р(е16 вггеп8йв йа| аге гоо Ы8Ь, Ьо|ненег, гевн11 ш ггаррш8 а| рго8геввгче!у ыиа1!ег (га8шепг ягев. ТЬнв, |Ьеге 18 ап нррег 1ни6 |о |Ье врее|1 |н((Ь |чЬкЬ РРСЕ верага|юпв сап Ъе сагПе|1 ош.
Чо1|а8е еКесгв ап|1 |гарр(п8 аге раггкн!аг1у нпроггап| сопв(с!егаг(опв 1ог гево!н|юп ог >2000 )сЪ. Р(гв(, ав ехрес(ед ггош |Ье геви118 аЪоче, а !оп8 рн!ве |нпе ишвг Ъе овес). Но|ЧЕЧЕГ, )пггог!исс!оп со Ргососо!л !3 г)сгои8)л 20 5.59 Ьесаше йе 13)ъ)А са ьо чегу 1аг8е, йе ъо1са8е пшы а1ю Ье 1оъчегед со ргечепс сгарр!п8. ТЬга си шгп гес)и!геа а Сиг|Ьег спсгеаае ш сЬе ри1ае 6ше. ТЬив, со асЬПече геьо!ипоп !и йе ше8аЪаае гап8е, 1оп8 ь!оъч Ве! гипа аге геъ)и!сед, -1-2 Ч!сш, ъчссЬ а 30 — 90-инписе ри!ае снпе, сог ьечега! ъсауы 5исЬ сои|с!с!оиа геено)че йе сЬгошоьошеь ог" 5.
РотЬе, Санг!Ыа а!Ьссанб апс) Х. сгаяа, ъчЫсЬ гаи8е угош - ! 600 1|Ъ со >6000 1|Ь. С)иъсег сЬеае сопс66опя Ьоъчечег, уга8шепса о! 2-! ! 00 1|Ь аП ппцгасе ш а Ьгоаъс ъ)сйизе Ьапй гешспсасепс ог" асан|!асс) сопыапс 6еЫ е1ессгорЬогеяы Еоп8 ри!ье 6|иеь пшик сопагапг е1ес|пс Пе1сЬ сгош СЬе ч!еъчрошС о! япаПег 13)ъсА гга8шепгь. ТЬеге аге соп|66опз йас аерагасе сЬе уиП гап8е угош 50 ЬЬ со 6000 )сЬ оп а яп81е Ве1 !5оийегп ес а1.
1987; С1аг1| ес а!. 1988), Ьис сЬеае ВепегаПу засп6се орснпшп геьо1исюп о! аП яге с1аяеы Е!е!д Апе!е ТЬе ап8!е Ьесъчееп Пе1сЬ са сур|саПу ! 10 — 120", апд |с Ьаа Ъееп аЬоъчи йас чагуш8 сЬе ап81е Сгош 105' Со !65' Ьаа ыпаП ейеся оп регуоппапсе (В!ггеп ег а1. 1988). ЕКес||че иае о! а 90' ПеЫ ап8!е Ьаа Ьееп с!ешопьггагеъс Ьу Вапсгой апъс ЪЧоПс ( ! 988). ТЬса ауьгеш пав йе уоПоъчсп8 Пе16 раиегп: с)оъчпъчагй п8Ь|, ъсоъчпъчагс1,!ей. Ри!аеа |п йе п81н апъ)!ей сбгеспопь аге ас 90' со, апъс ог" съчке йе дигас!оп о6 сЬоае ш йе доъчпъчагд ъссгессюп.
ТЬ!а всга18Ь|уогъчагд аузсеш ргойкеь Ьо|поВепеоиа Пе!сЬ апс! СЬегеуоге (ге)апче!у) агга!ВЬС ш!Вгагюп о! йе 13)ъ)А. Тепърегасоге С)пП)се асан|)агъс а8агоае Ве1 е! ессгорЬогеяя ъчЬПсЬ !а ВепегаПу сагпеь! оис ас гоош сегпрегасиге, РРСЕ 1а ВепегаПу |соне а| 4 — 15'С. 13)ъ)А ш18гагез гаагег а| Ь|8Ьег СешрегаСигея Ьоъчечег, Ь|86ег сешрегасигеа а1ао саиае сгарр|п8 ас !оъчег уга8шеис ыхеа апъс я8ш6сапс Ьапд Ьгоадепсп8. Сои|го! ос йе сешрегасше сЬгоиВЬоис йе Ве! гип а!ьо аиЬ ш сопсгоП|п8 сЬе гергодис!Ь|11су о! йе аерагасюпа ап|1 йе гпоЪ|1!Пеы БРЕС1АЕ СОЮ10ЕКАТ1ОМ5 О!ъ)А Ргерагас!оп 5сапдагд ргоседигеа Сог )3ХА !ао!ас!оп !и ао!ипоп аге пос арргорпасе уог ргерапп8 13!ъА Сог РРСЕ апа!уяы То ргечепс ьЬеапи8 о! |Ье!оп8 1)ХА Рга8шепся РРСЕ 13)ъ)А 1а ргерагеъ) Ьу ешЬе|Ыш8 Пче се!Ь ш а8агоье (5сЬъчагсх апд Сапсог !984). Ргюг |)паис!сас!оп о! сеПз 1а ап нирогсапс сопыдегассоп, Ьесаиае сЬе п|оЪ|11су ог" 13)ъ!А си РРСЕ са пюге аепяссче со сопсепсгаПоп йап П са оп агап|!асс! Ве!ы Турка! срлап66еа о! шаинпаПап 13)ь!А!оа|1е|1 рег 1апе оп СЬе 1аССег гаи8е Сгош 3 С|8 Со 20 )|8; оп ри!аейбеЫ Ве!я апюипо шпаг Ъе геагпсгес) Со < 1-2 р8 Со ргечепс апоша!оиа а1оьч!п8 о! ин8гапоп.
Мо!есо!аг-ъче!дЫ Маг!сег8 Еоъчег еи)сагуосеы ъчссЬ сЬе|г япаП Вепошеа апъс япаП пшиЬег ог" сЬгогиово|пеы со8ейег ъчссЬ ЬассепорЬа8е Х, Ьаче ргочЫеъс а ча!иаЫе гюшсе о! ассигасе1у яхеъс асапдагс)з |п сЬе яхе гаи8е геъ!и!геъ) си РРСЕ. ° 50-!сЫас!с!ег| ) 13ХА (-50 )сЬ), ешЬесЫес) |п а8агоае, сап Ъе 68асеъс со ргос)исе а инхсиге о! и|опогиегы сссшегы спгиегы есс. ТЬеье сопсасешегз аерагасе оп РРСЕ со ргоъсисе а "1а|Ыег" о! Ьапсся еасЬ аиссеясче "плп8" соггеьропсПп8 Со а 50-1|Ь |псгешеп|.
ЕасЫега враписи8 50 — 1000 1|Ъ !20 Ьап<Ь) сап Ье Согше|С (р!еаье атее Рго|осо1 16). 5.60 СЬаргет 5: бе! Е1есггорЬогегЬ оЕОХА апг1 Ри!ьег)-у5е!Й Анатолие бе1 Е!есггор)гоген ° 200-2000-ЕсЬ гапке: 5. сетеляае Ьаа 16 сЬготоаотеа гап81п8 ш яке Егот -200 1сЬ го >2000 !сЬ. ТЬеае сап Ъе ргерагеП тгасг Егот сеПа етЬесЫег) гп а8агоае. 13!ЕЕегепг агга!па оЕ 5. сегеляае МП 8!не ьППЬг!у гПЕТегепг раиегпа Ьесаиае оЕ япаП чаНаПопа )п сЬгопюаогпе яжея Реюег ГЬап 16 Ьапг!а ОП! Ье аееп реп Пчо ог тоге сЬгогпогютеа аге чегу с!оае ш яке.
° МедаЬаае гап8ег 5. ротЬе Ьаа гЬгее сЬгопюаотея 3.5, 4.6, апг) 5.7 МЬ ш яае. С, а161сапг апд гч'. сгаяа а!ао Ьаче сЬготоаотеа гп гЬ!а яке с1аая Ке8Ег!сЕ1оп Епкупзе5 ТЬе аЬ|Пгу го ехр!о!г гЬе геао)ч)п8 роюег оЕ РрбЕ г1ерепсЬ оп йе аЬ|Пгу го Пепегаге Ега8тепга гергос)ис)Ыу !п гЬе гап8е оЕ 100 — 1000 1сЬ ачега8е яке. ЪЧеП апд МсС1еПапг) !1989) Ьаче аЬом п гЬаГ ш ЬасгеНа! 8епотеа оЕ >4598 б+С сопгепг, епгутеа юЬоае гесо8п)гюп аес!иепсе сои!а!па гЬе геггапис!еогЫе СТАС сиг 1еаа йап опсе ш 100 1сЬ. 1п йоае оЕ <4598 б+С, епаутеа ъчгЬ гесо8п)Поп я!ей сопгаш)п8 ССб апй Сбб сиг 1еаа йап опсе гп 100 1сЬ.
МапипаПап Пепотеа аге -4098 б+С апг) аге Пер!есег! Еог йе сПпис!еогЫе Срб (5нчаггх ег а1. 1962). ТЬегеЕоге, епкутеа аисЬ аа №г1, Еа81, 5гг11, апс1 ВяНП, ичгЬ 8- апс$6-Ьр б-С-НсЬ гесо8тПоп кеоиепсея Пепегаге Ега8тепга ш а сотр1есе сППеаг ачега8!п8 >500 1сЬ (5ыаггг ег а1. 1962; !3гтапас ес а1. 1986).
М18СЕПаПЕОМ8 5енега1 ргосейигеь геои)ге Пгг!е ог по тоййсаг1оп Еог иье ъчй РРСЕ. ° 5оийеггг ггаггауегя Сар)Пагу апА аПса!те ггапьЕег ргосеиигеа аге гЬе вате аа гЬоае Еог ьгапАагд 8е!я ю)гЬ йе аг!А)г)оп оЕ а ЬпеЕ (3 — 20 пипиге) НС1 асЫ ггеаьпепг ЪеЕоге йе депагигагюп агер. ТЬе асЫ ггеагтепс епвигеа вериг)паг)оп апд ялйк)епг Ьгеа1са8е оЕ гЬе 1аг8е Ега8- тепга го аПоьч йе)г рааа!че ггапаЕег Егот гЬе Пе!. ° Ачдгоаег ТЬе иве оЕ УППЬ-циаПГу а8агоае 1а гесоттепдед Еог риЬед-6е!д Пе!я Рог таЫп8 р1ир, 1онч-гпе!Пп8-гетрегагиге а8агоае 1а геци!гей ° Вифегг 5гапс!агй ТНа-Ьогаге ЬиЕЕег !ТВЕ) !а гпоаг ыЫе)у паем )п РрбЕ.
° Ргерагаг1че де)я РгерагаПне е1есггорЬогеяа ияп8 !оъ-те!г)п8-гетрегагиге а8агоае 1а еоиа!- !у еЕЕесг)че Еог йе 50-1сЪ го >1000-1сЬ яге гап8е аь П !а Еог йе агапг1агг) <25-1сЪ гап8е. Рго1осо! 13 Ргерага6оп о1 0МА аког Ри!~ес!-6еЫ Се! Е!ес1горйогеыь: Ьо!акоп о1 0МА 1гогп Матгпа!!ап СеЬ апс! Тьыеь т О АЧОГО 8Н8АК!Гес РРКИ4С тН8 8ХТКЛСт!ОГ4 ОГ ИКСЕ РЫА МОГ8СРГ88, сеПа аге 1уаег! 1п яю 1п ап а8агоае р108 (всЬгчаггх апг1 Сапгог 1984) ог а Ьеаг! (С001г 1984). Моаг 1пчеаг!8агога погч иае а8агоае р1088 Ьесаиае ог" гЬегг Ь18Ьег егПс)епсу 1Апапг1 1986). 1пгасг сеПз ог пис!е1 аге геаия репг!ег! ш шо!геп, 1огч-ше1г!08-гешрегагиге а8агоае апг! 80Пг!11!ег1 ш Ыос!га гчЬоае яге шагсЬез гЬе гЬ!с!спеха 01 гЬе !оайп8 81ог ог гЬе 8е1. Ререпйп8 оп гЬе ог8апып, апу ог а чапегу ог" аиЪ- агапсеа аге 1пгиаег! !пго гЬе р!и8 го саиае !уяа ог гЬе сеПа апг! гепгоча1 оургоге!па угош гЬе РХА.
ТЬеае ргосег1игеа у)е16 РХА гЬаг !а ЬогЬ 1пгасг апг1 аиьсерг!Ые го с1еача8е Ъу геагпсгюп епгушеа ш яги. РоПогч108 Й8еаг!оп гч!гЬ гЬе арргорпаге геагг!сгюп епгуше(а), гЬе р108 сап Ъе !оаг!ег! йгесг!у шго гЬе гчеП ог' а ри!аед-ПеЬ1 8е1 ог Ь сап Ье ше1гег1 Ъегоге !оайп8, Ргосег!игеа гог гЬе !уяа ог шапипаПап се!Ь аге г1еасПЬег1 1и гЬга ргогосо!; ргосевшеа гог уеааг аге веаспЪев ш РгоГосо1 14.
ТЫа ргогосо1 деаспЬеа гЬе ргерагагюп оу аашр!еа антош си!гигег! сеПа апг! г!ааие аагпр!ея 'гггЬ)ге Ыоог! сеПа 180!асег! )гош ра6епп ог ап!шаЬ а)ао сап Ье иаег1 аа а аоигсе ог" ЫПЬ-шо1еси1аг-гче18Ьг РХА Гог РЕСЕ. 1г г!еа!гег1, РИА сап Ъе ргерагег! 1гош пис!е! 1801агег! 1гош шашгпаПап сеПа !р!еаае аее СЬаргег 17, Ргогосо) 1). Ногчечег, П !а оиг ехрепепсе гЬаг по агЬ апга8е Ра Па)пег! ггош ргерапп8 РХА )гогп пис1е1, аа РХА рао!агег1 тгош гпгасг сеП8 18 ег!иаПу аиасер6- Ые го с!еача8е Ъу геагПспоп епгушея МАТЕК1АЬЬ САНТ!ОЬ1: Р1еаае аее Аррепйх 12 1ог арргорпаге Ьапдппд о1 тагепа18 шпаг!гег! гч!1Ь <! >. Впйегь апд Яо!гг11опк Р1еаье аее Аррепйх ! 1ог сошропеп18 о1 а!оса 80101!опа, Ьипега, апг! геа8епГя РПите 8!ос!г 80101!опа Го ГЬе арргорпаГе сопсеп!га6опя ЕРШ !О.5 м, рН В.О) 1 ЬиГГег 0.1 м ЕРТА (рН 8.0) 0.01 м Тпа-С! (рН 7.6) 0.02 м НаС! вгоге аг 4'С.
5.61 Ргогосо! !3: Ргерагабоп ау Р24А/ог РРСЕ: !го!апоп о/ РХАугот МаттаПап Се!Ь апс! Т!яиел 563 )ч!ЕТНОО 1. Ргераге сеПа ог 6ьаце аашр1ея ГОК С!ЗЕТЕ/КЕО СЕЕЕ5 а. ЪЧаьЬ се1Ь гЬаг Ьаче Ьееп кголч!пВ ш си1гше лЬгее йпеь лп лсе-соЫ РВ5. Ь.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
