Sambrook, Russell - Molecular cloning. Laboratory manual - v.1 (522940), страница 131
Текст из файла (страница 131)
Но|чечег, 10 08 оЕ сагпег ЙЪЛА сап Ье асЫес( Ье(оге ргес|риа|юп, |чмсЬ |пау ппргоче ечеп Ьлг|Ьег |Ье гесочегу оЕ яша11 апюппь оЕ РХА. Веуоге аг(81пх |Ье КЪЛА, шаЬе япге |Ьа| йе ргеяепсе оЕ КЪЛА |а|И по| соп|ргоппяе кпЬке9оеп| геаснопя ко |Ье РЪЛА. (Еог ргераганоп оЕ сагп'- ег КЫА, р1еаке кее Рго|осо! 3.) РЬяо1че йе РЫА 1п 200 )л! оЕ ТЕ (РН 8,0), асЫ 25 р) оЕ 3 м койшп асе|а|е (РН 5.2), апс1 а8а(п ргес)риале йе Р)ч)А ъч(й 2 чо1и|пея оЕ ейапо1 ая с1експЬес1 и| 5гер 9.
Сагеуи1!у ппке йе ре!1ес опсе чч)|Ь 70% ейапо!, апс) йкко!че йе 13)ч)А ш ТЕ (РН 8.0) |о а 6па1 чо1шпе оЕ 10 )л!. СЬес)с йе а|оопп| апс! с!иа1!гу оЕ йе Ега8|пепс Ьу ро1уасгу1а|пЫе ог ЫЕЬ-геяо106оп а8агояе Ее1 е!ес|горЬогеяя а. М)х а япа!1 а1)с)ио! (-20 п8) оЕ |Ье 6па1 ргерага|юп оЕ йе Ега8шепг чч)|Ь 10 )л! оЕ ТЕ (РН 8.0), апг) а|Ы 2 ф оЕ |Ье с)ея!гес) 8е1-!оайп8 ЪиЕЕег (р1еаяе яее ТаЫе 5-4). 1ПЕЕОСтиСЕТ'ОП Ео РЕОЕОСОЬ ТЗ йуоидЬ 20 РЫьед-йеЫ Се! Е! ес1горпогеыя д Ш Г1НЕАК 0ОСтВЫ-КТКАНоео 0Ь)А МОСЕССттЫ тНАт АКЕ ИКСЫ йап а сегта)п к!ае пп8гате йгоиВЬ аВагоке Ве!к ат йе кате гаге.
АЬоче тЬ!к сптка! 1еп8тЬ, тЬе ме)ой!у оЕ 0ХА пю!еси1ек Ьесотпек а1тпокт шдерепдепт оЕ йетг к)ае апд дерепдк сЬтейу оп тЬе ктгеп8й оЕ тЬе е1естгк 6е!д. 1п ргасдса) сегтк, тЬ!к ге!адопкЫр теапк тЬат 0ХАк Вгеасег йап -40 )сЪ тп !еп8тЬ саппос Ье еакт1у керагатед Ъу арр1уит8 а сопктапт е1естгка1 6е1д то Ьопгопта! а8агоке Ве!к. ТЬ)к ргоЫетп !к ко!чес1 Ьу ри1кес1-6е!д Ве! е1естгорЬогеяк (Саг!е апс1 01юп 1984, 1985; 5сЬъчаггт апд Сап!от 1984; Саг1е ет а1.
1986; СЬи ет а1. 198б), тп ъчЬтсЬ тЬе е1есспс Ете)д !к къч!тсЬес1 репосбса!1у Ьетъчееп тъчо д)ЕЕегепт сбгесдопк ъч)тЬ ри)ке типек гап8)п8 Еготп 0.1 то! 000 кесопдк ог тоге. ТЬыпетЬос1 аПоъчк йе керагадоп оЕ 0)ъ)А тпо!еси1ек ир со -5 МЬ !и 1еп8й. Егасдопадоп осситк Ъесаике йе йпе тес)и!гед Еог а 0тчА пю!еси1е то сЬап8е сбгесдоп тп гекропке со йе Яистиадп8 е1естпса1 6е!д дерепдк оп )тк яке: 5Ьогтег то!еси!ек сап геопепт тпоге с)шс)ду апд сап йегеЕоге томе тЬгоиВЬ йе Ве1 Еактег тЬап !оп8ет то!еси!ек.
ТЬе Вепега1 сопсерт оЕ РЕСЕ аррагатш дея8п )к кЬоип ксЬетадса!1у ш Е!Вите 5-7. ТЫк дея8п, тЬе оп81па! ОЕАОЕ (огтЬоВопа! 6е1д а8агоке Ве! е1естгорЬогек!к) дечке оЕ Саг!е апд О1юп (1984), !к ч!киа11у апд сопсертиа1!у кипр!е. Тъчо е1естгоде ратгк, А апс1 В, аге кЬоъчп. 'ъ'ътЬеп тЬе А е1ессгодек аге асдчатед, тЬе пе8адче!у сЬаг8ед 1ЭХА пп8гатек с1оъчпъчагд апд то тЬе т!ВЬт; ъчЬеп йеке е!естгодек аге тигпес1 оЕЕ, тЬе В е!естгодек аге аст!чатес1, апс1 тЬе 0ХА поъч пи8гатек доъчпи агд апд то йе!ей. ТЬтк ге8и!аг а!сегпадоп оЕА апд В 6е!дк сопдпиек тЬгоиВЬоит йе Ве1 тип апд саикек йе 0ХА то Ео1!оъч а т!Ваа8 рай ак кЬоъчп, ъч!тЬ а пег пщгатюп тп тЬе доъчпъчаЫ д)гесс)оп. Хосе йас "ри1кед" 6е1д е!ессгорЬогеяк !к а к! !8Ьт т!кпотег; и шпиге ассигате1у са1!ед "а1сегпадп8" Ве1д е1ессгорЬогеяк.
ТЬе штегча1 ат иЫсЬ тЬе 6е!д гбгесдоп 1к сЬап8ед !к теппед йе ри!ке типе апд тпау гап8е Еготп а Ееъч кесопдк то Ьоигк, ъч!1Ь рго8гекяче1у 1аг8ег 0ХА Ега8- тпептк гею1тдп8 ат 1оп8ег ри1ке тппек. Е1СстКЕ 5-7 Сопсе т от Ри!кед-Векд Е1естго Ьотеяк Ап а8атоке Ве1 1к тергекептед Ьу тЬе Ьото йе кепек оЕ квот! Ьот1топта! тестап8)ек 1пйсате тЬе ъче!!к 1пто ъчЫсЬ тЬе 0МА 1к 1оадед. А апс1 В тертекепт си о кетк от е1есттос)ек.
ЪМЬеп йе А е1есттодек ате асбчатед, йе ой 1к дгвеп апойсаПу доъчпъчатс) апс) то йе п8Ы ак )пйсатед Ьу йе Вткт аггоъч. ъттЬеп тЬе А е!естгодек ате титпед о6, йе В е!естгодек ате спттейасе1у астватед. ТЬе 0тчА поъч тпочек с)ои пи атд апд то йе 1е)т. ТЬе ратЬ от' а О!ъ1А тпо!еси)е юЬ)естед то сопт1пиед акетпатюп оЕ Ве!д сктесвоп 1к твои и Ьу тЬе атгоъчк. 5.55 5.56 Сйарсет 5| Се! Е!ессторйотегЬ о) РИА апд Ри1гед-)ге!д А8агые Се! Е!ее|тор)готеггг Аа деаспЬед еаг1|ег ш йе !псгодис6оп со йЬ сЬарсег, йе е(уесс оу а1сегпа6пй Ее!да сап Ье ехр1ашед Ьу сопядег!ий йас а РХА то!еси1е асгессЬеа оис апд опепь рага11е1 со ап е1ессгк 6е!д.
1| сап сЬеп Ье пючед сЬгоийЬ аиссеаа!че рогех ш 6|е айагохе Ве1 Ьу герсабоп. ЪЬеп йе 6е!д сйгессюп сЬапйея йе РХА и|о1еси1е тыс геопепс Ьегоге и сап точе !и йе печч д(гесс!оп. Аа сЬе 6е1д гбгес6оп гейи! аг1у сЬапйея йе РХА тыс гейи!аг1у сЬапйе |Вгессюпя ТЬе 1агйег йе пю1еси1е, йе июге 6п|е гес)и(гед со геопепс апд сиги согпегя 1еач!пй ргоро|6опасе!у 1еаа сипе (ъчЬЬ|п еасЬ ри1ае) ача(1аЫе со |поче ш йе пе|ч гбгесбоп. Рог ехрептепь 111ысга6пй сЬ(а Ыеа, р1еаае аее 5т(сЬ ес а!.
(1989) апд 5сЬхчагсх апд Коча1 (1989). ер| о! йе!д айегпаСюп !п 1983 Ьу дегпогьггаС!пй гЬ ейес» 5ассйаттпусе| сегенгх|ае. ЧЧ!|Ь!п 1 уеаг, пчо деа!8па ччеге Пчо аегх о( йпеаг е!есггодеа Ь|гпйаг Со СЬа| айоччп |п г! а!. 1983; Саг!е е| а!. 1986). Вой| аерагагед п|о!еси1е 1500 1|Ь. Т е гпа!о, апд рогсапс, д аъчЬас(с со йехе дех!8пя Ьо|чечег, |чае сйас |Ье е!ее|годе ргодисед попйоп|ойепеоы е!есспс йе!|Ь (ах сап Ье !п(еггед Ьу |пхресс!оп о(68 |ге 5-7), саияпй чаг!аг!опа !п СЬе хреед апд Сга!ес|огу о| Р(9А сгайгпепгя Гог папу арр!кайопя йгеае д!агои|опа Ьгпдегед (псегргесасюп ос Ьапд рассегпя Ах а гехи!с, гпалу |ййегепс риьед-йеЫ деа!8пх Ьаче Ьее !п аиегпрь со йепегасе ипйоггп йе!Вя 1и сЬе гета(пдег ог" сЬ!а сЬарсег, чче ргеаепс ргососо1а гог ехсгасбпй йепопис РЬ(А ог негу 1щЬ гпо!еси1аг чче(ВЬ| !гоп| 1очтег апд 668Ьег еи!сагуосея а тейод со д(йеас йепоипс РХА етЬеддед |и айагоае апд со Вепегасе а!хе асапдагдх !ог иге ш РРОЕ, ргососо1х гог с|чо д(6егеис апд рори1аг готта ог" РРСŠ— ТАРЕ апд СНЕР Ве!х — апд Съчо теСЬода гог гесочеппй РХА Сгайтепса Сгот ри1аед-6е1д 8е!я ТЬеае ргососо1а |неге ргочЫед Ъу Кайе1ееп Сагсйпег (()п!нега!су ос Со!огадо, Вои!дег).
ТУРЕЦ ОЕ АРРАЙАТ!)БЕй Роиг рори1аг деа!Впа аге |1!ысгасед хсЬета6са11у (и Р18иге 5-8 апд аге деаспЬед Ье1о|ч. (А посе оп потепс1асиге: Асгопута аЬоипд. ТЬеу аге иаед со гегег со аоте арес(6с ааресс ог'йе рагски1аг ри!аед-Ее!д аррагасы. Сопппегс!а! дече!оргпепс Ьаа аддед адсбсюпа1 сассЬу патея е.8., ТАРЕ гог сгапачегае а1сегпабпй 6е1д е1ессгорЬогеяя) ° ТЬе | етс!са! ри!хедЯеЫ хуагет (почт саУед ТАРЕ) (магд!пег апд Раиегаоп 1989): ТЬь арра- гасы (Р!8иге 5-8А) !а еааепс!а!!у а сЬгее-д!тепяопа! |поде1 оу йе ог!8(па! ОРАОЕ (Р(йоге 5- 8).
ТЬе йе! хсапда ирг(8Ь| Ьес|чееп с|чо 1шеаг е1ессгоде ра!га апд ышррогсед Ьу сто й|п р1ая 6с япра апд йе Ьиоуапсу ог йе Ьибег. РМА гиы |и а хсга!ВЬ| ра|Ь |и а11 1апех Ьесаые |Ье 6еЫ !а ип(готт асгоха йе це1; г)и(се аЬагр Ъапда аге оЬ|а(пед, ге1аипй со |Ье 6е1д йгасбепс до|ни йе йе1. ТЬе ап81е Ъеьчееп йе а1сегпасе Ее!да Ь 11О' ас йе чте11я Ъис 6 ь пшсЬ йгеасег 6|гсЬег домчи йе йе1. ° Р!еЫ !ичетх!ои (Е1бЕ) (Саг!е ес а!. !986; Тигте1 аи|1 (.а1апде 1988): ТЬ(а х(тр1еас ог" йе ри1аед-6е!д деа!Впа (Р|йше 5-8В) иаеа а яп81е ра(г оГ е!ессгодех апд а яапдаи! хиЬтагше айагоае Ве1 е!ессгорЬогеях Ъох.
Риппй йе йе1 гип, йе 6е1д гейи!аг!у |пчегь, 6ьс дпч|пй йе РХА ош ос йе чче!! а апд |Ьеп Ьас1| сочтагд йе чче! 1я ТЬы, йе ап81е Ьеичееп сЬе 6е1|Ь ь 180'. ЕиЬег йе гогъчагд ри1хе сппе ог |Ье гог|чагд 6е1д тиас Ье йгеасег йап сЬе гечегае гог пес гогччагд пийга6оп ог' йе РХА. То ачоЫ апоша!!еа ш ппйгасюп ог Сгайтепса )600 1|Ь, "катр|пй" ь бес)иепс!у ыед: ТЬе гоггчагд апд гечегае ри1зе 6гпеа (апд/ог 6е1да) аге икгеааед, е!|Ьег Вгадиа1!у ог |и а асер гайюп диппй йе тип. ° Яосаг!888е!х (Апапд 1986; 5оийегп ес а1.
1987): 1пасеад ог" а1|егпабпй йе 6е!д д(гес6оп, |Ье Ве1 (Р!Вите 5-8Р) ыпоипсед оп а госабпй р!асгогт |чЬ|сЬ сЬеп а)сегпасеа Ъеичееп с|но оп'- !пгтодист!оп го Ртотосо(т 13 тЬтоиеЬ 20 5.57 Е(СС)КЕ 5-8 Ри!кед-Е!е1д Соп68ита6опв Ртодистп8 Е!естг(с Е(е1да ТЬат Аге С)п)(отис )п А11 Еапеа о( йе Се) Соптропепса от' е)есстоде ьетя А апд В, ате тертеьептед аь дось от Впея (А) ТЬе чегдса( ри(ьед-Ве!д куя сети от сгапачетае аЫетпадп8 ((е!да (ТАТЕ). (8) Е(е!д )очесам(оп.
(С) Сои(опт-с!атпрес) Ьопто8епеоиа е1есспс Ве1д арратасик (СНЕЕ). (О) Косадп8 арратасиа (йе Ве! а!сетпасеь Ьепчееп роядопь А апд В). еисас!оиа (120" арагс) чдйтп а сопасаис е!есспс бе1д. Ргопт сЬе 6 атие оЕ геЕегепсе оЕ йе Е)?ч?А, с?иа иточегпепс !а сЬе таите аь сЬап8!п8 йе 6е!д йгес6оп. ° Сопгоит-с!атред ?тоитотгеиеоиз е!ессПсЯе!д (СНЕР) деч!се (СЬи ес а1. 1986; ОгЬасЬ ес а1. 1988): А Ьеха8опа! аггау оЕ ро(ис е!естгодеа !п а чо)са8е йчтдег с(гсгдт (Р!Вите 5-8С) ргодисеа Ьоито8епеоиа Ете1да (опепсед ас 120 ) арргохииа6п8 сЬоае оЕ ра(гк оЕ тпбпде!у 1оп8 рага11е) е1ессгодея ТЬе е1ессгорЬогеа!ь деч!се (ЯсЬтчагск ес а1.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
