Sambrook, Russell - Molecular cloning. Laboratory manual - v.1 (522940), страница 137
Текст из файла (страница 137)
7. 5йагс йе Ьиуйег сйгси!айпи апд Ьерп сЬе е!ессгорЬогеяк гип ияпц роъчег корр!у кесййпйь ак декспЬед 1и ТаЪ!е 5-11. 8. Айег е!ессгорЬогеяк, к!а!и сЬе ие! ш а 1 сйцЕш! ко!ийоп оЕ ейссйшп ЪгошЫе ог ап арргорпасе сй1шюп оЕЕУВрс Со!д Еог 30 гишийек ай гоош сепсрегасиге. 17екса)п сЬе ае1 Еи Н О Еог 30 пиписек апд РЬосоигарЬ йе це! ипс)ег 17Ч 1ЕиЬс. Гог дега!!з оЕ зпесЬогй сЬас сап Ье месс со юахсюсге сЬе РЬосоьгарЬсс десессюп ой ЕзсчА зсаюед зчсгЬ сЬезе ссуез, р!еазе зее Ргососо! 2. 1Е по йгапзйег оЕ сЬе 17ХА со а юеюЬгапе сз р!аппед, сЬезе цей гпау Ье зсаспед зч|сЬ а я!чег зойиюп аз дезспЬед ю сЬе рапе! оп АЕТЕРзйАТ!ЧЕ РКОТОСОЕ: 51СЧЕРз 5ТА!Ы1МС РЕСЕ СЕ15 зп Ргососо1 17. 5.82 СБаргет 5: Се! Е!ее!тор)сотезсз оу РХА апг( Ри!зесЕ-ЯеЫ А8атозе бе! Е!еспорЬотез!з Оепа$огабоп апе! Тгапйег о1 О!Ь)А 1о а Му!оп МегпЬгапе 9.
Айег РЬ0108гарЬу, !псиЪаге СЬе 8е! 1п 250 гп! 0Е йепагипп8 Ьийег ут(СЬ 8епС!е зЬаЫп8 Еог 30 пшшсез. СЬапйе сйе йепасиппй Ьийег апс1 шсиЬасе Еог ап айсйсюпа1 30 пнписез. 10. Тгапзуег сйе Р)х)А гйгесс!у со а пу1оп шешЪгапе Ьу сарс11агу Ыосйпй ш йепасипп8 Ьийег (Еог йесайз, р1еазе зее СЬарсег 6, Ргососо! 8). ЕпЬапсей сгапзЕег оЕ !аг8ег РЬЕА Ега8шепсз Ьаз а!зо Ъееп посей сеЬеп бх 55С Ьи(уег Ь изей !и сар- !1!агу Мосс!п8 гасЬег сЬап сЬе пюге зсапйагй 10х 55С зо1исюп.
11. Айег сгапзуег, ауйх сйе РХА со сЬе пу1оп шешЪгапе Ъу ЪаЫ08 Еог 2 Ьоигз ас 80'С, Ьу ()Ч сгозз-!ш)с)п8, ог Ьу писгосеанш8. 12. Саггу оис ргеЬуЬг!й(гас!оп апс1 ЬуЬпсйгайоп мчсЬ (аЪе1ей ргоЬез ш а Еоппаш(йе-сои!а(п- !08 Ьийег (Еог йеСайз, р1еазе зее СЬаргег 6, Ргогосо! 10). Хе сургса11у изе 'ср-гаспо1аЬе)ей з!п8! е-астап йей Ьассег!орЬа8е М15 ргоЬез (р1еазе зее СЬарсег 9, Ргососо1 5) ас а сопсепсгапоп оЕ 5 х 10з со 6 х 10з ерш)ш! оЕ ЬуЬпсйгайоп Ьийег со йесесс а яо81е-сору депе ш а согпр!ех спапппа!сап 8епоше. А шепсЬгапе ЬуЬг!й!гей Сот 12-16 Ьоигз ш ЕЬсз ЕазЬсоп Ь сеазЬей ш 500 гп! оЕ 2х 55С сопсаш!п8 1 за (сз)г) 5Р5 Еог 15 пиписез ас гоогп сепсрегашге, зсгиЬЬей 8епс!у се!ЕЬ а зроп8е, апй сЬеп ъчазЬей сп 1 !ссег оЕ 0.5х 55С сопсасшп8 1зтз (Мч) 5Р5 Еог 2 Ьоигз ас 65'С, апй сЬеп зиЬ!ее!ей со аисогай!оцгарЬу. Р~гес1 Ке1печа! ог РМА Ггадгпепй 1гогп РиЬед-йеЫ СеЬ анлклт|че 5слее русе |м юъч-мнт!мс-тамреалтеъпи лслхо50 (р1еаае аее Ргогосо!а 1у апъ! 18! ь оугеп иаеь! |о ьо!аге а !агие Р!ъ|А Егаишепг Еог аиЪзег!иепг гпашри!агюп.
Яхе-Егасг|опагес| РтхАа сап Ье й8еагег! ъч!|Ь геа|псгюп епъ!опис1еааеа го цепегаее а Ь|ВЬ-геею1и6оп с1еача8е шар ог го ргойке Егаишепгх Еог 1|па!!оп шго Ьасгег|орЬаие ог р1аяпЫ чесгогя АЕЫ171опа11у, РХАа ьо|агес| Егопь ри!хейЕ|е18 де!а сап Ье 1!Вагес! йгесг!у !пго сояпЫ ог уеая аг66сга! сЬгогпоаоше (УАС) чесгогя ог 1Е а1геаду с!опеъ| шго 'гАС чес|огя Егасг|опагег| РХА сап Ье ш!есгеь! шсо Еегг!1!хек пюгье ешЪгуоа ог ггапауесгег| !п|о шшше егпЪгуопк яегп се1!я Чгог!с!08 ъч!ЕЬ х!ге-угас!!опагеъ| Ь!ВЬ-шо1еси1аг-ъче!ВЬ| Р!ъ|Аа гег!и!геа йаг ехгга ргесашюпа Ье га|сеп го шахптихе гесочегу оЕ йе деягед Р!ъ|А шо1еси!ев апъ| Ео ачоЫ аЬеапп8 тЬе Р!ъ|А. ТЬ|а ргогосо1 ргеаепга а шегЬог| Еог йе ъ|!гесг гесочегу оЕ !ЭХА Егош а 1оъч-гпе111пц-рошг РВСВ.
Ргогосо! 20 гъгаг сопсепггагеа йе Егасг!опасес| Р!ъ|А Ьу е1есггорЬогеяа ппо а ЫцЬ-регсепсаде Ве1, Ео11оъчес1 Ьу гесочегу оЕ йе Р!ъ|А шо!еси!ея Во|Ь ргогосо!а ге1у оп йе гье оЕ ацагаае Ео ге1еаае ЫВЬ-шо!еси1агъче!ВЬ7 РХА епхушаг|са11у Егогп а8агоае. 1п йь ргогосо!, а це! а!|се сои!а!и!пц а ЕгаВшепт оЕ РХА геао1чес! Ьу РРОЕ |а ггеагед г!!тест!у ъч!|Ь а8агаае. ТЬе ге1еаъег! РХА сап Ье иаег! аа а аиЪаггаге Еог 1|па!!оп ог геяпс6оп ъч!1ЬоиЕ Еиг|Ьег рипйса6оп.
МАТ НИАРИ САБТЮ|ь1: Р1еахе аее Аррепг|!х 72 Еог арргорпа|е Ьапг||!па оЕ татег!а!а гпаг|ъег| ъч|ЕЬ <! >. Впйег5 апе! Ьо!66оп5 Р1еаае аее Аррепг|!х 7 Еог сошропеп|а оЕ хтос|ъ ао!01!опа, ЬиЕЕега, апг! геаиеп|я Р1!иге атос|ъ ао!06опа Ео 1Ье арргорпа|е сопсеп|га6опя ЕЯЫ|ит ЬготЫе <|> Е7 и8!т17 ог ап арргорпаге е8!ипоп оЕ 5УВК СоЫ <|> рог а йзсиь1оп оЕ ъга|п|оа ааагоъе ае!я р!еаъе ъее ргогосо! 2.
РЬепо!:сЫоготогт 17г7, чМ Горг|опа|7 <1> Епхугпе5 апе! Впйег5 Ааагаае ь ача|!аЫе Егогп а пшпЬег оЕ гоапитасшгегь (СЕтаъе Егогп Еркепгег ТесЬпо!оа|ея 0-Ааагаъе | Егогп гтеъч Епц! ап0 Вю|аЪА апй 0-Ааагаъе! |гого Са1ЬюсЬегп|. |7ъе йе Ьиттег гирр|ъеа ъч1ЕЬ ЕЬе епгуюе. ЪЧе гесопппепд ЕЬаг а|! ЬиЕЕегь Ье аирр1еюевге0 ъч|й |00 гпм ХаС!, 30 им арепшпе, 70 рм ърегпънюе со епЬапсе гесочегу оЕ ЕЬе НХА. 5.83 5.84 С)шргет 5: бе1 Е!есгторБотеьсь оЕРНА апд Ри)вед-Яе!дА8атове бе1 Е!естторЬотевгь Ь!ос!е1с АС1415 ап41 О11еопос1еоЕ141еь Р)чА ь)ге ьСапг)атдь Рог йе ргерагадоп оЕ саю д)ЕЕегеос гапьев оЕ агш8 всаидагдв, р!еаве вее Ргососо!в 14 аод 16. Яапдагдв сап а1во Ье ригсЬавед Егосп соппиегс)а! гоаииуассигегв !е.8., Ь)есч Вих)апд Вю!аЬв, Вю-иад, ог С!ВСОВИ ). Сепотк РХА етЬесЫегЕ сп 1очч-те!1108-Сетретасите а8атоье р)08ь Р!саве вее Ргососо! 13 Еог ргерагаиоп ос псасиша1)аи Р)4А ог Ргососо1 14 Еог ргерагасюп о!уеавс 7)Ь)А ешЬесЫе<1 си р!иая Саггу ои гахевсюп чгссЬ гевсгксюп еигушев ав девсг)Ьед си Ргососо1 15 оЕ сЬсв сЬарсег.
прес!а! Е41о1ргпепЕ Пасет Ьайь ртеьес со 65-68 С апс) со сетретасите аррторпасе Еот а8атаье 058еьс)оп А4111Жопа! Кеа~епЕВ 5серь 7 апс) 2 оЕ СИ)ь ртососо) тег)ште йе теа8епгь 71ьгег) )л Ртососо1 7 7 от 78 оЕ сЬ)ь сЬаргет. МЕТНО0 1. Ргераге а ргерагасгче 1осч-псе!сш8-рошс а8агоье РРСЕ 1Ьас вчс!! РгочЫе орс)шиш геьо1ис)оп оЕ сЬе Р)в)А Ега8шепс ог яге Егассюп оЕ шсегеьс. 2. 1.оас1 сЬе Р)в)А яге ьсапдагдь апд яп81е р1иав оЕ сЬе д!8еьсед Вепопис РМА ш 1апеь!осасес1 оп ЬосЬ ядеь оЕ йе ргерагаиче в1ос. 1.оад сЬе ргерагаоче ьапср1е )псо йе ргерагас)че ь1ос. Саггу оис е1ессгорЬогеяь аь <)еьспЬед ш Ргососо! 17 (Еог ТАРЕ Ее1) ог Ргососо1 18 (Еог СНЕР 8е1).
Ав гиапу ав 20 р!ихв сопса)п! 08 7)ХА дсхевсед иЬЬ а гевспссюп епгуше сап Ье 1оадед шсо а яо- 8!е "ргерагадче" в!ос ои сЬе це! 1чап йе Ро! ес а1. 1990). 3. АЕсег е!ессгорЬогеяь, сис сЬе !апеь сопсаиип8 сЬе яге ьсапдагдь апд яп81е Еепопис РХА р108ь Егопс сЬе Ве! апд ьсаш сЬепс сч)сЬ ейЫшсп ЪгошЫе ог 5уВК боЫ Еог 30 писшсеь ас гоош сешрегашге. 1Е песеььагу, деьсасп сЬе Ве1 ь!кеь ш Н 0 Еог 30 пиписеь. Ро пос всаш сЬе ргерагас)че 1апе.
4. Ехапипе сЬе яа)пед ь!)сеь Ьу от 1!1ипипас)оп апд спа1се поссЬев оп сЬе ь1кеь со таг1с йе )оса!)опь оЕ шаг)сеть ЕапЫп8 сЬе роясюп оЕ РХА оЕ )псегеьс. 5. КеаььешЫе сЬе Ве) сч)сЬ сЬе 1апеь сои!а)п)п8 йе ьсашед яге яапдапЬ апс1 яп81е р!08ь апс1 1осасе сЬе арргохипасе ге8соп оЕ йе ипьса)пес1 ргерагас)че !апе сопса)гдп8 сЬе РМА оЕ шсегеьс.
СагеЕи11у ехс)ье сЬгь ге81оп счЬЬ а с1еап гагог Ыаде, апс1 сгапьЕег сЬе Ее! ь1ке со а ьпарсар ро1ургору!епе сиЬе. Рог 1ои8-сегш всогахе, сЬе Егахшепс вЬои1д Ье р!асед ш ап асгицЬс сиЬе аид в!отед ас 4'С. 7)ос Ыосс)08 ог 5оисЬегп Ыосдох сап Ье мед со оЬсаси а гпоге ргессве десегш)пас!оп оЕ сЬе )осасюо о! сЬе Егахшепс о! спсегевс ш сЬе ргерагадче Ве! !чаи де Ро) ес а1.
1990). 6. Сочег йе Ве! Ега8шепс ъч)сЬ а8агаье ЬиЕЕег, апд шсиЬасе Еог 1 Ьоиг ас гоосп сетрегасиге чдсЬ оссаяопа1 а8)сас!оп. Р!ьсагд сЬе ЬиЕЕег, апд гереас сЬе ргосес1иге пуке споге. 7. АЕсег сЬе ЬиЕЕег ехсЬап8е сь сошр1есе, псе11 сЬе а8агоье ь!ке соспасп)п8 сЬе Егассюпасед ЕНСА ас 65 — 68'С. Риг)08 сЬе ше!1108 ьсер, ьвч)г! йе сиЬе со епьиге согпр1есе ше!с!08. Ахагавев 018евс депасигед)ше!сед ахагове, пос сЬии1св оЕ ахагове. Ргогосо! 19г Р!гесг ЕЕеггЕеча! о! РАЕА рга5тепгг1гот Ри!гегЕ фе!ЕЕ беЬ 5 85 о.
АгЫ ап арргорпасе агпоипг оЕ ааагаае го йе гпе!гед ае1 апс1 61аеаг гЬе ае! аг гЬе гегпрегагиге гесогпгпепг1ег! Ьу йе гпапиуасгигег. 13!Зеаг!опа аге игиа11у сагпе6 оиг аГ гешрегагигеа Ьепчееп 37'С ап6 43'С ап6 Еог гипеа гапа!па ггогп ! Ьоиг го очегп!аЬг. 9. АЕгег 6!аеаЕ!оп, !пасг1чаге йе авагаке Ьу Ьеаг1па (ассог61па го йе гпапиуасгигег'я !пяггисНопх) ог геточе Ьу рЬепо1:сЬ1огоуоггп ехггас6оп. Неаг !пас!!чабоп Ь ргеЕегге6 со ачо!6 рока!Ые вЬеаг!па оЕ ГЬе ЕЗДА 6иг!па ехегасбоп млй огаапгс ао1чепга.
Нцаг!оп ог геггг!сг!оп епаугое 6!аеас!!оп оЕ гЬе ге!еаге6 1324А сап Ье сагпед оиг ш гЬе ргекепсе оЕ гЬе ааагоае гоопошегь ргодисед Ьу гЬе ааагаяе. А1гегпа6че1у, гЬе 1314А сап Ье ргес!р!гасе6 !и йе ргеаепсе оЕ 0.3 м ао6!шп асесаге !рН 5.2) ап6 2 чо!шпее оЕ Ьоргорапо!. Рго1осо! 20 Ке1пе~а1 о1 0МА ГгадгпепЬ ггогп РиЬес1-пе1д Се!~ 1о!! оъипд 1:ИМА Сопсеп1га6оп ЫА СОЫТЛ!МЕО !М Л 5ПСЕ ОГ ГОЧЧ-МНТ!НС-тгМРЕКАТГЗК1 ЛСЛЕО5Е ь Вгаг сопсепггагес) Ьу е1есггорЬогеяа (пго а Ь)аЬ-регсепгаае ааагоае ае1, апс) 1Ьеп ьо!агед Ъу ггеагшепг е61Ь ааагаае. ТЬе геаи16па Р!ч!А ргерагагюп 15 риг(Вед Ьу шкгойа!уяя ТЫа шегЬос) 15 еврее)а!1у иаеуи1 1( 1Ье яке-Егасбопа1ес) РЬ(А ь го Ъе (п!есгег) !п1о Гег611аес1 шоиае ецаа (5сЬед! ег а1.
1993) ог иаес) 1ог ггапагеспоп о( гпиппе ешЬгуопк агеш се!15 (СЬо( ег а!. 1993). ТЬе ргеаепсе оу арегш)пе ап6 арегпийпе ш 1Ье Ъийега гье6 ш 1Ыа ргогосо) ь сгис1а1 1о оЬгашша ЫаЬ гесочег)еа о( ЫЕЬ-гпо1еси!аг-ччегцЫ Ы01оа)са11у асбче Р)ч)А. ТЬе!г гье аЬои!6 Ье сопяс)еге6 ччЬепечег !ага РХА Егаашепга (>!5 )сЬ) аге го Ье Ьо1аге6 Егогп 1очч-ше!6па-гегпрегашге ааагоае. ТЬе йгесг гегпеча1 о( РЬ!А Ггош ри!аед-6е!й це15 (чч11Ьоиг ргюг сопсепггагюп) 15 деасг)Ьес) )п Ргогосо1 19. МАТЕК!АЕЬ СА!3Т!ОЫ: Р!еаае аее Аррепйх 12 (ог арргорпа1е Ьапг!1!па о( та1ег!а!а гпаг1сед чч!1Ь < 1>. Впйегв апг! Ьо!п6опв Р!еаае аее Аррепйх 1 (ог согпропепра о( а!ос)с ао1ипопа, Ьи!(ега, апд геааепгя Р!101е атос)с ао106огь 1о 1Ье арргорпа1е сопсеп1га6опя Едиг!1Ьгапоп Ьи(уег 1х ТВЕ 100 гоМ НаС! 30 иМ арепише 70 иМ арепп|йие Е1Ь!с(7игп Ьготус(е < ! > (7 щ/гп!) ог ап арргорпаге сй!игуоп оу 5увй Со!с( <! > рог а й1асиаа!ои от па!и!ив ааагоае Ее!а, р!еаае аее ргососо! 2.
lп(ее!гоп)ггапйесгуоп Ьи(уег 10 гоМ Тпа-С! (рН 7.5) О.! гоМ Е17ТА 100 гиМ ХаС! 30 ЕМ арегги|ие 70 иМ ареггиЫ!ие Епкугпев апд Войегв Адагаае Авагаае !а ача!!аЫе Ггого а пии1Ьег ог гпапигас1игега (СЕЕаае Егогп Ер!сеогег ТесЬоо! ов1ея В-Авагаае 1 Егогп Ыеъч ЕиВ!аиг! В1о!аЬа, аиг! В-Авагаке ! Егого Са!Ьгоеьеи1. 17ае гве ЬиВег аирр!!ег! ччгЬ 1Ье еигугое. 5.8б Ртогосо! 20т Кеттгеча! оЕ Р7гЕА ртацтепгвутот Ри!вег7-7че!гЕ Се!вуо!!овчтпц Р7гЕА Сопсептппюп 5.87 !г Ь спг1са1 гЬаг а!! ЬпЕЕегв Ъе вирр!егпепге8 вч!гЬ 100 гпя ЫаС!, 30 РЯ врептпе, апц 70 РМ вреггпгаше го епЬапсе гесочегу оЕ гЬе РХА. Се!ц Ни51ече СТС Ацатоье т7п!Ве7 15%) Ргераге гЬе це! чг!1Ьопг а сотпЬ апг1 ш а гарег! це! пю!й.
!ч!ос!е!с Асп!ц апс! О!1допос!ео1!е!ец РЕв7А ь7ле ьгапсЕатсЕь Р!саве вее РгогосоЬ 14 апг! 16 Еог гЬе ргерагаиоп оЕ пчо сайетепс гапцев оЕ ясапц вгапцаЫв. цгапг7агг7в сап а1во Ье рпгсЬавег! Егогп соттегс!а1 гпапиЕасгпгегв !е.ц., 14ечт Впц1апг! Вю1аЬв, В!о-цаг1, ог С!ВСОВВЫ. Сепоттпс РАЕА етЬег7гЕег7 гп Еоиг-те!!!пав-гетрегагите ацатоье р7иу Р!саве все Ргогосо! ! 3 Еог рте рагагюп оЕ гпапппа1гап 7!ХА ог Ргогосо1 14 Еог ргерагаг!оп оЕ уеавг 7!ХА етЬедг1ег7 1п р!пцв. Саггу опт 81цевг!оп чагЬ гевгпсИоп епгугпев ав г1евсг!Ъег7 ш Ргогосо! 13 оЕ гЬЬ сЬаргег. прес!а! Ес!01рочеп$ МетпЬтапеь Еог с!тор 05а7уяь Е0,05 Рт роте яхе) ТЬеве тетЬгапев аге ачаг1аЫе !тото Мг1!гроте. багет ЬаЯь ргеьег Ео 65-68 С апс7 го гетрегагите аррторпа1е Еот ацатаье с7гдеь71оп АЕЫЖооа! Кеа~епЬ 5герь 7 апс7 2 оЕ 7Ыь рго1осо1 тес!0!ге Яе теацепгь 77ьгес7 гп Ргогосо1 7т" от 78 оЕ Ягь сЬар1ет.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
