Sambrook, Russell - Molecular cloning. Laboratory manual - v.1 (522940), страница 140
Текст из файла (страница 140)
61 6.62 1 !ао1а6оп ог' Н!еЬ-гпо(еси!аг-хне|ПЬ1 0НА Г огп МапипаПап СеПь Е)ь(пц Рго1егпаье )С 6.4 ап6 РЬепо| б.2 СЬаргег б: Ргерагабоп апй Апа1уж ог Еи1сагуосзс Сепоттс УХА Се11 Р1'~А 1ат сЬе ззпеи1аг т 1гее 1аИ. 1 апс1 ту йоиЫез саггу зс аП: 61е'з Жт ио!ите зрзгаПу Ьоипй. 1сз иЬас1'т аЬоиб зйз вЬас1'т агоипй. Ргезепсе апй Ьип~егз зтЬие а зар тосе зезгБ сЬе иогИ аз сЬеу зрт Ы. 1 сеасЬ и Ьу гоге Ьис 1сз ергу соттапй и аз опсе а тисие сЬас зотесЬзпе тозе со, Ргезепсе апй1геейот ге-зеогйзп~, ге-Ьеайзп~ ззгсйпз оп а зсгапй таЬзпу1 апй 1 тоге йфегепс сЬап и е соизй зсапй.
Еез Мпггау !пггог)исгюп 6.3 р оивгв-втвлх0вг| РХА ь л ввмаххлвгч !хват снвм|сАС !га ро|епба!1у геас6че Кгоцра аге Ьипе|1 чч1|Ь)п |Ье сеп|га! ЬеЬх, Г)ег) цр ш Ьудговеп Ьоп|)я !Ь Ъаае ра)га аге рго|ес|ег) оп йе он|- я|)е Ьу а Еогт)с)аЪ|е саяпК оГ рЬоарЬагеа апг) ацвага апд аге ге)пГогсед ш|егпа)1у Ьу ягопК агас)с)пК Еогсея 'ч||1|Ь якЬ гоЬгы аЬ)е!|1)пв ап6 асаГГо1с)1пК, РХА оц|1аяа тоаг ойег )п|гасе11ц1аг соп|ропепып 1оса6опа аа 6)арагаге аа тог)егп |1ау сгцпе асепех ап|1 апс|еп| Ъцпа1 я|ея ТЬе хате сЬепнса1 г)цгаЬ111|у епбочча 11Ъгапеа оЕ депот)с РХА |ч1|Ь Ьо|Ь регтапепсе апг) ча1це, йегеЬу епаЫ)пв депе!)с епК)пеег)пд апг) ае|)цепс)пК рго)ес|я Ъо|Ь !агве апг) япа11.
Реар)ге Ьь сЬепнса1 а|аЬ))Ку, 6онЫе-ягап|)ег) РХА ь печег|Ье!еха рЬуяса!1у Егав)!е. Ьопв апг) апа)су, чч)гЬ 1)н!е 1а|ега) згаЬ111|у, Ь)КЬ-то1есц1аг-|чефЬг РХА ь чц1пегаЫе |о Ьудгог)упат)с аЬеаппК Гоген оЕйе тоаг аппо|)еаг рбп6 (р1еаае аее ТаЫе 12-! 1п СЬар|ег !2). РоцЫе-а!ганг)- ед РХА ЬеЬачеа |и ао1ц6оп аа а гап|)от со|1 йа| ы ь6йепед Ьу а|асрбпК )псегас6опа Ье||чееп |Ье Ьаае ра)га ап|1 е1есггояагк герц!яоп Ьегччееп йе сЬагвег) рЬоарЬаге роцра ш йе РХА Ъас)|Ьопе.
Нуг)гог)упат)с Г)очч — геац16пК Его|п р)ре|6пв, хЬа)с)пК, ог хг)гг)пК вЂ” депегагеа г)гаК оп йе я)ГГепег) со)1 апг) Ьаа |Ье сарасьу со аЬеаг Ьо|Ь ягапс)а оЕ |Ье РХА. ТЬе 1опвег |Ье РХА гпо!есц!е, |Ье ъчеа)сег йе Еогсе ге|)ц)ген Еог Ьгеа)саве. Оепопис РХА Ь йегеЕоге еаау |о оЬгаш ш Егавтепгед Гогт Ьц| Ьесотех ргодгеаяче1у |ноге ййкц1| |о ьо!а|е ах |Ье деяге6 |по1есц1аг |че|КЫ |псгеахея РХА то!есц!еа > ! 50 )сЬ аге ргопе со Ъгеа)саве Ьу Гогсеа депегасег) Липпе ргосег)цгеа сопцпоп!у |ье|1 |о Ьо!а|е Кепот)с РХА. ТЬе |пе|Ьо|1 деаспЬе6 ш Рго|осо! ! шчоьех г))Кея)пв ец)сагуо6с се!1а ог 6яшеа ебй ргоге)пахе К 1п |Ье ргеаепсе оГ ЕРТА !го ае|)цеагег 61ча!епс са6опа апг) |ЬегеЪу 1пЬ!Ъ|| РХааеа) апс) ао1нЬ11)хшК тетЬгапеа апг) бепашппв ргосе)па |ч1|Ь а |)есегКепг |шсЬ аа 5Р5.
ТЬе пцс1ек аси)а аге йеп рцпКе|1 Ьу рЬаае ехггасгюпх |ч1|Ь огКапк ао1чеп|я Сопгат1паг)пК КХА ь е1)т)пасе6 Ьу г)1Кеаг)оп гчКЬ ап КХахе, ап|1!очч-аппо!есц!аг-ччефЬг ацЪяапсеа аге геточе|1 Ьу йа1уяя ТЬ)а те|Ьог) сап Ье аса1ес) |о у!е!г) агпоцпь оЕ РХА гапрпв Ггогп 1е|ыЬап |еп |о тоге |Ьап Ьцпдгей оГ т)сговгата оГ РХА. Но|чечег, аЬеаппК Еогсеа аге Кепегасес) а| ечегу агер, |ч)|Ь йе геац!г йа| |Ье РХА то!есц1ех ш йе Кпа1 ргерага6оп гаге1у ехсеег) !00 — !50 )сЬ 1п !епв|Ь. РХА оЕ |Ь)а яхе ь аг)е|)пасе Еог 5оцйегп апа!уяа оп агапе)агг) арагоне Ке!я аа а |егпр1а|е )п ро1утегахе сЬа)п геас6опа !РСКа), апд Гог |Ье со|ыгцс6оп оЕ Кепот)с РХА 11Ъгапеа |и Ъас|епорЬаве ). чес|огя ТЬе хцссеххГц1 сопаггцс6оп оГ 11Ъгапеа )п ЫКЬег-сарасьу чесгогх апг) йе апа1уяа оГ Кепот)с РХА Ъу рц!аег)-ГгеЫ де! е!есггорЬогеях ге|)ц)ге РХАх >200 1|Ь |п яхе, |чЬкЬ аге |че11 Ъеуопд йе геасЬ оЕ те|Ьобх |Ьа| Кепегаге яКп)Е|сапг Ьу|!годупат)с хЬеаппК Гогсея Рго|осо1 2 деаспЬеа а те|Ьог) Еог 1ао!аг)пд ап|1 рцг)Еу)пв РХА |Ьас Кепегагеа то1есц!еа оГ а яхе |ш)гаЫе !ог гЬеае арес)а1|хе6 ригроаея Ап а!сегпабче те|Ьог) Еог ргераг)пК Кепот)с РХА ш аКагоае р!нва ь йеаспЪе|1 ш СЬарсег 5, Ргососо1 ! 3.
1п |Ь)а сЬар|ег, |че а)ао |1ехспЬе |чауа |о Ьо1а|е Кепот)с РХА Ггогп ййегепг аатр1ех оЕ се1!а ап|1 г)хацеа !Ргососо! 3) апд Ггот тану хатр1еа Кгогчп ш пнсго|нег г))аЬеа (Ргогосо! 4). 0|Ьег ргососо!а |ГеаспЬе йе ргерагабоп оГ РХА !гоп| |по|ье га1!а (Ргогосо! 5), йе гар)г) ьо!а6оп оЕ тапцпа1|ап РХА !Ргогосо! о), ап|1 |Ье гар)г) Ьо!а6оп оЕуеахг РХА (Ргогосо! 7). р)паПу, гче деаспЪе Ьочч |о апа!ухе рцпйе6 депот)с РХАа Ьу 5оцйегп Ыогбпв апг) ЬуЪг)г))хагюп !Ргогосо1а 8 |ЬгоцКЬ !О). Хосе а!ао йа| а пшпЬег оЕ сопцпегс)а1 )с)гх аге ача|!аЫе Гог рипЕушв Кепот)с РХА.
Рго1осо! 1 Ьо!акоп ог Н~дЬ-то!ест!аг-юе~дЬ| УМА 1гот Магпгпа!!ап Се!!ь 0япд Рго1е!паэе К апс! РЬепо! т н5 раосюГ)ае 5 088!чсо ухом л метноо оа!с!НАГсч деяспЬед Ьу Рагу! 5гаЕЕогд апд со1- )еа8иея (В)1п апд 5гаЕЕогд !976). 1г !я йе гпегЬод оЕ сЬоке реп !агре ашоипгя оЕ шапппа1!ап Р)ч)А аге гес)шгес1, Еог ехашр1е, Еог 5оийегп Ыопш8 (Ргогосо1 8) ог Еог сопяггис6оп оЕ Вепошк 1!Ьгапея ш Ьасгег!орЬа8е )с чесгогя (СЬаргег 2, Ргогосо! 19). Арргохппаге1у 200 )ГВ оЕ шашша!!ап РХА, 100 — 150 1сЬ гп 1епцгЬ, !я оЬгашед Егош 5 х !0~ си1гигег! апеир)о!с) се1!я (ей., Не|а се!18). ТЬе ияиа! у!е)д оЕ РХА Егогп 20 гп1 оЕ поппа1 Ыоод !я -250 )г8.
А1! оЕ ГЬе гпасепа18 1!пес! Ье!очч аге гес!шгед Еог рипВса6оп оЕ гпапппайап Вепопис Р1МА, !ггеярес6че оЕ гЬе гуре оЕ яашр1е. Адйгюпа! гпагепа18 йаг аге пеес)ес! 1ог раг6си1аг гуреь оЕ ьашр!ея аге 1!ягес) ипдег ГЬе яиЬЬеадя Еог йе Еоиг 5гер 1 шегЬос)я: !уыя оЕ се118 цгогч!08 ш шопо!ауегя, !уыя оЕ се1!я Вгочч!08 Гп ьиярепьюп, 1уыя оЕ 6яяие яашр!ея, апс! )уыя оЕ Ыоог! се1!я ш ЕгеяЬ1у дгаччп ог Егохеп яагпр!еь.
МАТЕК!АЕй СА()Т1О(ь(: Р1еаье ьее Аррепг(!х 12 Еог арргорпа(е ЬапгИ!па оГ та(ег!а1ь таг)гег( гч!ГЬ <! >. А ьь)АКЫ!МС Ргипаге г!ььиеь апд ргипагу сиаигеь оГ сеПь гес(и!ге ьреоа) Ьапд))п8 ргесаи6опь. ВНЕЕегя апс! йо!66опя Р1еаье ьее Аррепд!х ! Еог сотропеп!ь оЕ ыос(г ьо)и6опь, Ьи((егь, апг) геааеп(ь. Р!1и!е ь(ос)с ьо1и6опь го ГЬе арргорпа(е сопсеп(га6опь. Аттотит асегаге (70 и) (ияед ая ап а)гегпадче Ео д)а)уь)я, 5гер 9) Р)а!уь)ь Ьийег (иьед ая ап а)сегпадче го еГЬапо! ргес)р)садоп, 5гер 9) 50 гпм Тпя-С1 (РН 8.0) !О гпм ЕГ)ТА (рН 8.0) Ргераге (оси !оп о(4 !Вел о! йа!уяь яо!одоп апг( ягоге аг 4 С.
Ейапо! Гияед аь ал аlгегпагсче Го д)а)уь)я, 5гер 9) /уя)я ЬиЕЕег Г0 гпм Тпь-С! (РН 8.0) О.! м ЕГ)ТА (рН 8.0) 0.5% (и)ч) 5Р5 20 08)ш! Рнаье-Ггее рапсгеагк КХаяе ТЪе Вгяг гЬгее !п8гейепгя оГГЬе 1уйя Ъиу(ег гпау Ъе гйхеа !и аачаисс апа ьгогег( ас гооп1 сешрегагиге. КХаье и аббес) го ап арргорпасе апюипг оГ ГЪе ппхюге )ияг Ъе(оге ияе. Аг)8)пя Кнаье го ГЬе 1уьа Ъи(уег Ргогосо! 1г Тьо!а))оп о) Н)еП-то!еси)аг-яче)еП)РНА)я'от МаттаВап СеПь Е)я)пП Ргогетаяе Каис) РПепо! 6, е!ип!пасся йе пеес) го геточе КХА Вопя запирая)Всея) Е)74А аг а 1агег ягаВе гп 1Ье ргерагаВоп. Рапсгеагк Кразе Ь пог ЫВЫу асгйе ш йе ргезепсе о)0.5за 5й5, Ьиг ъчЬеп асЫед аг ЬгВЬ сопсепггаВопз, К тчог)ся ъче11 епоиаЬ го с)ецгас)е пюзг о) йе сеПи1аг К)4А. РПело), ес)иП)Ьга)ес) чч))П 0.5 Ь) Тг)ь-С) )рН 8.0) <1> А 1МРОКТАЫТ ТЬе рН о) 1Ье рЬепо) гпияг Ье — 8.0 1о ргечеп1 О)я)А ) огп Ьесогп)пд 1гаррес) а1 йе )п1ег)асе Ьегччееп 1Ье огаап)с апс) ас)иеоия рЬаьея )р!еаяе ьее Аррепйх 8).
ТЕ )рН 8.0) Тг)ь-Ьийегес) ьа)те )ТВ5) Епкупье5 апс! Войе15 Рго)е)лаье К )20 тВ)тП Рог 1!из ргососо1, яче гесошпяепс) 1Ье изе о) а репою)с цгада ргоге1пазе К гЬаг Ьаз Ьееп зЬоячп го Ье )гее о) Лабазе апя) КХаье асичиу. Р1еаяе зее Аррепйх 4. Се!5 Ри)ьес)-Йе)с) Ве) )р)еаье ьее СПар)ег 5, Рго)оео)ь 77 алс) 78) ог Солчелпола) Поохал)а) 0.67' аВагоье Пе) )СПар1ег 5, Рго)оео) 7) Сеп$1!7оее5 апЕ! РоТо15 5огчаП еел1пуиВе чч)1П Н70008 алс) 55-34 го1огь (ог )Пе)г едииа)ел)ь) ! Ецо!рпьепТ Си)-оП уеПочч Врь Сиг-о)) уе1!ояч Вря сап Ье цепегагес) гарЫ1у чагЬ а ясашш ог а с)о8 паг! с1гррег )е.В., РЬЬег 05-401А).
А)гегпаВче!у, 1Ье ро)пгея) епсЬ о) йе Вря сап Ье чашечек яч)гЬ а яЬагр сапог Ыас1е. ТЬе сиг-оП Врз яЬои!8 Ье язеп!гхес) Ъе)оге ые, еиЬег Ьу аигос1ач)па ог Ьу ипгпегзюп гп 709Ь а!соЬо! )ог 2 пппшез )о1- !оячес) Ьу с$гу)пВ ш а)г. А1гегпагйе!у, ргезгег)1)хес) чгЫе-Ьоге Врз сап Ье риге!газес) )гош а пшпЬег о) сопипегсга1 сопграшез )е.8., Вю-Кай. О)а)уь)ь 1иЬ)лВ сПрь 5рессга Рог с1ояигея Вогп 5ресггшп Мейса! 1паыгпез, Ноиягоп, Техая. Кос)с)лВ р)а)гогт ог Р)а)уь!ь )иЬглВ Ргерагес) аз с)еясг)Ьес) )п Аррепйх 8.
5ПерПегс)'ь сгоо)сь (пьес) аь ал аИегла1гче 1о сПа)уь)ь) 5ЬерЬегсрз сгоо)ся аге Раягеиг ргреиея ячЬояе ггр Ьая Ьееп яеа1ес) гп гЬе Вагпе о) а Випяеп Ьигпег апс) яЬарес) шсо а Н яч)гЬ а Ьепюзгаг. Ъчеаг яа)егу а)аззея яч)81е пю!йпь йе 5ЬерЬегйз сгооЫ. Рог )ЬггЬег гп)оппаВоп, р!еаье яее 51еря 5-7 о) Ргогосо! 5. 5рее1горП01оте)ег ог Ниоготе)ег ТиЬе т)хег ог ВоПег аррага)иь Маеиит аьриа1ог ес)и)ррес) яч)1П 1гарь И)а1ег Ьа1П, ргеье) )о 50 С Иг)с)е-Ьоге ргреоеь )0.3-ет сПате)ег олпее) ьчЫе-Ьоге р1репея аге ачаааЫе )гопг яечега1 спали)асгигегя.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
