Sambrook, Russell - Molecular cloning. Laboratory manual - v.1 (522940), страница 146
Текст из файла (страница 146)
2. 1исиЬасе йе сиЬе очегшВЬс ас 55"С ш а Ьопгоиса! роясюи ои а гос)с(и8 р1ас(опи ог ъч(СЬ а8!Сасюи ш а 5Ьа)с)п8 |псиЬасог. !с |з ииропаис йас йе загар!е Ье пихе6 або|)пасе!у 6иг!п8 6!Везс!оп. АЕсег очеги|ВЬс шсиЬабоп, СЬе испие/саПз зЬоиИ ио 1ои8ег Ье сбяЫе аи6 сЬе Ъи((ег зЬоиИ Ье а шП)су-8гау. 3. А66 аи ес)иа! чо!шие оЕ рЬеио!ссЫого(огтс!зоату1 а!соЬо!, зеа1 СЬе сор оЕ СЬе сиЬе, ап|! р1асе Ь ои а гос)с|и8 р!ас(опп Еог 30 пнпшез ас гоосп сетрегасиге.
Ргососо1з ГПЕЕег |и сЬе|г изе оЕ чогсехш8 ас чагюиз зса8ез оЕ сЬе ргососо1. Во|не ргососо!з |гасе Пас1у пос со чогсех. Ойегз зау йас чогсех|и8 епзигез а Вгеасег у|е16 оЕ Р)4А согирозе6 оЕ Ега8гиепи ир со 20 ЕЬ!п !еи8й йас саи Ье Песессед Ьу 5оисЬеги ЬуЬг!ГПгас|оп, 6ос аи6 з!ос Ыосс!и8, аи6 РСВ аиа!уяз, !Е РЪСА о( ЫВЬег |по1еси1аг |че|ВЬс и ге|)и!Себ, са1|е саге со пни|инге зЬеаг!и8 Еогсез (р!еазе зее СЬе ш(опиасюп ране! ои МГЫ!М!2!ЪСС РАМАСЕ ТО САКСЕ РЪСА МОЕЕСРЕЕ5 |и СЬарсег 2). 4. 5ерагасе СЬе ог8апк аид асраеоиз рЬазез Ьу сеиспуи8ас)ои. СеиспЕи8е СЬе затр1ез |и 17 х 100-пнп ро!ургору1еие СиЬез аг 6668 (1800 грт !и а 5огча11 Н1000В гогог счсСЬ знбп8)и8 Ьис1|есз ог 1600 грги !и а 5огча1! 5Н-3000 зсч)и81и8 Ьис1сеС госог) Еог 5 пииисез ас гооги сесирегасиге.
А1сегиаВче1у, Еог яиа11ег затр!е чо)итез, сепсг!Еи8е сЬе затр1ез |п писгой8е СиЬез аС п|ахииши зрее6 сог 5 гшиигез аС гоот СетрегаСиге т а ткгоси8е. ТгаизЕег СЬе иррег ас)иеоиз рЬазе со а ЕгезЬ Ра!соп ог тссго(и8е шЬе. 5. Ргес|р|гаге СЬе ЕГЬА Ьу а6ВПи8 аи ес)иа! чо1шие оЕ )зоргораио1. Со1!есг СЬе ргес|рЬаге6 Т)ХА Ьу сепгп(и8аг)ои аг 13,2508 (8000 гри| |и а 5огча!1 5Н-3000 зсч)п8108 Ьис1сег го1ог ог тахииши зрее|1 |и а иисгоси8е) Еог 15 пнписез ас 4'С. 6. Саге(и!1у ген|осе йе )зоргорапо1. В)пзе йе реПес оЕ Т))х)А нбсЬ 1 гп1 оЕ 70ого ейапо1.!Е йе ре11есз аге 1оозе, сеиспуи8е йе заиср1ез а8а!и Еог 5 ипписез. Вепюче СЬе 7058 есЬапо1, аи6 а1!осч СЬе ре11егз Со |1гу !и а!г Еог 15-20 ппптез аС гоот СегирегаСиге.
Ро иос аПо|ч йе РЪСА реПесз со Пгу сои|р!осе!у ог йеу нлП Ье чегу 6!Йки!с со ГПяо!че. 7. Ес)5501че йе пис1ек ас!6 ре!!ег Ьу гос)с)и8 Ь Вепг!у очегш8ЬС ш 0.5 т1 о(ТЕ (рН 8.0) аС 4"С. В. Тгаиз(ег СЬе 50!иСюп Со а т)сгоЕи8е СиЬе аид згоге |С аг гоот Сетрегагиге. ВеСи ееи 100 р8 аи6 250 И8 о( 8епоинс РГ(А !з сур|саПу |ю!асе6 Егоги ! сги (-100 ш8) о(|ноше саП. ТЬе а|Ы!6ои оЕ Ъочше зепии а!Ъипии ас а сопсеисгасюи оЕ 100 П8(ш! со гезсгкс|оп епгуп|е ГП8езсз оЕ Вено|и!с РЪСА ргераге6 Ьу йЬ шесЬод нлП аЬзогЪ гея6иа1 5Р5 аи6 гедисе сЬе розя- ЬП!су оЕ |исои|р!есе е88езс|опз.
!Е ргоЫепп реги|с, ге-ехсгасс сЬе зашр1ез опсе и|иге |ч|й РЬеиоЪсЫого(огги аи6 ргес|риасе сЬе РВА члсЬ 2 чо!шиез оЕ ейаио!. инсюун8е иисгоун8е 17 х !00-ини ро1ургору!еие 17 х 100-иии ро!ургору!епе 0.5 05 4.0 4.0 6.26 СЬарсег 6: ргерагас(оп апд Апа(уж о~Еийагуос(с ъ епот(с РИА АЕТЕКМАТЮЕ РКОТОСОЕ: 35ОЕАТЗОМ ОГ ОМА ГКОМ МО()5Е ТА(Е5 ъ8(3ТГ3 ЕХТКАСТЗОМ ВУ ОКСАМЗС 5ОЕЧЕМТ5 Са)п( ес а!. (1991) деьспЬе а чапабоп о( Фе ргесед(пц ргоСосо! СЬа1 доеа по( гес(и(ге ехСгаой пойсМого(оггп аид сап аВо Ье аррйег! 1о пъапъпъайап се(В цгоъчп (и 24-ъче(! си(Сиге йейеа Аддсссоиа! МаСейа!8 )чоиъе-саг( (уъ)8 Ьи6ег ( 100 пъм Тпь-С! (рН 8.5) 5 гпм ЕОТА (рН 8.0) 200 гпм ХаС! 0.2% (вМ 505 100 Нй(гп! ргосе)паке К Ме(Ьод 1.
Адд 0.5 гп! о(Монне-са(! (уа(ь Ьи((ег ! 1о 1 сгп о( гпоиае са(! (п а пнсго(иде СиЬе. 2. О!йенс 1Ье 1388ие ас 55'С ая девсг)Ьед (п 51ер 2 о(СЬе гпа(п ргососо!. 5. 5ЬаКе Сйе д(дев(ед хаги р(е ч(дигона(у, апс! сеп(г)(иде Сйе СиЬе аС гпах)пвпь Вреед (ог 10 пъ)п 1егпрега(иге гп а гп(сго(ице 1о ьед(гпепс ипд(цевсед 1)хъие. 4. Тгапъ(ег 1Ье ьирегпасапс со а (геей гп(его(иде сиЬе сои(а(п(пц 0.5 гп3 о( 3юргорапо3 ас гоогп М)х (Ье сопсепсъ о( (Ье сиЬе Ьу (пнегъ)оп. 5. Гь)ь оис 1Ье Кппйу ргес(рйасе о( ОМА ъч(Ь а с(еап д(ьроааЫе пнсгор(рес(е йр ог а 5Ьер Впейу СоисЬ СЬе ргес(р)(а(е 1о а К)пъъч(ре Со гепюъе ехсеаа а(соЬо! апс( дъеп Сгапъ(ег СЬе 0 гп(его(иде сиЬе. 6. 5соге дъе ореп сиЬе оп сЬе ЬепсЬ ипй (Ье гегпа)и(п5 а(соЬо! Ьаь енарогасес!. 7.
0(еао(че Сйе ОМА (п 200 — 500 и! о(ТЕ (рН 8.0), Ьу гос(дпд 31 цепс(у очаги)5ЬС ас 4'С. ТЛе у)е)д о( ОНА июайу чаг)еь (гоги 5 1о 12 нй)гпгп о( гпоисе сай. АЕТЕКМАТЗУЕ РКОТОСО30 ОМЕ-Тс)ВЕ 35ОЕАТЗОМ ОГ ОМА ГРОМ МООВЕ ТА Соиье ес а!. (1994) Лане деасг(Ьед а гпесйос( Ьаьед оп еагйег чюг(ь о( ТЬогпаа ес а!. (1989) СЬас ех(гасйопа ъч((Ь огцайс Во(чеп(8 Со ех(гас( ОМА (гоги гпоиье са)38; СЬе ьагпе гпе(Ьод сап Ье аррйед гпайап се)38 Вгоъчи (и 24-ъче)! си(Сиге сйейеа 5епа! ехсгасйопа июа((у гес)и(ге сгапьтег о( СЬе ас)иео со (гееЛ сиЬеь — а ргосеъх сйас сап Ье (епд(Ьу апд Ьог(ий. ТЬеае д(ьадчапсацеь сап Ье очегсогп ьегигп яерагас(оп сиЬеь (55Т), ю(с! Ьу ВесСоп 0(с(дпюп.
ТЬе сиЬеь аге гпаде о( а д!аы, ъч)(Ь аи )и ас (Ье Ьаъе апд а яйсоп гиЬЬег ьсоррег. Оиппй сепсг((ицасюп, сЬе де! р(ий гп(йгасеь со сйе сор о( рЬаъе, (сарр(пд сйе се((йаг ргосе(па апд с3еЬгь )п сйе (оъчег рагс о( сйе сиЬе апг! (еан(пц СЬе аг(иео оп дге сор о((Ье р(иц, 5епа! ехсгасс(опх ъчЬЬ остап(с ао(ченгун сап Ье сагпес! оис )и СЬе нагие 55Т Ь це! р(ид ъч(П а)Ьчауа гп)вегасе диг(пц сепсгй здайоп 1о а роа)сюп Ьеьчееп (Ье огцапгс апс! ас(иеоиь р Адд313оиа! КеаВеп18 сАЕ)тсОМ: Рсеахе нее Аррепйх 12 (ог арргорпа1е Ьапдйпй о( гпа1енаь пъагйед ъч(сь <)>. Есйапо( СЬ(ого(оггп < ! > Моихе-1а(3 (у88 Ьи((ег П 50 гпм Тг)ъ-С! (рН 8.0) 50 гпМ ЕОТА (рН 8.0) 0.125)ь (ъч(ч) 505 800 НВггп! ргосе)паье К 5огйиги асеСасе (3 м, рН 6.0) 55Г сийеь (Вессоп О(схгпюп) МесЬ од 1.
Адд 1.0 гп! о(Моиье-са(! (уъ)ь Ьи((ег П со 5 пъгп о( гпоиае са(! (и ап 55Т 1иЬе. 2. О!йенс (Ье 1!ание онеги(5ЬС а( 55чС аъ деьспЬед (п 5(ер 2 о(СЬе пъа(п рго1осо!. (Сонг)линд оп (ас)пц райн.) Ргогосо!51 Ргерагаг(оп оу'влепит|с Т)ХА (сот Моиле Та1(л апд Огйег 5та(1 $атр|ел 6.27 3.
АгЫ 1 гп| 01 рЬепойсЫого1оггпйьоагпу| а|сойо| апд гп|х |Ье соп(еп(6 о1 1Ье ПлЬ 3пчега(оп. 4. Сеп1г)(ице (Ье 1иЬе а1 20005 (3100 гргп 3п а 5огчай Н10008 го1ог) 1ог 10 ги(пи(еа а аь (пй(пй Ьис(ге( го|ог. Ререа| (йе сеп(г((иеа((оп 6(ер й |йе ас)иеоиа рйаае 'ь с|оиг3 (е3п 3п(ег(асе гегиа(па |гаррес1 аЬоче Ьйе р(ид. 5. То |йе багие (иЬе, адд 1 гп| о(сЫого1опп аид гесеп(г)(ице аа деасг(Ьед |и 5|ер 4. 6, Тгапа(ег 450-0! а)(с(ио(6 О1 1Ье аг(иеоиа |ауег аЬоче лйе р(ий 1о Ьчо гп(сго1ийе 10Ьеа Соп(а(п)пд 50 и! о1 3 М аид(игп асе|а1е (рН 6.0). ТПе иле о| лед(ипл асела1е а| рН 6.0, гагЬег 1Ьап рН 5.2, 8 ипиюа|.
ЕОТА ь иьед )п йле (уы Ьийег аг П(ИП соисеи(гал(ои (1 00 тм) аид ь(33 ргес(р(1аге а1 (олч рН. ТЬь рюЫет саи Ьеьл Ье ачолдед Ьу гпа|пийапи а рН >6 0 ьлд Ьу ьогй(ий <|Ысй|у диипй 5(ерш 6 апд 7. А|1егпайче|у, 1Ье сопсеиггалюи о( ЕОТА )п 1Пе |уйа Ьийег гиау Ье гедисед 1о 20 гим. Ноънечег, 1Пь гпау гю1 Ье епоийП 1о сПе|а!е ай оНПе Мйл |и (Пе лаплр)е, |еамий 1Ье ОП(А ореи 1о аиасй Ьу ОНавея.
7. АгЫ 2 чо)игпеа (0.9 гп|) о1 ейлаио! (гоогп |егпрега(иге) |о еасЬ 10Ье. ЧгогЫпд г(и)сЫу, пйх |Ье соп1епа о1 |Ье |иЬе Ьу |пнегяоп апс| (гигпед)а(е(у сеп(с|Елее (йе 3 иЬе а( тахлгпигп арЕЕд 1ог 5 гп(пи(еа а( гоолп 1еплрега1иге |п а гп(его(ице. 8. Ч(ааЬ 1Ье рейс(6 о1 ОП)А ъч((П 70% е(Ьапо( апд гесеп|пййе, Кегпоче |Ье е|Ьагюйс 60301)оп Ьу аврта|юп апг| Ч(еаче (Ье ореп (иЬеа оп 1Ье ЬепсЬ ип(33 апу гегиа)и(пц е(Ьапо1 Ьаа ечарога(ед.
9. ОьаоЫе йле ОНА 3п 250 и! о1 ТЕ (рН 8.0) Ьу гос(г(пд 31 ееп1(у очегп)йП1 а| 4'С. ТЬе у|еЫ о( ОП)А 'ь илиа)(у 10 Ифпгп о1 илоиле гаИ. АЕТЕКЬ(АТ|ЧЕ РКОТОСОЕ: Е)Ь)А ЕХТКАСТ!ОЬ( ЕКОМ РАКАЕЕ!Ь) ВЕОСК5 АгсЫна| 1(еьие 'ь ойеп гьед ах а аоигсе ог' ОНА 1ог ййе Ыепбйса|юп о1 гпи(а((опа |и Ьигпап йепе((с сйаеааеА |и раг| Ьесаиае агапе аатр)еа аге сойес(ед диг(пд а биге(са! орега|юп апс1 йхес1, 6|а(иед, апд 6(огед Ьу ра(Ьо!ой(616. А(1ЬоийЬ СЛеге аге а пигпЬег о1 риййса|юпх (Ьа( согпраге д(йегеп1 гпе1Ьода 1ог 1Ье ех|гасйоп | о( ОП(А 1гогп рогачи Ыос|ь (е.ц., р)еаъе аее 5ерр е( а|.
1994), иле Ьаче 1оипд |Ьа( 31 'ь Ьеа( |о иае опе о1 (Ье ' сопхпегс|ай у ачайаЫе Ы(6 1ог ОП)А 'ьо|айоп 1гогп рагай|п-егпЬеддед 1)еьие. К|Ы (гоги (п(егцеп (ЕХ-Ч(АХ ОНА Ех(гас|юп К31) Лане ргслчеп |о Ье ей)с(еп( а1 ех(гас|юп о1 ОП(А 1гогп 1ьииеа 1Ьа1 Ьаче Ьееп егпЬесЫед лог аа (опд ач 17 уеаги. 0|Пег (пче61)йа(ога Ьаче герог(ед Епе 360(а((оп о1 ОНА (гоги пюсЬ оЫег рагай|п ЫосЫи ТЬе ех|гас(ед ОНА 'ь Ь|ф|у дейгадед апд 'ь иае(03 оп|у аа а 1елпр|а1е |п РСКК Рго1осо! 6 КарЫ! ьо!акоп о1 Магпта! ~ап 0МА м лммлплсе ОНА рве лкео лссоаосссс то тнсь ркотосог Н 20 — 50 ЕсЬ !и яге апс( ьшсаЫе Еог пье аь а !егор(аге Еп РСссь. ТЬе у!е!6ь оЕ !3ХА чагу Ъе(счееп 0.5 апс( 3.0 Есцйп8 6ььне ог 5 апс( 15 ссц рег 300 Ес! оЕ счЬо!е Ыоос(. МлтЕВЕАЬ СА(1Т1ОЬ(: Р!еаье ьее Аррепб!х 12 Еог арргорпа1е Ьапс(1(пе оЕ спа1епа1ь псаг!сес( сч!1Ь <! >. ВНЕЕег5 апс! Бо!пбоп5 Р!еаье ьее Аррепб!х 1 Еог согпропеп(ь оЕ ь(осЬ ьо1и6опь, Ьи(Еегь, апсЕ геаеепсь.
О!101е ь(осЬ ьо!п1гопь 1о ЕЬе арргорпасе сопсепсга6опь. СеП Еуь(ь ЬиЕЕег 10 гим ТгпеС1 (рН 8.0! 1 шса Етстл (рН 8.0! 0.19а ('м(ч) 5Р5 5соге сЬе Ьи((ег ас гоош сешрегасиге, Ьнс с!611 ап а1(с!нос со 0'С ш геас((пеьь Еог 5сер 2. ЕЕЬапо( Еьоргорапо( Росаььсит асесасе ьо(и6оп 60 ш1 оЕ 5 М росаюшп асесасе 11.5 ш( о( 8(ас1а( асес1с асИ <! > 28.5 гп( оЕН О ТЬе геаи16и8 ао1ипоп 1ь 5 м гпсЬ геьресс со росаьяшп аиг( 5 м часЬ геьресс со асесасе. 5соге сЬе Ьиттег ас гоош сешрегасиге.
Реегт Ыоог( сеП 1угаь Ьиутег 20 пог Тпь-С1 (рН 7.6! 5соге сЬе Ьит(ег ас гоогп сешрегасше. ТЕ (рН 7.6) Епкуспеь апс! ВНЕЕег5 01 (аье-Егее ЯМаье (4 т8ст0 Ргосе(паье К (20 т8(т(! Орг(опа!, р1еаье ьее гаер 5 анги Аррепйх 4. 6.28 Ргогосо! б: РчарЫЕьо!аг!оп о!'Матта!Еап РХА 6.29 Брес1а! Ецсс1рсссепс Аьрсгасгоп с)еисе соппесСег! Со а насиит йле М!сгоЕиае реьг!е ТЬль Ь ачас1аЫе йога 515пла !и Ъпй Ьапп-орегасеп' апб гпоспг-дпчеп чегяопь. Моггаг апс! реьС!е, ргесЬ!!!ес! ън!СЬ !!с!и!г! пЕСгоаеп <!) Яагег ЬаСЬ ргеьег Со е!йег 55"С ог 65'С СеП5 аслс! Т155ссе5 Матта!!ап бььие ог чнЬо!е Ыоос! оЕ тсегеьс МЕТНО0 1.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
