Sambrook, Russell - Molecular cloning. Laboratory manual - v.1 (522940), страница 150
Текст из файла (страница 150)
ТЬегеЕоге, гсериг!пас!оп Ь Ьеьс ачо!оса ьчЬеп сЬе яхе оЕ сЬе сагаес Егаашепсь я <20 1сЬ, Ноьчечег, Еог 5оисЬегп апа!уяь оЕ Ь!аЬег-шо!оси!аг-сче!аЬс РХА ьерагасесС Ьу сопчепиоиа1 ог ри!ьегС-Есе!о е!ессгорЬогеяь, с!ориг!пассии/и!сСсспа !ь аачсьаЫе, П пос еяепиа1. 7. Репасиге сЬе РХА Ьу ьоаЫпП 1п а с)епасиппП (аПса!1пе) ьо!иПоп аь ЕоПосчгс 1 ОК ТКА!чС5ЕЕК ТО ОНСНАКСЕР МЕМВКА!чСЕ5 а. 5оа)с сЬе Ве! Еог 45 пиписеь ас гоогп сетпрегасиге ш 10 Пе1 чо1шпеь оЕ с)епасигасюп ьо1исюп сч)сЬ сопЯапс сепг!е аеПсаПоп (е.ц., оп а го!агу р1асЕопп). Ь. К)пье СЬе Пе! Ьпейу )п с)еюп)хес) Н О, апг1 йеп пеигга!ые П Ьу ьоаЫпП Еог 30 пипиСеь ас гоотп сегпрегасиге ис !О ае! чо!шпеь оЕ Ь)еисга!пас)оп ЪиЕЕег 1 чч)сЬ сопьсапс аепс!е ациапоп.
СЬапке сЬе пеисга!схапоп ЪиЕЕег апг) сопЬпие сюаЫпП сЬе це! Еог а 6сгсЬег 15 пипигеь. ь ОК ТКА!чСВГЕК ТО СНАКСЕР ЬСТЕОЬС МЕМВКАНЕ5 а. 5оа1с йе Ве1 Еог 15 пиписеь ас гоопс сепсрегасиге 1п ьечега1 чо1шпеь оЕ аПса1ше сгапьуег ЪиЕЕег ьч)сЬ сопьсапс деиг)е аП)сас)оп (е.к., оп а го!агу р1асуогтп). Ь. СЬапПе йе ьо1иСюп апс1 сопПпие Со ьоа1с СЬе Пе! Еог а 6пйег 20 пипиСеь сч)СЬ ПепС!е аП1- саиоп. !Е йе Ве! Яоась со йе шгЕасе оЕ сЬе 1и!шй ьче!ВЬ !с гсоьчп чЬЬ ьечега! Раьсеиг р!реиеь. 6А4 СЬартет 6: Ртератаг)оп апд Аиа1ув)в оу'ЕиИатуос)г Сепот)е ТРА Ргерага6оп оЕ йе )ч1еспЬгапе тог Тгапйег 8.
Уве а СгевЬ вса!ре! ог а рарег сиссег со сш а р!есе ог" пу!оп ог ппгосе!1и1ове шешЬгапе -1 пип 1аг8ег йап йе Ке1 ш еаеЬ д)гпепыоп. А!во сис ссчо вЬеесв оу сЬк)с Ыосдпц рарег со сЬе ваше яхе ав йе шешЬгапе. А СмРОКтАсвст С)ве аррторпасе 81очев апд Ыипс-епдед !отсерв (е.8., м11!!роте !отсерв) со Ьапд1е йе тетЬтапе. А тетЬтапе йас Ьав Ьееп соисЬед Ьу ос!у Ьапдв ъч!П поС ччесс 9. Р1оас йе гпешЬгапе оп йе витусе ог" а д)вЬ ог" деюп)хед Н О ипс1! К ччесв сошр)есе1у агою Ьепеай, апд йеп ипшегве йе спешЬгапе ш сЬе арргорпасе сгапвгег Ьийег Еог ас 1еавс 5 пиписев.
Т)ве а с1еап вса!Ре1 Ыаде со сш а согпег Егосп сЬе шешЬгапе со гпассЬ йе согпег сис сгош йе 8е!. ТЬе гасе ас вчЬссЬ Йгвегепс ЪассЪев ог пагоее1!и!ове гпетпЪгапев вчес чапев епоггпот1у. 1г сЬе тпеспЪгапе Ь пос васигасед агсег ССоасСпд Гог вечега1 пиписев ап Н,О, и вЬои!д Ъе гер1аеед чдсЬ а пеъч тетЪгапе, ыпсе сЬе стаивает оу В14А со ап ипечеп!у вчессед тетЪгапе ь ипге!саЫе. ТЬе оправ! гпетЪгапе вЬои! д Ъе еЬЬег даеагдед ог аисос1ачед Еог 5 пипиеев Ъеичееп рсееев ог ЗММ рарег сЬас аге васигасед чдсЪ 2х 55С. ТЬЬ сгеаипепс шиа11у геви!св сп сотр1есе вчессспа.
ТЬе атос!ачед гпегпЪгапе, вапсЪчтеЬед Ъепчееп сЬе аисос1ав ед ЗММ рарегв васигасед вчссЬ 2х 55С, тау Ъе Когес! ас 4'С т а веа1ед р1авде Ъаа ипд! пеедеес. ССпечеп вчессспа Ь пос ита11у а ргоЫегп вчЬЬ пешга! ог сЪагаед-ау!оп тетЪгапев. А55еспЫу о1 йе Тгапйег АррагаТсс5 апсс ТгапМег о1 ТЬе О!5)А атеиста! сгапвгег Ьиууег (10х 55С ог 10х 55РЕ) 1в овес! со сгапвгег Т2ХА со ипсЬаг8ес1 шешЬгапев. АПса!!пе стаивает Ьиггег (0.4 Ы ХаОН чч)сЬ 1 М ХаС1) св ивед со ггапвЕег Тс!чА со сЬагдед пу1оп шешЬгапев. 10.
1АтЬ1!е йе )вс 1А )в депаСипп8, р1асе а рсесе оу СЬ)с!с Ыогг!п8 рарег оп а вЬеег оу Р1ех)8!ав ог а 81авв р1асе со !опп а виррогс йас 1в 1оп8ег апс1 чч)дег сЬап сЬе 5е1. ТЬе епдв оу сЬе Ыосс)п8 рарег вЬои!д сЬ.аре очег сЬе ед8ев оГ сЬе р!асе. Р!асе сЬе виррогс !пвЫе а 1аг8е Ьа)е)п8 д!вЬ. ТЬе виррогс сап Ье р1асед оп сор ос !оиг пеоргепе всоррегв со е1ечасе Ь Егош йе Ьопогп оЕ йе д)вЬ. (Рог ап ехаспр!е оЕ а сар81агу Ыог, р1еаве вее Р!8иге 6-1.) 11. И! сЬе д)вЬ чч)сЬ сЬе арргорпасе сгапвуег Ьисуег ип01 сЬе 1ече1 ог" сЬе 1и!исд геасЬев а1пювс со йе сор оу сЬе виррогс.
'вСсЬеп йе Ыосдп8 рарег оп сЬе сор оГ сЬе виррогс тв сЬогои8Ыу очес, ыпоой оис а1! асг ЬиЬЫев счпЬ а 81авв год ог рсрессе. 12. Кепюче сЬе це! Ггош йе во1шюп сп 5сер 7 апд !пчегс К во йас 1св ипдегвсде св почт ирреггповс. Р1асе СЬе !пчегсед це! оп йе виррогс во СЬаС Ь )в сепгегед оп йе счег ЫоСдп8 рарег. МаСсе вите сЬас сЬеге аге по а!г ЪиЪЫев Ъеьчееп сЬе Ыосдпц рарег апд сЬе де!. сЗ. 5иггоипд, Ьш до пос сочег, йе 8е! ччссЬ 5агап схггар от Рага81ш ТЫв ргосессае псавх вегчев ав а Ъагпег со ргечепс!сКисд Ггот йовчспд о5теес!у Стоги сЬе геветчоп со рарег совче!в р!асед оп сор оГ сЪе ае1.
11сЬеве совче!в аге пос ргееае!у всае)сед, йеу сеид со дгоор очег сЬе едце ос сЬе це! апд тау соиеЬ сЬе вчкСе. ТЫв суре ос вЪоп-еиешс!пц Ь а та)ог саиве ос спе65есепс стаивает ог РЪСА Коапп сЬе ае! со сЬе тетЪгапе. 14. Чудес йе сор оу йе ае! чдсЬ сЬе арргорпасе сгапвЕег Ьи!Тег. Р1асе йе счес шешЬгапе оп сор оЕ йе 8е1 ю сЬас йе сис согпегв аге а118пед. То ачоЫ ЬиЬЫев, соисЬ опе согпег ог" йе шегпЬгапе со йе це! апд цепс!у 1оъчег сЬе гпегпЬгапе опсо сЬе 8е1. Опе ед8е оГ сЬе спешЬгапе вЬои!д ехсепд )шс очес йе ед8е оГ сЬе 1ше ог" в1осв ас йе сор оГ йе 8е1. ав 1МРОКТАЪСТ Оо пот точе СЬе тпегпЬтапе опсе 1С Ьав Ьееп арр! Сед Со йе вит!асе о! йе ае3.
Ма!се вите йас йете ате по аст ЬиЬЫев Ьесччееп йе тпепсЬтапе апд йе це). Ргогосо! 8: 5оийеги В!огг)п8с Сар)1!агу Тгапфег о( Р)с!А го МеасЬгаиеь 6.45 16. Сис ог ЕоЫ а яас1с оЕ рарег сосче!ь (58 сгп Ь18Ь) )ия япа11ег сЬап сЬе Ыосс(п8 рарегь. Р1асе йе сосче!ь оп сЬе ЫосПп8 рарегь. Рис а 81аьь р!асе оп сор оЕЕЬе ьсасЬ апс! сче(ВЬ 1с с(осип сч(сЬ а 400-8 сче(ВЬС. ТЬе оЬсесссче сь со ьес ир ь Посч оЕ 1к)иЫ Егогп йе геьегчосг сЬгои5Ь йе Пе! апс1 сЬе псепсЬгапе ю сЬас Ега5шепсь оИепасигес) ЕсМА аге е1исес( Егош сЬе Пе! апс1 аге с(ероьссе<Е оп сЬе гпешЬгапе. ТЬе сче)ПЬс оп сЬе сор оЕ йе Пе! ьЬои15 Ъе Ьеачу епоиПЬ со епьиге лоос) сопсасс Ъепчееп сЬе чапоиь соспропепсь оЕ йе Ыос, Ьис 1сцй епоиПЬ со ргечепс соспргеы!п5 сЬе Пе1.
Согпргеьяоп сЫП ьс)иееге!щи Сгопс йе спсегьскеь оЕ сЬе Пе1, !еач(п5 а с)еЬус(гасесс псаспх сЬас Пгеас!у ге!асс(ь сЬе точегпепс оЕ ЕсМА апс( с(гаьсссаПу гессисеь сЬе еЕПс!енсу оЕ сгапьЕег оогп сЬе Пе! со сЬе гпепсЬгапе. 1псасс, гасЬег йап сш ог Ео!Пес), рарег сосче1ь сап а!ьо Ье пьес! сп сЬЬ ьесир, Ьис оп1у П сЬе ргосесиче шаь(с оЕ 5агап )Чгар ог Рага61пс ейк)епс1у ргечепсь ьеера5е о! Ьисуег. То ргечепс ечарогасюп, югпе спчеьПцасогь счгар сЬе епиге сгапь(ег ьешр ш 5агап сугар. ССсЬесЬег сЬсь Ь песеяагу ьеепи ьошеччЬас с)оиЪЕЕи!. 17.
А11осч сЬе сгапьуег оЕ РМА со ргосеес( Еог 8-24 Ьоигь. Кер1асе сЬе рарег сосче(ь аь йеу Ьесоте счес. Тгу со ргечепс йе еппге ьсас1с оЕ сосче!ь Егот Ьесот(п8 счес сч(сЬ ЬиЕЕег. 18. Реточе йе рарег сосче!ь апс( йе Ыосс)пб рарегь аЬоче йе це1. Тигп сЬе Ве! апс( сЬе ассасЬес! гпегпЬгапе очег апс( 1ау йегп, Ве( яс(е ир, оп а сЬ.у ьЬеес оЕ Ыоспп8 рарег. Маг1с йе роясюпь оЕ йе Ве! ь1оп оп йе гпетЬгапе ис(сЬ а ъегу ьоус 1еас1 репсП ог а ЬаПро(пс реп.
19. Рее1 сЬе Ве! Егот йе гпегпЬгапе апс! с(1ьсагс( йе Ве!. 1пьсеасс оЕ йьсагс)1п5 сЬе це1, Ь сап Ъе ьса(пес! (45 пипшеь) (п а 0.5 Ссбсш) ю1ииоп оЕ есЬЫшпс ЬгогпЫе )п Н О апсс Ыыа!ггес1 оп а 1)Ч сгапяПшпспасог со 5аи5е йе ьнссея оЕ сЬе РМА сгаыЕег. Мосе йас йе спсепясу оЕ Пиогеьсепсе счсП Ье с)шсе 1осч Ьесаые апу Е!МЛ геша)п)п5 сп йе Пе! чаП Ьаче Ьееп с(епасигес(. Гсха6оп о1 Т!се О!х!А $о 1!се МепзЬгапе ТЬе ьес!пенсе оЕ ьсерь Егот ЕпипоЬ1!гхапоп оЕ РМА со йе тегпЬгапе со ьиЬьециепс ЬуЬг(с!ЕгаВоп с!ерепс(ь оп йе суре оЕ тепсЬгапе, йе гпесЬос( оЕ сгапьуег, апс( йе тесЬос( оЕ Вхасюп (р1еаье ьее ТаЫе 6-3). Весаиье а1(са)ше сгапьуег гехи!п ш сача!епс ассасЬгпепс оЕ РМА со рояВче!у сЬаг8ес( пу1оп тегпЬгапеь, сЬеге гь по пеес! со Вх сЬе РМА со йе гпетЬгапе Ье1оге ЬуЬг(с(1гасюп.
РМА сгапьуеггес( со ипсЬаг8ес! пу1оп тетЬгапеь 1п пешга! сгапьуег Ьийег ьЬои16 Ье Е!хес( со сЬе тетЬгапе Ьу Ьа)с(п8 ипс1ег часиит ог Ьеас)п8 сп а т(сгоигаче очеп, ог сгоьь11п1сес1 со йе тетЬгапе Ьу ЕЛЕ 1ггайасюп. ТАВЬЕ 6-3 Р!х1п8 ОМА Со СЬе МетЬгапе Еог НуЬг(с!1гаС!оп Тччь оь Мьяаааяь Тччь оь Таамьььа Мьгссоо оь Гсхлуюх 5ьоиьмсь оь 5тьчь Рояиче!у сЬагПес( пу!оп аПсаПпе сгапь(ег 1. 5оа1с гпетЬгапе ш МеисгаПгассоп Ьибег 1!. 2.
Ргосеес) со ргеЬуЪгсйгас)оп. а!Ьа!спе сгапь(ег ~1псЬаг5ес) пу1оп ог рояиче1у сЬаг5ес( пу1оп пешга! сгапь(ег )2Ч ыгасПассоп (р!еаье ьее 5сер 21 Еог с1есас!ь) 1. 5оа)с шешЬгапе сп бх 55С. 2. Рсх сЬе РМЛ Ьу СЛ' сггасПаиоп. 3. Ргосеес( Со ргеЬуЬпйгаиоп, 1. 5оа1с спешЪгапе ш бх 55С.
2. ВаЬе сЬе шешЬгапе. 3. Ргосееб со ргеЬуЪг(йгассоп. СспсЬаг5ес) пу1оп ог рояиче!у сЬаг5ес( пу! оп пеисга! сгапь(ег Ьапп5 ш часишп очеп ог писгосчаче очеп (р1еаье ьее 5гер 21 Еог с)егаПь) 15. чхгес сЬе мо р)есеь оЕ сЬ(с1с Ыоп)п8 рарег ш сЬе арргорпасе сгапьуег Ьиууег апс1 р1асе йепс оп сор оЕ сЬе счес гпегпЬгапе. Ко!1 а рсрепе асгоьь сЬе ьигуасе оЕ сЬе тегпЬгапе со япоой асчау апу а(г ЬиЬЫеь. 6.46 СЬартет 6т Ртератястон ант)Апа1уки о7 Еи)сатуост2 Сеиоиттс О)ъ)А 20. 5оа)с йе шешЪгапе ш оие оЕ йе Е011осч)п8 ко1иНопк ак арргорПасе: Рот неистя! стапкует: бх 55С Еог 5 пнписек ас гоош сеспрегашге.
Рот аИса1тле стапкуетт)ъ)еисга1)хас)оп ЬиЕЕег 11 Е0.5 М Тг)к-С1 СрН 7.2) шЬЬ 1 М МаС1) Еог 15 пнписек ас гоотп сешрегасиге. ТЫк ппке гетночек ану ртесек оЕ а8агоке кс!е)он8 то тЬе нтешЬгапе антс, ш сЬе!апет саке, а1ко пентга!Ьек тЬе шетнЬтане. 21. 1пипоЬс1гае СЬе 13)ь)А СЬаС Ьак Ъееп Сгапкуеггет) Со ипсЬаг8ет) шешЬгапек.
Весаые а!)са!!не станкЕег геки!ь сн сома!енс ассасЬшенс оЕ РХА то рокЬн е!у сЬагсет) ну1оп гнетнЬгапек, сЬеге Ь но неед Еог атЫт6она1 ксерк со Вх йе С!ХА со сЬе тнетнЬтапе. ТО Г!Х ВУ ВАК!МО 1М А ЧАС!Я)М ОЧЕМ а. Кептоъе йе тпешЬгапе Есош сЬе бх ЬВС апс1 аПосч ехсекк Е)и)т) со т)га!и ашау. Р1асе йе птетпЪгапе Е)ас оп а рарег сомме! со с1гу Еог ат 1еакс 30 пнписек ас гоош септрегасиге. Ь. 5апт)ъч)сЬ сЬе шеспЬгапе Ьесъчееп ссчо кЬееск оЕ с)гу ЫосНп8 рарег. Ва)се Еог 30 пнписек Со 2 Ьоигк ат 80'С ш а часишп очеп. ОчегЪа)с)н8 сап сансе шстосе1!и1оке шешЬганек то Ьесотне ЬпсКе. 1Е сЬе Ве1 ъчак пос сошр1есе!у ненста!)тед Ьесоге сЬе РХА шак сганкЕетгей шсгосе!1н1оке птентЬганек тч)11 шгн уе1- 1осч ог Ьточчн т)итсн8 Ьа)с)н8 апт) сЬтр чету еая1у. ТЬе Ьас)тсгонпт) оЕ понкрестйс ЬуЬпйхаЬон а!ко тнстеакек т)гашассса!1у.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
