Sambrook, Russell - Molecular cloning. Laboratory manual - v.1 (522940), страница 151
Текст из файла (страница 151)
ТО НХ ВЧ ВАК!МС!М А М1СКОСЧАЧЕ ОЧЕМ а. Р!асе йе т)акр шетпЪгапе оп а с)гу ртесе оЕ Ыоиш8 рарег. Ь. Неас сЬе шешЬгапе Еог 2 — 3 пиписек ас Еи!1 роъчег ш а пнсгоъчаче оъеп с750 — 900 ТЧ). ртосеет) йгесс!у со ЬуЬпйтасюп Ергососо! 10) ог тсгу сЬе шентЬгапе антс ксоге Ь Ьессчеен кЬееск оЕЫогбн8 рарет шнт1 Ь Ь неет)ет).
Ва)с)п8 пЬтосе1101оке тнешЬгапек ш а пнстотчаче очен атсеннасек сЬе я8на! тп 5онсЬетн ЬуЬпйтасюнк ант) Ь нос тесошшент)ет) 1Ан8е!ес6 ес а1. 1995). ТО СКО55-Е!МК ВУ С)Ч 1ККАР1АТ)ОМ а. Р1асе сЬе т)ашр шешЬгапе оп а т)гу р)есе оЕ Ыопш8 рарег. Ь. 1ггайасе ас 254 птп со стока-!ш)с сЬе )3)ъ)А со йе шешЬгапе (КЬапт)))ап 1987). !пипоЫ1Ьасюп оЕ ннс1е!с асйк Ьу Р Ч !ттайас!он сап Вгеас!у енЬапсе йе ЬуЬпйтасюп я8- на1 оЪса!пет1 ъчЬЬ коше ЬгантЬ оЕ рояиме)у с)тятчетс ну1он шетнЬганек (КЬант)))ан !987). Ноъчечег, Еог шахипшп ессесс, К 1к ннропапт со гна1се анте сЬас сЬе шетнЬгане Ь нос очептгайасетс.
ТЬе анп Ь со Еопн стоя-1тн1ск Ьеьчеен а яна!1 Егассюн оЕ йе сЬупнне гекгВнек тп йе РХА ант) роясМе1у сЬагсет) аннне 8тонрк он сЬе кнгЕасе ос сЬе гнетнЬгапе 1СЬнгсЬ апт) От!Ьея 1984). ОчепггайаКон тесн)ск тн тЬе соча1ент ассасЬтнепс оЕ а ЫВЬ ргорогсюп оЕ йе сЬупннек, тч!сЬ сонкет)иенс тсесгеаке !и ЬуЬгЫЬасюп я8на!. Ма!се кше сЬас сЬе кгВе оЕ сЬе нтетнЬгане саггутн8 сЬе РХА Еасек сЬе РЧ 118Ьс конгее. Мокс нтаннуасснгетк ат)чске сЬас тсатнр птешЬгапек Ье ехрокет) со а соса! оЕ 1.5 рант апт1 сЬас т)гу тпетпЬганек Ъе ехрокет1 со О.!5 1)стн'. Нотчечег, ъче гесопинепт1 сапутп8 оит а тенек оЕ рге1шинагу ехрегннень со т)есепптпе ентртпса1!у сЬе апюинс оЕ игайасюп тес)шгес) со ргот)исе сЬе тнахтннлш ЬуЬпйхасюп я8на!. 22.
Ргосеет) йгест1у Со ЬуЪПйхайоп оЕ птппоЪЕ!тхес) Е))ъ)А Со а ртоЬе (Рготосо! 10). Апу шешЬганек нос нкет) нншейасе1у !и ЬуЬпйтаион геассюпк кЬооИ Ье йогоиВЫу т)т)ет), мтгаррет) 1ооке!у !и а1шп!ншп Еот1 ог Ыоснн8 рарег, апт) яогет1 ас гоош сетнрегаснге, ргеуегаЫу ннт1ег часишн. Рго1осо! 9 Ьоцйегп В!оЖпд: Ятийапеою Тгапйег о1 0МА ггогп а Япд!е Ацагоье Се! 1о Тч~о МегпЬгапеь р ыл слн вв 5!мглгтлгевОглкгт тклмкгеккео гком Оррок!тк 5!Овк ог" а к!пк1е акагоке ке! го глео тетЬгапек (р!еаке кее р)ките б-З). ТЫк ргосег)иге !к окей! леЬеп гЬе пеес1 апкек со апа!ухе гЬе кате кес ог' геяпсгюп )гарпепгк ъчлЬ глчо Жггегепс ргоЬек. Тгапкгег оу 1Э)х)А )гактепгк )к гарЫ, Ьиг гЬе егВс!епсу !к !оле Ьесаике гЬе акагоке ке1 г!шс)с!у Ьесотек 6еЬус)тагес) ак !)иЫ гк ле!гЬс!галоп )гоги ЬогЬ кЫек.
ТЬе тегЬо6 гЬегегоге леог)ск Ьекг леЬеп йе гагкег кециепсек аге ргекепг )п Ь)ВЬ сопсепгга6оп, 1ог ехагпр1е, кеЬеп апа1ух!пк с1опес) Р)х)Ак (р1акт!6к, Ъасгег!орЬакек, сояпЫк, РАСК, ог ВАСК) ог 1екк сотр1ех кепотек (е.к., лЬоке ог 5. сегепбае ог Ргокорб11а). "!оо 1641е тапппа!)ап пепит!с РЬ)А !к ггапкгеггес! го а!!оке яапа!к 6от япк1е-сору кес)иепсек го Ье с)егесгеи пл а гергосЬлс!Ые ог гппе!у гаки!оп.
МАТЕК1А15 СА1)Т1ОХ: Р)еаке кее Аррепб)х 12 Гог арргорпаге Ьапд!)пк о! тагепа1к шаг!сед кх)гЬ <! >. Войегв апс! Ьо166опв Р!еаке кее Аррепгпх 1 1ог сотропеплк о1 к!ос!с ко1и6опк, Ьийегк, апд геакепгк. Р11иле кгос)с ко!иг)опк Го ГЬе арргорпаге сопсепгга6опк. Репагига6оп ко)ибоп 65 М ГлаС! 0.5 и ХаОН <1> НС1 Ю.2 ел), 1ог с)еригтпа11оп ог'РЛ)А <1> Орбопа1, р1еаке кее поле го 5гер б, ргогосо1 8. Л1еисгаЪаГ)оп ЬиИег 1 м Тпк (рН 7.4) ! 5 М ГсаС! Л1еигга1 ггапкгег Ьиггег 1!Ох 55О бх 55С бх 5исгоке де1-1оас)1пд ЬиИег 5УВК СоЫ <! > ог бгЬЫ1ит ЬготЫе <! > Епгугпев апд Вийера Арргорпаге гекгпсбоп епгутек б.47 6.48 СЬарсег б: РтерагаВол алг! Ала!уьЬ оЕЕи)сагуос!с Сепотсс О)с!А Се!5 АВагоье Ве! (0.7У') саьг т 0.5х ТВЕ ог !х ТАЕ сп йе аЬьепсе оЕ еСЬгг)сит Ьготсг)е ТЬе Ве! шау Ье саьг апеС гип ш йе иьиа1 чгау сп Ъийегь сопСанип8 05 08)ш! ейЫшгп ЬгошЫе. Понечег, а пюге асеигасе псеаьигегпепс оЕ сЬе с!хе оЕ РЪСА Гга8шепыпау Ье оЪса!пе<$ Ъу ьса!псп8 сЬе 8е1 айег е1еесгорЬогеь1ь н!сЬ есЬ!В!ипс ЬгогпЫе ог 5УВК Со1й ТЬе Ыс!ияоп о! 5УВК Со!д ш йе Ве1 гпаслх псау саше гпяогпоп о! сЬе РС4А ЬапсЬ апд гпау гесапс йе пн8гас!оп оГ йе РЪСА Гга8шепсь со чагусп8 сСе8гееь.
Р1еаье ьее Аррепгпх 8. Ь!ссс!е!с АсссЬ апс! О!коппс!еоЕЫе5 Р)хгА ь!хе таг!сегь 5еп оЕ яхе спас!сечь аге ача!1аЫе Сгопс псапу сопнпегеса! шаписаесигегь, ог сЬеу сап Ье ргерагееС Ьу й8еьсш8 с!ошп8 чеесош нссЬ арргорласе геьсгксюп епхушеь. Сне гесошшепб ияп8 а с-СсЪ 1асЫег ГС!ВСО-ВВ!.) ш сЬе 1апе с1оьеьс со опе ьЫе ос сЬе Ве1 апеС а НпкС!!! гС|8еьс о!ЬаесегюрЬа8е ) РЪСА сп йе 1апе оп йе орроясе ьЫе ау сЬе 8е!.
Маг1сегь габпо1аЬе!еб нЬЬ п5 ог 'ьр аге пос гесопнпепс)ед Ьесаиье йеу иьиа!1у гес!шге ехроьнге снпеь йКегепс !гоги сЬоье орппса1 Сог сЬе саг8ес ЬапсЬ. ТагВег Е)!!А Ьресса! Ес!шршепЕ Сгоьь-!гп)сспВ делсе Ге.В., 5СгагаИп)сег, 5СгагаВепе; С5 Селе ЕгпЕег, ВГо-)саЯ, ог Мссгоччаче осел, ог Уасиигл очеп С!аьь Ьа)ссп8 г)ГьЬеь С!аьь р!асе Ху!оп ог л)сгосеИи!оье тетЬгапеь Р!еаье ьее гпьеыяоп оп МешЪгапеь УьегС ш 5оисЬегп апсС ХогсЬегп НуЬлгпхабоп сп йе !и!гобое!!оп со Ргосоео1ь 8-10. )со!агу р!асуогт ьЬа)сег ТЕВс)с ЫоггспВ рарег Ге.8., ИгЬагтал ЗММ, 5сМессЬег 8 5сЬиеИ СВ004, ог 5!Вта ОиссЮгачч) Тгальрагепг ги)ег ччГСЬ Ииогеьселг таг)с!пВь ТЬе ги!ег Ь пьес! со шеаьиге йе гпьсапее сгаче!ес1 Ьу йе псаг1сег РССАь.
А ги1ег р1асес! а1оп8ьЫе йе Ве! гСиг!п8 РЬосо8гарЬу аС! онь сЬе гпяапсеь сгаче1есС !гипс сЬе!оагВп8 не1!ь Ьу РЪСА шагСгегь ос Сепоьчп яге Со Ье гпеаьигеб оп сЬе РЬосо8гарйе сгпа8е апсС р!оссегС ВгарЬВеа1!у. ТЬе яхеь оГ гагао1аЬе1ее! ЪапсЬ Весеесес) Ьу ЬуЬпйкабоп сап йеп Ъе еьснпасегС Ьу !псегро!абоп. ЯеГВЬс !400 8) МЕТНО0 1. Р!Веьг йе Е)сх)А апс1 ЕгаспопаСе Ь Ьу Ве1 е1есггорЬогеяь ассогс!ш8 Со Всерь 1-3 оЕ РгоСосо1 8. 2. АЕсег Егассюпапп8 сЬе Рсх)А Ьу Ве! е!ессгорЬогеяь, яаш йе це! сч11Ь ейЫсшп ЬгогпЫе ог 5'г'ВК Со!а апс! рЬосоВгарЬ аь с!еьсгсЬес! !и СЬарсег 5, Ргососо! 2.
Р1асе а сгапьрагепс ги1ег а1008ьЫе сЬе Ве! ю йас йе с!1ьсапсе сЬас апу Ьапс1 Ьаь т18гасес! сап Ье геас1 с!!гесс!у Егот сЬе РЬосоцгарЬ!с !та8е. Ргераге йе Ве1 Еог сгапьЕег ипс1ег пеисга! сопс!!1!она (Ргососо! 8, 5серь 6-7). 3. Ь ье а ЕгеьЬ ьса1ре! ог а рарег сипег со сис сччо рсесеь оЕ пу!оп ог ппгосеП01оье псетЬгапе -1 — 2 пнп 1аг8ег йап йе Ве! сп еасЬ Встепяоп. Сис а согпег Егот сЬе гость.аале со тассЬ йе согпег сис Егот йе це!. А1ю сис !оиг ьЬеесь оЕ сЬ1с1с Ыосс1п8 рарег со сЬе хансе асье аь сЬе тетЬгапеь.
аь 1МРОССТАЪсТ Бье арргорпасе 8!очеь апсС Ыипс-епдесС Гогсерь Ге.8., М!!Вроге Еогсерь) со ЬалВ!е сЬе тепзЬгапеь. А псегпЬгапе сЬас Ьаь Ьееп соисЬесС Ьу о!!у Ьапс)ь иаП пос ччеп То геса!и япа!1 Гга8шепсь оЕ РЪСА Г<300 пие!еосЫеь), ые п1сгосе11и1оье гпеспЬгапеь часЬ а япа11 роге ьае 10.2 Ссш) ог пу!оп псешЬгапеь. Ргогосо! 9: $оийегп В!оггггте: 5!ти!гапеоиг Тгапгсег оу ВЬЕА Егот а 5гпч!е Ачагоье бе1 го Тсчо МетЬгапег 6.49 Р!оас сЬе тпетпЪгапеа оп йе аигуасе оЕ а 61ЗЬ оЕ десошге6 Н О ип61 сЬеу счет согпр1есе1у Егош Ьепеай, апс1 сЬеп ппшегае сЬе тпегпЪгапеа ш 10х 55С Еог ас!еаас 5 ппписея ТЬе гасе ас зтЫсЬ 6!ЕЕегепс ЪассЬеь оЕ и!сгосе1!и!оье гпешЪгапеь иге! заг!еь епогпюы1у. !Е сЬе гпегпЬгапе ь пос гасигасед атгег Етоаг!п5 Еог аечега! ш!пасет оп Н,О, сс гЬои!6 Ье гер!асей гч!сЬ а пегч шегпЪгапе, ппсе сЬе сгапаЕег оЕ ЕтгчА со ап ипечеп1у гчегсе6 тпептЬгапе сг ипге!!аЫе.
ТЬе ог!5!па! шешЪгапе гЬои!6 Ъе егйег йгсагбе6 ог пи!ос!аче6 сот 5 гп!посев Ъессчееп р!есеа оЕ ЗММ рарег гагигасе6 сч!гЬ 2х 55С. ТЬ!г ггеасгпепс игиа11у геаи166п сопгр!ете тчесппх оЕ сЬе гпешЪгапе. ТЬе аисосСазе6 гпешЬгапе, гапбапсЬе6 Ъепчееп йе аисос!азед ЗММ рарегв васигасе6 иг!сЬ 2х 55С, шау Ье агоге6 ас 4'С ш а геа!е6 р!асс!с Ъаг ип6! пеес!ес!.
Рсо1! а шосасепед ртрепе очег еасЬ !ауег аа Ь Ы аааешЫес1 со епаиге сЬас по асг ЪиЪЫеа аге сгаррей еаресса!!у Ъесъчееп йе шешЪгапеа ап6 йе ае! яда. Р1асе опе оЕ йе шегпЬгапеа оп ссчо р)есеа оЕ башрепе6 Ыоссша рарег. Ъау сЬе ае! оп сор оЕ сЬе шешЬгапе, а11апспа йе сис согпег оЕ йе ае! сч)сЬ йе сш согпег оЕ сЬе шешЬгапе. тйгссЬоис ссе1ау, р1асе йе аесоп6 шетпЪгапе оп йе ойег ябе оЕ йе ае1, Ео1!озче6 Ьу съчо ЗЬееса оЕ башрепед Ыоссшц рарег (р!еаае аее Рсаиге 6-3). ТгапауегсЬе епспе аапс!зчкЬ оЕЫоссспа рарегя псешЪгапея апсс ае! опто а 2 — 4-шсЬ атас)с оЕ рарег соше1я Созет йе аапбсчкЬ счссЬ а аесоп6 яас1с оЕ рарег сосче1я Рис а а1ааа р1асе оп сор оЕ йе еп6ге яас1с апс! счесаЬ гс досчп счссЬ а 400-ц сче!гЬс. АЕсег 2-4 Ьоигя гешозе сЬе рарег !отче! ь ап6 Ыоссспц рарегя Тгапауег сЬе ге! апс) шешЬгапе аапсЬлсЬ со а 6гу аЬеес оЕ Ыоссша рарет, апс1 шаг1с сЬе арргохппасе роасссопа оЕ йе ае! а!оса юпЬ а чету аоус 1еас! репе!! ог а Ьа11роспс реп.
1пппоЬ111ге сЬе ЕЗДА опто сЬе шегпЪгапеа Ьу сошр1ес)па 5терь 19-21 оЕ Ргососо! 8. Ргосеес1 йгесс1у со ЬуЬт161гассоп оЕ пшпоЬЕ1Ыед ЕЗДА со а ргоЪе (Ргососо1 10). Апу шешЪгапеа пос ые6 ппшейасе!у Ы ЬуЪг!6!гас!оп геасс!опт ьЬои!6 Ье сЬогои5Ыу 6гу, тчгаррес1 !ооге!у тп а1ипипшп Еот1 ог Ыосс!пц рарег, апс! гсогед ас гоогп сегпрегасиге, ргеЕегаЫу побег часишп. Рго1осо! 10 Ьоийегп НуЬпйка6оп от Кайо!аЬе!ес! РгоЬеь 1о!Чис!е!с Ас~сЬ! тгпоЬ!!!лес! оп МегпЬгапеь т не ктвенстн ое тне нчввьеы2Атюм ясмАЕ овтл!мегь ьм 5остневн нчввьгь!2лтюн г!ерепс!к оп а пшпЪег оь гас!ига, шс1иь!1па ьЬе ргороггюп ог 1ттоЬ111хеь) Р)к)А йаь 1к согпр!етепьагу со ьЬе ргоЬе, йе яхе ог йе ргоЬе апс! пк крес16с ась)ч)ьу, апь! йе апьоипь ог аепот1с РХА ьгапкуеггеь! ьо йе гпетЪгапе.
1)пь)ег ьЬе Ъекь сопс)1ь)опк, ьЬе пьеьЬоь! 1к кийьсьепг1у кепя6че со ь)еьесг <О.! ра оу Р)к)А согпр1етепьагу ьо а ргоЬе йаь Ьак Ьееп гас!1о1аЪе1ег! ьч)ьЬ ььр го Ь)ВЬ кресь6с ас6чпу ()10 срт/)ьд; р1еаке кее СЬарьег 9). А кес!иепсе ог" 1000 Ьр йаь оссигк оп1у опсе ш йе гпапьта!1ап депоте (1.е., 1 рать 1п 3 пи!1юп) сап Ье с$еьесьеь! ш ап очегп)ВЬь ехрояьге ьо сопчепгюпа! Х-гау 6!гп 1ог 15 — б0 пипиьек оп а рЬокрЬоптадег) 1г" 10 )ьв ог" депот)с Р)к)А 1к ьгапкгеггег! ьо гЬе тетЪгапе апг! ЬуЪг)г!1гес) го а ргоЪе кечега! Ьипг!гег! пис1еогЫек 1п 1епдьЬ. Весаике йе кьгепвй ог" ьЬе яапа) 1к ргорог6опа! со йе крес16с асг)ч1ьу оь" ьЬе ргоЪе апь1 шчегке1у ргорог6опа! со ьгк 1епцьЬ, 5оиьЬегп ЬуЬг)йхаь)оп геасЬек ьЬе!ип)гк ог" Ьк кепя6чЬу ъчЬеп чегу кЬогь ргоЬек аге окей То оЪьа)п а ыдпа! !топь к)па!е-сору депоппс кеь)иепсек ьч)ьЬ, Уог ехатр1е, о115опис1еоьЫе ргоЬек, 1ь гк песеккагу ьо гаг!1о!аЬе! го ьЬе Ь15Ьекь крес66с ас6чЬу рокк1ые (р!еаке кее СЬарьег 10, Ргоьосо1 2 ог 7), ьо ьпсгеаке йе апюипь ог" ьагцеь Р)к)А оп ьЬе тетЬгапе, апь! ьо ехроке йе аиьогас!1оагарЬ ьог кечега1 ь!аук, ог гЬе рЬокрЬоппьацег р1аье гог гпапу Ьоигк.
Рог йе ь)егесьюп ог" ге!аьес! Ьш поь Ыепььса1 кег)иепсек, р!еаке кее йе рапе1 оп АооьтьОВьАЕ ВКОТОСОЕь НЧВИО12АТЬО!кЬ АТ ЕОЧЧ 5ТИНСЕГчСЧ аь ЬЬе епг! оГ й1к ргогосо1. 5ечега! теьЬог)к аге поьч ача1!аЬ!е уог попгасбоаспче 1аЬе11пц ог" РЬ1А апь! КХА 11ог гечьеьчк, р!еаке кее Сиекг!оп 1992; АТа!е апь! Ре!!'Огьо 1992; Мапк6еЫ ег а!.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
