Sambrook, Russell - Molecular cloning. Laboratory manual - v.1 (522940), страница 160
Текст из файла (страница 160)
!Е иесегьа~у, К)ъ)А саи Ье гесонегес! (гоги ЕоггиагиЫе Ьу ргес!р)сабои ъчсй 4 чо!итеа о( ейаио! сь с(ессг)Ьес) Ьу СЬотсхуиаЫ (1992) ог Ьу сП!ис)иц йе ЕогтатЫе Еоиг(оЫ ъий 02 га НаС! аис) 1Ьеи ас)П)иП сЬе соичеибоиа! 2 ъо!игиес о( ейаио! (НасПи-(3ан!с аис) Мех) 1982). ° О)гьо!че ЕИе ргес)рйаге т ал адиеоиа Ьибег алс( йоге а( -80'С Вийегс соттои!у исес) Еог йь РигРоае )ис)ос)е 505 (О 1-0 5 / ) )и ТЕ (РН 7 б) ог )и ОЕРС! геа(ес( Н О соиЬПи(иП 0 1 гпМ Е(3ТА (РН 7.5). ТЬе 505 аЬои!д Ье геточес) Ьу сЫого(огт ехсгассюи аис1 ейаио! ргес!рПабои Ье(оге еису- гиа1Ы 1геа1гиеи1 о( 1Ье КЙА (е.П., рпгиег ех(еияюи, геноссе 1гаиссирбои, аис1 )и 61го 1гаис!абои). ° 5(оге (Ье ргеорКасе оЕ К)ЧА аа а аиарелсюл ас-20'С гл ейало!.
5агир!ес о( йе К(ъ)А саи Ье гегпонес), сь пиес)ес), ъч41Ь аи аи1огиаис р!РепПиП с)ейсе. Ноъчечег, Ьесаиае ргес!Р11асез о( КХА аге )иги ру аис) 51Ы)су, аис) рагс!у Ьесаисе о( )осаес оисо йе хиг(асес о( с)ьрсьаЫе р)репе 1)рь йе гесочегу о( КМА ь !исоияЬсеи1. Рго1осо! 2 А 5~пц!е-ь1ер Мейос1 аког Йе Мгпи!1апеоиь Ргерагабоп о1 РМА, ЮЧА, апс1 Рго1е~п 'ггогп СеЬ апс1 Тььыеь т не ЕОггсич(г(0 РВОтОсОЕ (СнОх(сгч(95х! 1995), а чаг(агюп оп гЬе яп81е-хгер тпе(Ьог) т(ехсг(Ьес) (и Ртогосо1 1, аПотчх (Ье япш1гапеопг гесочегу о( КХА, ТтМА, апг) ргосеш Егош ап а1н)пот о( г!тыле ог се1!я 11)се Ьх ргедесехюг (СЬошсгупь(с! апс1 5ассЫ !987), (Ыв шегЬог( (пчо!чеь )уяь оу се!1ь чч((Ь а шопорЬаяс ао!иг)оп оу Вцашйпе (юйюсуапаге апс1 РЬепо1.
Аг!йг!оп оу сЫого(огш Вепегагех а ьесопс) (ог8ап!с) РЬаае (пго тчЬкЬ Его апг) ргоге(пх аге ехггасгей 1еачш8 КХА (и (Ье ас(иеоиг юрегпагапг. ТЬе 19МА апт1 ргоге(их сап Ъе (ю1атег) Егош ЕЬе ог8ашс РЬаае Ьу вес)пепг(а! Ргес(РЬаиоп чч1(Ь е(Ьапо1 апг( (юргорапо1, гегресг(че1у. ТЬе Р1(А гесочегет( (гоги гЬе ог8ашс РЬахе 1х -20 1сЬ тп яге апг) (х а ьштаЫе гептр1асе Еог РСКя ТЬе ргоге(пя Ьоччечег, гетиаш Йепагпгей аь а сопрет)иепсе ог" йетг ехроьпге го Виашйпе апг) аге пает) сЫейу Еог пппшпоЫои(п8.
ТЬе К)х)А ргес(р(гасет) Егош (Ье ацпеопх РЬахе тч1гЬ (юргорапо) сап Ъе Еш гЬег риг(ттед Ьу сЬгошаго8гарЬу оп о118о(г)Т)-се11п1оге со!пшик апйог пает) Еог пот(Ьегп Ыог ЬуЬг)йгагюп, гечегхе ггапхсг(ргюп, ог КТ-РСКх. ТЬе у(е!т( оу Сота1 КХА т!ерептЬ оп ГЬе т(хяле ог се)1 хошсе, Ъит Ь !х Вепега11у 4 — 7 )т8!тп8 хгагт(п8 т(гаие ог 5 — 10 )т8/10" се11я ТЬе А /А, гаг(о о( (Ье ехггасгег) К14А (х 8епега11у 1.8-2.0. МАТЕК!А15 А !мРОВТА(9Т Ргераге аП геа8епта пьет( (и ГЫх рготосо! тч(ГЬ ОЕРС-тгеатег( Н О (р(еаье атее ТЬе (п(отплат(оп рапе! оп НОЪЧ ТО Ъч((9 ТНЕ ВАТТЕЕ ИЧТН ВХАХЕ), САНТ!ОХ: Р1еаье аее Аррепйх 12 (ог арргорпаге Ьапг!!!па о! шагег!а1а шагЕет( тч!ГЬ <! >.
Вгг1!его апг! йо!ОЕ1ои8 Р1еаае атее Аррепйх ! !от согпропеп!а о! х(ос(г ао!вт!опа, Ьи((его, апг! геа8ептя О!!рте атосЕ ао!о6опа го ГЬе арргорпате сопсеп(га!!опя СЫого!опп <! > ЕгЬапо! !юргорапо! Е!ди!с/ и!ггодеп <! > 7.10 СЬаргег 7| Ехггасг1ол, Риг1угсапол, ал|ЕАла!ус!я оТ тКХАТгот ЕиЕсагуогЕс Се!!я ТаЫе 7-2 МопорЬая!е Еуя!я КеаКеп1я КеАсеыг Соммекс!Ас 50РРЕ!ек Тг|ао1 Кеакепс ТК! Кеабепс 1вобеп КМА-5сас-60 1!Ее ТесЬпо1оЬВея Мо1еси!аг КеяеагсЬ Сепсег Ьпрроп Селе, Тоуагпа, 1арап Те1-Тес| МолорЬаяЕЕ !уя!я геацелг ТЬе соп|роысюп оЕ йе гпопорЬав|с 1уыя геааепс ше6 1ог |Ье в|пш1|апеоив Ьо!а6оп оЕ КЬЕА, !ЕЛА, апд ргосе1пя Ьая пос Ьееп риЫЬЬей Но|чечег, а !ага пишЬег оЕ сопппегс!а1 сеабепгы |ч!ЕЬ а час|есу оЕ па|пес, аге ача|1аЫе (р! саве яее ТаЫе 7-21.
ТЬеве геабепсв аге а!1 п|опорЬаыс яо!и|юля сопса1шпа РЬепо1, киаш61пе, ог агпгпопшгп йюсуапасе ап|1 яо1иЫ1|а1п6 абепгы РЬоярЬаГе-ЬиууегесЕ яайле ЕРВ51, !се-со!сГ Кео швед Еог се1!я Кго|чп ш яиярепыоп ап6 пюио! ауегя оп!у. ЙАЕА ргее|рпапол яо!ипол 1.2 М ЬЕаС! 0.8 М гпяосашп с|сгасе 15Н О Хо ад!сьипепс оЕ РН Ь |вершей 5ос!игл аоегаге !3 М, рН 5.2) Се!15 апе! Т!55ое5 5оигсе се!!671!яяие Сеп$г1йке5 апе! !ео$ог5 5огча!! Н1000 гого| ог есГиЕча!елГ 5огча!! 55-34 го!ос ог есГиуча!елг прес!а! Ее!ея!репеп$ Сичеоея Еог теаяигГлВ аЬяогЬалсе аГ 260 лт ТЬе сичеиея вЬоиИ Ъе еЬЬег йярояаЫе срвг-сгапврагепс п|е|Ьу!ассу!асс ог сЕиаггг..
Веуоге ап6 айаг иве, яоа1с оиагсс сичепея Еп сопсеп|гасе|1 НСЬшесЬапо! 11:1, чЕч'! Гог ас 1еаяс 50 пиписея апа |Ьеп вчаяЬ ехсепыче1у ш |сел!е Н,О. Ноглоделсеег Ге.а., Т!явит!лег Ггот Те!стас-ОоЬгталл ог Ро!у!гол ггот Влл!|талл! Моггаг алсГ реяс!е |чаяЬеп! |л 0ЕРС-ЕгеагесЕ Н О, ргегЬ|Иес! Р!саяе яее СЬарсег 6, Ргососо! 1. Ро!ургору!еле ялар-сар гиЬе Ее.а., Ра!пол! ~Яагег ЬаГЬ, ргеяег го 65 С Орсюпа!, р!еаяе яее 5|ер 7. МЕТНО0 1. Ргераге се!16 ог 11яяие яатр!ея Гог ьо1аггоп оГ КХА. ЕОК Т15511Е5 'чЧЬеп |чогуап6 |ч|й сьшев яисЬ ая рапсгеая ог Кис йас аге псЬ Еп бебгасЕа|1че епсушея, 1| Ь Ьеяс со сис |Ье 61ввессеа йяие |псо ыпа1! Р|есея 1100 ш61 апа йеп |!гор йе Егабшепся |пипейасе!у! псо ЪЧЬег| ив|па сопииегс|а! геаяепгв Гог йе юпиьапеош ио1аиоп оЕ КЕЙЛА, ЛгвА, апд рго|еш, ие гесопппепа Го!!овчвпя |Ье гпап- иГас|игег в !пыгисиапв.!п шоы саве|, |Ьеве 61ЕЕег 1|ше Егош |Ье цепепс шыгис|юпв рчсп Ье!очс Нов|счев, по|с йа| |Ье шой |6сапопв оЕ |Ье сесЬписие аевспЬеа ш й|в ргососо1 геаисе йе 1ече! аЕ соп|ашшаиоп оЕ |Ье КЕЕА Ьу ОЕСА, ро!увассЬапдев, апа рго|еоя!усапв.
А| йе |иле оГ вчгЕЕГпя, по| аН о! йе п|апиГас|игег'в шв|гис|юпв сои!а!пей |Ьеве |ио|66саиопв. Ргогосо! 2: А 5!п5!е-пер МегЬог) Еог йе 5!пъи!гапеоъль Ргерагаг!оп оу РХА, ЛХА, апл) Ргогесп 7.11 1гКнЫ п)гго5еп. Ега5пъепц оЕ ьпар-!гохеп гЬьне сап Ье ггаиьуеггеь) го — 70'С Еог ъхога5е ог ые4 нииъейаге!у Еог ехггасцоп оу К)ъЛА аь ъ)еьсг!Ъеъ) Ье!оы. Тцьнеь сап Ье яогеь) ас — 70'С гог ьечега1 пъоигЬь ъч)гЬонг абесцп5 гЬе у)е!ъ) ог )пге5г)!у оу йе К)ъ)А. 5пар-Егеех!п5 аиъ) рн!чесании аге иог а!ъчауь иесеяагу. Тыьнеь гЬаг аге иог аь псЬ !и К)ъ)аьеь иъау Ъе гарЫ!у га!псеь) !пго яиа!! р)есеь аиъ) ггапьуеггеь) йгесс!у ъиго ро1ургору1епе лиар-сар шЪеь сопгагаъи5 ъЬе арргорпаъе агионпг оЕ 5о1шъоп Р !яер с) Ъе!онъ а.
1ьо1але йе с1еягеъ1 грьялеь Ъу сПььесПоп апс1 р!асе йет иитегПале1у !и 1щц!с1 пЬгоВеп. Ь. ТгаиьЕег -100 та оЕ1Ье Егохеп грьяле 1о а гпоггаг синга)п)па 1щшс1 и!1гоаеп апс1 рц1ъеггхе йе Няше ць!пп а реь11е. ТЬе 1!ььце сап Ье )серг Егохеи г)цг!па рц!чег!хал!оп Ьу 1Ье асЫПюп оЕ Пъ)шд п!1гоВеп. с.
Тгапьуег йе роъчъ)егес) Няше го а ро1ургору!епе ьпар-сар гцЪе сои!а!и!па 1 пл1 оЕ кесо!й гиопорЬаяс!уяь геааеп1. д. Ноплодешхе 1Ье 1!ььце ъчиЬ а ро1у1гоп ЬогпоВеигаег Еог 15 — 30 ьесопс)ь а! гоот летрегашге. !иъъеа4 оу Епийи5 ъи а июггаг, Егохеп цяне гпау Ъе р!асеь) ъиьйе а Ьогиегпайе Ьа5 о! р1аь6с 61ги аиъ) рн!чег)ге4 ъчъй а Ь!нпс гаьгпниепь !ей., а Ьапниег) (Сгапиа еъ а1. 1995). Оп1у сеггалп гуреь оу р1аьгк 6!пъ аге гоц5Ь еион5Ь ъо ч616яапд Ьашгаег!и5 аг 1оъч геиърегагнге (ей., ЛЧг!1е-Оп Тгапьрагеису ЕПги !гонь ЗМ). ъ ОК МАММАЕ!А14 СЕЕЕ5 СКОЧч)ъ) !)ъ) 5135РЕ)ь)5!ОМ а. Нагчеь1 йе сеПь Ьу сеп1пблпа1!оп аг 200 — 19005 (1000 — 3000 грт лп а 5огъаП Н1000 го1ог) Еог 5 — 10 ицпшеь аг гоот геплрегагцге !и а ЬеисЫор сепгпйВе.
Ь. Вешоче 1Ье тейши Ьу аьр!гаПоп апъ) геьцьреиъ) йе сеП реПегь ш 1-2 гп! оЕ ьгеп1е ке- соЫ РВ5. с. Нагчея 1Ье сеПь Ьу сеигпЕцВаг!оп, гегиоче йе РВ5 сотр1еге1у Ъу аьр!гагюп, апг) асЫ 1 гп1 оЕ июиорЬаяс !уяь геааеиг рег 10ь сеПь. й НотоВешхе йе сеПь ъч!й а ро!уггоп ЬоплоВепгхег Еог 15 — 30 ьесопс)ь аг гоот гетрегагцге. ГОК МАММАЕ!А)ъ) СЕ115 СКОЮ/Ь) !й МО)ъ)ОЕАЧЕК5 а. Реточе йе плесПши апг) ппье 1Ье сеПь опсе ъч!й 5-10 ги! оЕ ьгеп!е !се-со!4 РВБ.
Ь. Вепюче РВ5 апъ) !уье 1Ье се1В ш 1 т1 оЕ топорЬаяс 1уяь геааеп1 рег 90-иии сц11цге йьЬ (0.7 т! Рег 60-пии с!!ьЬ). с. Тгапйег 1Ье сеП!уьагеь го а ро!ургору1еие ьпар-сар гцЬе. й Нолллопелл!хе 1!ле 1уьагеь ъч!11л а ро1уггоп ЬошоцепЬъег Еог 15-30 ьесогль!ь аг гоош гешрега1цге. 2. 1псцЬаге 1Ье Ьотоаепагеь Еог 5 ишшгеь аг гоот гегпрегашге 1о репиП сотр1еге д!ььос)а1юп оЕ пцс!еорго1е!п сотр!ехеь. 3.
АгЫ 0.2 т1 оЕ сИогоЕогт рег ицППиег оЕ июпорЬаяс 1уь!ь геаВеп1. М!х 1Ье ьагир1еь Ьу ч)В- огонь ьЬаЫпп ог чоглех!пВ. 4. 5ерагаге 1Ье ицхгцге шго гъчо рЬаьеь Ьу сепгг!6лВ)иВ аг 12,000 григ (10,0005 ш а 5огчаП 55- 34 гогог) Еог 15 пипцгеь аг 4'С. Тгапьуег йе цррег ас!цеоць РЬаье 1о а ЕгеьЬ гцЪе. )Л)4А аиъ) ргогеъп аге ехггасгеь) ъпго ъЬе ог5ап!с рЬаье, !еач)п5 К)ъ)А !и гЬе аъ)неона рЬаье. Р)4А апъ) ргоъега пъау Ье гесочегеь) Кого ъЬе ог5ап!с рЬаье Ьу ье4неи6а1 ргесърпацоп ъч!гЬ егЬапо1 апъ! Вор гораио1, 7Л2 СЬартег 7| Ехсгаепои, Риг1!|тат|оп, аитЕАиа1уяЕя оу" тЯЕОАЯот ЕиИагуатте Се!1я Ргес|РЬасе йе К!я!А Егот йе ат!иеоия РЬаяе: Рог еасЬ 1011!а! пп!11!1сег оЕ тпопорЬаеПс 1уя1я геаиепс, ат!т! 0.25 чо1шпе оЕ 1воргорапо1 апт1 0.25 чо!шпе оЕ К!я!А ргес|р|сасюп яо1ипоп. АЕСег СЬогоииЬ гпсх1пп, ятоге йе тяпа! яо! пСюп Еог 10 пнпитея ат гоот Сегпрегатиге.
ТЬе отса!ив! Ргососо1я тсеясг101иа шоиорЬаясе !уя!я геааеися 1СЬо|пстуияЫ !993; Яи|иь ес а!. !9931 яиааеясетс ияид 0.5 чо1ише оЕ ьоргораио! со ргес!РЬасе КС4А Егош сЬе а9иео|ь РЬаяе. Но|течет, сЬ!я |сер Ьая Ъееи шойЕ|етс ш сЬе ППЬс оЕ сЬе йясочегу 15сЬ|с1| антс Етая !9951 сЬас аиаи!йие-Ьаяетс ехтгассюи гиейо|Ь аеиегасе 92|!А ргерага6оия тЬас аге соисашсиасетС со а ясаигПсаис ехсеис Ъу ро!уяасеЬагЫея аит! Ргосеоа!усаия.
ТЬеяе соисаиииаиь аге героие|1 со ргечеис яо1иЪ|!ЬаПои оЕ К!|ЕА аусег ргее|РЬаПои тчстЬ а!соЬо!я, ю |иЕПЬ!с ПТ-РСПв, антс со Ь!и|! со |ие|пЬгапея тсигсиа иопЬеги Ыоп|иц 1Сгорре антс Могяе !993; Пе ес а1. !995; 5сЬкст аит! Етая !9951. СЬаиа!иа |Ье соийпоия |ьеП со ргее|РЬасе К!чА Егош сЬе атсиеоия РЬаве ЕСЬошстуияЫ аи|1 Мас!теу 19951, ая |ЕеяспЬе|1 Еи 5сер 5, агеас1у ге|Ькев сЬе 1ече! оЕ соисаиииаПои тчссЬ рготеоа!утаив аитС ро1уяассЬагЫея антс е1ипшасея и|о|с оЕ сЬе ргоЫеиь шеи!топе|1 аЬоче. Со1!есс йе ргес1РЬасе|1 К!х!А Ьу сепсгЕЕпцасюп ас гпахппшп яреет! Еог 10 пшшсея ас 4"С ш а тпкгоуипе. чЧаяЬ йе ре!!ес тячке |ч11Ь 75% ейапо!, ап|1 сепсгЕЕипе аиа1п.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
