Sambrook, Russell - Molecular cloning. Laboratory manual - v.1 (522940), страница 161
Текст из файла (страница 161)
Кепюче апу геша1пши есЬапо1 |ч11Ь а йврояаые РЕрессе 11р. 5соге сЬе преп сиЪе оп сЬе ЪепсЬ Еог а Ее|у пиппсев со а1!о|ч сЬе ейапо1 со ечарогасе. Ро пос а!1о|ч ре!1ес со |1гу соп|р1есе1у. А|Ы 50-100 Ес! оЕ РЕРС-сгеасет! Н О. Ьтоге СЬе КХА яо1исюп аС вЂ” 70"С. Аййссои оЕ Ю5 со 059в ЕоПо|четС Ьу ЬеаПиц со 65'С шау аьЬс йяяо!исюи оЕ |Ье реПес. Еясппасе сЬе сопсепсгас1оп оЕ йе К!|!А ая тЕеясг1Ъет! |п Аррепйх 8. Риг!Ете|Е ВЕЕА ь иос ииишие со тсеагатсатсои Ьу К24аяе айег геяыреииои |и |Ье 0,5% 5135 яо1исюи. 5огие 1ичеяссаасогя |Ьегеуоге ргесег со йьо!че Йе реПес оЕ П14А |и 50 — 100 и! оЕ ясаЬ|11тетс ЕогтиатпЫе аитС |соте йе ю1исюи ас — 20 С 1СЬошетуияст! !9921. йтяА саи Ье гесочеге|Е |тоти ЕогтиатиЫе Ьу ргес|р|сапои |ч1й 4 чо!шпея оЕ е|Ьаио1. Рог ЕшсЬег |ЕесаПя, р!еаяе яее сЬе ране! ои 5ТОКАСЕ ОГ КЬСА |и Ргососо! !.
5135 яЬои!П Ье гешочетС Ъу сЫогоуопи ехсгасПои антс ясаитСагтс есЬаио! ргее!Р|сапои ЬеЕоге еитуи|аПе сгеаси|еис оЕ сЬе К!я!А Ее.а., рпшег ехсеия!ои, гечегяе сгаияепрсюи, аит! |и Ысго !ганя!ас!оиЬ ТЬе гейяяо!четС К19А сап сЬеи Ъе ивет! Еог шртеА рипйсасюи Ьу оПао(тЕТЬееПи!ояе еЬ|ошасоагарЬу 1ргососос 31, ог аиа!утес! Ьу всаитсагт! сесЬистСиея висЬ ав Ыос ЬуЬпйтас|ои Ергососо!я 7 аитС 81 ог шарр!их Ергососо!я !О, 11, аитС !21. РтятА ргерагетС Йоги с|вшея ь цеиегаПу иос соисапниасетС со а ятаи!Псаис ехсеис тчссЬ !у!я!А. Но|течет, К|я!А ргерагет! Егоги ееП!шея иитсегао!иа яроитаиеоия ог сит!исая! арорсояся ь ойеи сои- таю!пасет! |чиЬ Ьацшеиь оЕ тСеагатсе|Е аеиошсс Г|ЬЕА. КЕ9А ргерагетС сгош сгаияЕессетс ее10 ь а!гиояс а1|чауя соисашсиасет! Ьу Егаашеися оЕ сЬе РтчА ивет! Еог сгаияуесс!ои. 5оше |ичеяацасогя сЬегеЕоге сгеас сЬе Пиа! КтяА ргерагабои тчссЬ К|чтиве-Егее 13||вате ЕбпПо аи|1 МагаоПя 1990; яиипя ес а1.
! 9931. А! сегиаПче1у, Егаашеися от Е)!я!А сиау Ъе гешоче|Е Ъу ргерагспа ро!уЕА1' ЙтхтА Ьу оПаоЕ|СТ1 сЬ|ошасоагарЬу. 7.14 С>гаргег 7; ЕхсгасНоп, Риг(7гсас(оп, апс(Апа|уя(я о(' тК>я>А Ггот ЕийагуоНс Се1Ь ОЕ!СО(с3Т)-СЕЕЕЕ>ЕОВЕ О!!Во(с|Т> сопйпиея со Ье Леан||у ехр101(ес3 ая ап ай>п|су 3$8апс3 со |ю|асе апс3 ригйу ро|у(А) гпКЧА, еяяеп$$айу ая с|еясг|Ьес3 Ьу Ачй апс3 Еес|ег (1 972) апс3 Л|а|шъасо апс3 Ес|гпопс|я (1 972).
Еог йЬ ригрояе, йугпЫу|асе 03$8огпегя 12 — 1 8 гея|с|иея |п |епВ(Л аге соча|еп(1у ассасЛес| 1о а яо1$с3 гпаспх (июайу сейи|ояе). ТЬе ясапс|агс3 гпейос| о( яупйеяВ о( йе о||Вогпеш, рюпеегес$ Ьу С!!Лаги (1964, 1971 Ь (пчо|нея ро|угпепЬайоп о( йугп|- сйпе гполорЬоярЬасе |п йе ргеяепсе о( а сагЬос3$3гп!с|е. Сейи|ояе ь йеп ас|с|ес3, со ччЫсЛ СЬе 01380(Лугп|с|у!асе гпо1еси|ея Ьесогпе аиасЛес3 Ьу геаойоп Ьеичееп йе|г 5-рЬоярЛогу! Егоиря апс3 йе Ьус$гоху| дгоиря о( сейи|ояе. СПЬагп (1964> ияес3 01180(с|Т)-се3303ояе со|игппя сЫейу со ехр!оге ай|и|(у сЛгогпа(оВгарЛу о( ро|упис|еосЫея, яЛочн|пВ (Ьас нагюия ойВогпегя о( аг>епуйс ас|с3 соиЫ Ье е|и|ес$6огп ап 01380(с|Т)-се3!и|охи со|игпи |п а 1егпрегагиге-с|ерепс|еп( ГаяЬюп.
Рог |ю|а(юп о( гпКНА, Лочнечег, $1 ь гпоге сопнеп|епссо ехр3оК сЬе ха|с с|ерепс|елсе о( сЬе ЛуЬг|с3|ъас|оп геасйоп, ая с|еяспЬес3 гп йь ргососо3. О 1 380(с|Т)-сеПи|ояея аге ю| с| Ьу а гегпЬег о( согпгпегс|а3 я иррйегя |п а чапе(у о( цгас|ея йас сйЯег 10 рипсу, Яош гасе, апс$ Ьюпс|$08 сарае|(у. Ая гписЬ ая 10 гпВ о( соса| сейи|аг КЛ4А сап Ье аррйед со а 1-гп| со|игпи о( рас|сес3 03380(с|Т), игЛ|сЛ сап Ыпс| ас |еаяс 500 РВ ог' ро|у(А>' КНА. Ойег яиррог~ Гог ойдо(сВ) СЛас Лане Ьееп ияес3 |гоги Пгпе со йпе !пс|ис|е я!3!сия, соп(гойес$ роге-В|аяя, |асех, ро|уясугепе, апс| рагагпаряейс ЬеасЬ (чнЫсЬ сап Ье гесочегес3 Ьу а гпайпе() (Йэг гечеччя, р|еаяе яее Ногпея апс$ Когяпея 1990; |агге(1993).
ТЬеяе с|ВЫ яиррог(я, а1йоиВЛ пюге ехрепя|че, сап ВЫе Ьесгег рег(оппапсе апс3 аге СЛеге(оге ияес| сЫеЯу Гог тоге ясппцепс сая|ся яисЬ ая сопясгисйоп о( яиЬ(гассве сРЫА 1$Ьгаг|ея, яо3$с3-рЛаяе яулйея|я о( СОХА (е.ц., р|еаяе яее Киг|ЬауаяЛ3-ОЛса ес а!. 1993; ЕЬепмпе 1996), апс$ сарсиге о( яресгйс гпК>4Ая Ьу яапс|ия|сЛ ЛуЬпсйъас|оп (е.ц., р|еаяе яее Нипяа1сег е( а!. 1989; Могг|яяеу е( а!. 1989; Нага е1 а|. 1993>. МАТЕ$91А$.$ А 1МРОКТА>я|Т Ргераге ай геаВепся ияес3 |п СЫя ргососо! нч4(Ь РЕРС-Сгеа1ес3 Н О (р!еаяе яее сЬе 30(оггпасюп рапе| оп НОТЧ ТО нУ!$Я$ ТНЕ ВАТТЕЕ 11Г!ТН КЙА58>. САНТ!ОЬ$: Р|еаяе яее Аррепейх 12 Гог арргорпа1е Лаос|1|од оГ пга(епа18 гпагйес3 ян1(Ь <! >. Вит(егй ап(3 ьо|цй|оп5 Р1еаяе яее Аррепс||х 1 Гог согпропепся оГ ясосй яо1и(юпя, ЬиГ(егя, апс3 геаВепся.
Ю!10(е я(осй яо1иНопя Со йе арргорпаге сопсеп1гассои. 2х Со|ото-3оас(|пВ ЬиГГег 40 гим ТгЬ-С| (РН 7.6) 1 м НаС| 2 гим ЕРТА (РН 8.0) 0.296 (ян>ч) яос1шгп |аигу| яагсояпасе Ргеряге ая Пеясг|Ъес3 Ье!ои. Ма|се ир Тпя-С1 (РН 7.6) Ггоси а Ггеяй Ьои1е |и ашос1ачей РЕРС-сгеасес$ Н О. Ргераге ХаС! аис3 ЕРТА |и 0.196 РЕРС <! > !и Н„О. 5соге Гог яс 1еаяс 12 Лоигя ас 37'С аиг( ашос1яче сйе пихпие Гог 15 пиишея ас 15 ря$ (1.05 $сй>сшг) ои 1сПш8 сус|е (р|еаяе яее |Ле ш|оппаВои рапе|я оп НОЪЧ ТО ЪЧ1Н ТНЕ ВАТТЕЕ чу|ТН КЛ$458 апс3 Р|ЕТНУЕРУКОСАКВОХАТЕ). То ргераге ясеп1е со|ишп-1оасйий ЬиВег, иих арргорпасе апгоииь оГ КНаяе-Ггее аос1с ю100опя оГ Тгь-С| (РН 7.6), НаС!, аис1 ЕРТА (РН 8.0) ги аи К>(аяе-Ггее соисашег.
Айояч сЬе яо!шгои со сои| со -65 С, аис3 йеи ас|с$ яосйши |аигу| яягсояпасе Ггош а |0:ь ясос|с яо1исши сйас Ьая Ьееи Леасег> со 65"С Гог 30 ш|иисея. А1сегиасгче1у, яиЬяЯсисе 0.05 м яосйшп сигасе Гог Тпя-С1, яис3 сгеас сЬе яосйши сигасе! НаС1! ЕРТА пихсиге аис3 яосйши |ашу| яагсояиасе нАсЛ РГРС (р1еаяе яее Ргососо| 1). 5соге со|шип-1оясйий ЬиГГег ас гооис сешрегашге.
Е|исюп ЬиГГег 10 гим Тпя-С1 (РН 7.6) 1 игм ЕРТА (РН 8.0) 0 0596 5Р5 ТЛе ясос|с яо|иЯопя оГ ТгЬ-С1 яис3 ЕРТА ше8 со шя|се е1шши ЬиГГег яйои18 Ье ГгеяЫу аисос1ачес3 (15 ииишея ас 15 ря$ |1.05 1сй>сшя| ои 1сПигЯ сус|е) аис3 йеи г($!исес3 члй йе арргорпасе аиюши оГ аегг|е РЕРС-сгеасес$ Н О. ТЛеи асЫ сйе 5Р5 йоги а соисеисгасес$ ясос1с яо|шюи (10ягя ог 2096) шас|е ш яаеп1е РЕРС-Сгеагег| Н О. А 1МРОКТА|Я|Т Ро пос апегпрс со ясепйъе е|и(юп Ьи((ег Ьу аисос|ан|пВ ая $1 Гго(88 ехсеяяче|у. Ргогого! 3г 5е!есг(оп о! Ро(у(А)ч КХА Ьу О1(Ко(г!Т)-СеИи!ове СЬготагоегарЬу 7.15 ЕЕЬапо! ХаС/ (5 М), КЫаяе-Ггее НаОН (70 АП <! > ОПнге вчогЫпа зо!шюп (гого 10 гг згое1г чдй пеп!е ОЕРС-ггеагед Н О. 5осоит асегаге (3 м, рН 5.2) Ь(ос!е!с Ас!4Ь апг! О!!коппс!ео1(с!еб КХА, гога! Ргерагед аз деяспЬед !и Ргососо1! ог 2 о( гЬЬ сЬаргег.
Сеп1г!1оде5 апс! гсо1огб 5огчаВ 55-34 гогог ог ег)и)ча!епг прес!а! Ег!о!рпгеп1 Сичеоея Тог теаьиппд абвогЬапсе аг 260 пгп ))зе дЬрозаЫе )) ч'-ггапзрагепг шейасгу1аге енчеггев ог папдагд г)наг!а снчеггеь. Ве(оге апд айег нзе, зоа)г г)наг!а еочепез й сопсепггагед НС!нпейапо! (1:1, ч)ч) гог аг 1еазг 30 инпшез апд гЬеп ьчазЬ ехгепз(че!у ги згеп1е Н„О. Е)!вросо!итп (В(о-Каг!) ог а Развеиг рвреое р!иееес) чч!ГЬ зГег)!е е!авя ччоо! ТЬе Рыросо)шпи яЬонЫ Ъе ггеагед ьч)гЬ ПЕРС (р)вазе вее йе гп!оппабоп раие1 оп О!ЕТНУЕРУКОСАКВОЫАТЕ). ТЬе р1оПВед Раьгенг ргрегге зЬоо!д Ье згеп1ыед Ьу Ьардпа 1ог 4 Ьонгь аг 300'С. Еди!ртепГ !ог яГогаПе оу КА)А Р1еазе зее йе ране! оп 5ТОКАСЕ ОГ К)ч)А ги Ргососо! !. О!!до(с)Т)-сеПи!озе ТЬЬ гезгп (з нвнаПу рнгсЬазед еопппегсгаПу аз а дпед роячдег, !)зе а ЫВЬ раде о( геяп, знсЬ аз Туре Ч11 оППо(г1Т)-ееПн1ове (гош РЬаппаега.
5огпе ргогосо!з саП гог гЬе ше о! Ро!у()))-ВерЬадех гагЬег гЬап о1гПо(дТ)-сеПн1ояе. А!гЬонВЬ ЬогЬ геапв В)че ехсеПепс гезн!гз, оПВо(дТ)-ееПн1озе Ь рге(еггед Ьесаые о( гп дшаЬ)Пау. Ноъчечег, ро1у(ЩВерЬадех Ьаь а (аягег Повч гаге, ячЫеЬ Ь а сопчеп1епсе вчЬеп!агае чо1шпев аге го Ъе развед гЬгонВЬ гЬе со!шнп. Со!шпы о! оПВо(дТ)-сеПн1озе сап Ъе згогед аг 4'С апд геовед гпапу сипев. Веичееп нзеь, геВепегаге йе со!шип Ьу зег)непг(а1 вчазЫпВ чдгЬ НаОН, Н О, апд со!нгпп-!оагПпП Ън((ег аь г1евспЬед )и бгерз 1, 2, апд 3 Ье!овч.
5рпп со! нгппз (р! еаье зее Аррепйх 8) синга(п(пВ оПВо(дТ)-сеПн1озе аге ачаг1аЫе !гого зечега! сопнпегсга1 гпапн(асгнгегз. рН Рарег (рН Теяг 5!прь, 5!ата) ЯаГег ЬагЬ ргезе! Го б5 С МЕТНО0 йе1 1)р апг! ! оаг! 1Ье Со!огпп 1. 5нзрепг1 0.5-1.0 П 01 о!(По(дТ)-се!1н!оье (и 0.1 Ы ЫаОН.
2. Ронг а со!шпп 01 01(По(дТ)-се!1и!оье (0.5-1.0-ш1 рас1сед чо1шпе) ги а РЕРС-ггеагед Т)(зросо!игпи (ог а Разгеиг ргрепе, р1нППед чч(гЬ ягеП1е а!авз ччоо1 апг1 згег(1(хед Ьу Ъа(г(па Еог 4 Ьошя аг 300'С). ТАгаяЬ гЬе со!шпп яч(!Ь 3 со!шпп чо!шпея о( вгеп1е ПЕРС-ггеагед Н О. Кеер ш пинг( йаг нр го !О шП о( соса! КХА сап Ье!оадед оп!о ! гп1 о( рас1гег( оППо(дТ)-сеПн1озе. !( згпаПег грлапггпез о! гога! КХА аге ыег(, гЬе апюнпс о( оПВо(дТ)-ееПо1озе зЬоп!д Ье геднсед ассоггПпВ1у со ачогд 1озз о(ро1у(А) ' К)я)А Ьой оп йе со1шпп апд днг(пП гЬе знЬзецнепг вяерз. 3.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
