Sambrook, Russell - Molecular cloning. Laboratory manual - v.1 (522940), страница 165
Текст из файла (страница 165)
!г (Ь!х аЬ!г( |неге а1!о|чед |о ргосеед ипЬ|п|1еге|1, а яеер РН цгад!еп( |чои!д гогт аь згпа11 !опх !п йе Ъийега пицга(ед гарЫ!у а1опц (Ье це! ггот йе сайо|1е (О'Соппег е| а1. 1991), ге|ш!Впц !п гепюна1 ог" |Ье ц1уоха1 а|Ыис| ггот йе РХА (Ха[сауа е| а!. 1968). Рог тапу уеагя Ь Ьах (Ьегегоге Ъееп песеааагу |о гес|гси1асе |Ье Ьи|Тег п|есЬатсаНу ог (о гер!асе Ь а| геци1аг !п(егна!ь диПпц йе е!ессгорЬоге|к гип. А пюге гесеп| ео!идоп со (Ь(а ргоЫегп Ы |о иае а тоге агаЫе е1есггорЬогеяа ЬигТег соп|апппц а ъчеа[с асЫ апд а ъчеа1| Ьахе ъч!(Ь япп)аг РК на1иеа (Вигпег( 1997).
5(а(п!пц ц!уоху!а|ед РХА !п ацагоае це1а Ьаь а1ао Ъееп а ргоЫет ипд1 гесеп|1у. 5(а!и!пц йе це1 сдй е(Ь!д(шп ЬгогпЫе аг(ег е!ес(горЬогеяа !а (паепа!(!не Ьесаихе ог йе Ь|цЬ Ъас)гцгоипд ог попарес|йс ()иогеисепсе. Асг[д!пе огапце, нчЬкЬ Ьах Ьееп иаед гог уеага |о х(а(п 1)ХА апд Р)х(А (Р!сЬагдх ес а1. !965), ц(нее а(гопцег а(цпа1а |Ьап ей|йшп ЬготЫе Ъш гег)и!геа ех|епьЫе |чахЬ|пц о( гйе це(. 5|ашшц йе Р(х(А диПпц ц(уоху1а(юп бе(оге (оад(пц |Ье це( И ах ацчауа ьеетед (о Ье ап ипргоппяпц арргоасЬ япсе е|ЬЫш|п ЬготЫе тчаа герог(ед со геас| |ч!й 81уоха1 7.27 7.28 СЬаргег 7: Вхсгас6оп, РиггЕ!сас(ои, аиг( Аиа!уяь оу' тК)чА 7гот БиЕагуо6с Се1Ь (МсМаьсег апс) СаппкЬае) 1977).
Кесепс1у, Ьоччечег, Сгйпгсегпапп апс) КоерьеП (1994) апг( Вигпеи (1997) Ьаче герогсес1 СЬас КХА сап Ъе еЕЕесбче)у яаспес1 с(иппВ с1епасигасюп ъч(сЬ Е)уоха1 апс1 йас йе Пш(сь оЕ с(есессюп аге -10 пВ оЕ КЬ(А рег Ьапй Ноччечег, ьисЬ Ь(ВЬ ьепя6чгсу согпеь ас а рпсе: 5са(п(пЕ чч(сЬ есЬЫиип ЪгогпЫе геьи1сь ш а гпоссеьс с)есгеаье ш ЬуЬгЫ(хас!оп ейк(епсу аЕ(ег сгапьЕег оЕ сЬе К)х)А со а псепсЪгапе (ЧгП)с!пьоп ес а).
1990). 1Е а с(есгеаье сп ЬуЬпйхасюп ейк(епсу 18 ипассерсаЫе, йеп есЬЫшсп ЪгошЫе ьЬои16 Ъе 1еЕс оис оЕ йе 51уоха! геас6оп пихсиге апс1 5серь 1 сЬгоиЕЬ 5 ьЬои16 Ъе ЕоПосчес) аь (пйсасес(. АЕ(ег е)ессгорЬогеяь, сЬе оисьЫе 1апеь оЕ йе аЕагоье де! сои!а(п!пц сЬе яке ьсапс)апЬ ьЬои!д Ъе сш Егош сЬе це!, шсиЪа(ес1 Еог ЗО пипиСеь ас гоогп сегпрегашге !п 0.05 М )ь(аОН сопсаш!пд 1 )сц(ш! ейЫшш ЬгогпЫе, апс( рЬогоЕгарЬес) чч(СЬ (Лг сПшпспа6оп. ТЬе гешашс)ег оЕ йе Ее! сои!а(п(пВ сЬе сеПи)аг КХАь (ь сЬеп ргосеььес) аь с1еьспЬес1 ш Ргососо1 7. МАТЕВ!АЕБ ,В, СМРОКТАНТ Ргераге а!! геацеий ыес1!и сЬсь ргососо! ьч!сЬ Кмаье !гее Н О (р(еаье ьее (Ье !и!огшаСюи раие( ои НО(47 ТО САГВь( ТНЕ ВАТТЕЕ ЪЧ(ТН КХЛ56). САНТ!О(х(: Р1еаье ьее АррепсПх С 2 Еог арргорпа(е Ьапг)!1пд оЕ гпа(епа18 шагЬед ч4СЬ <! >. ВНЕЕег5 аое! Яо!сс6оо5 Рсеаье ьее АррепеПх С Еог сопсропеп(ь оЕ ь(ос(с ьо!иС!опь, Ьи((егь, апг( геаВеп(я ОПиге ь(ос(с ьоси6опь Со СЬе арргорпа(е сопсеп(га6опь.
!Ох ВРТЕ е!еесгорЬогеь(ь ЬиИег 100 шм Р1РЕ5 (р!Регаяие-1,4-Ь!ь(2-есЬаиеыИоим асЫ)) 300 гим ВЬ-Тпь (ЕВь(2-ЬугохуейуЦиишоспь(Ьуг1гохугиесЬу!]гиесЬаие) !О гиМ ЕС)ТА (РН 8.0) ТЬе Виа1 РН о( йе 10х Ьиу(ег и -6.5. Ргераге сЬе Сох Ъи((ег Ьу адгПи8 3 8 о( Р1РЕ5 (Егее асЫ), 6 8 о( ВгяТпь (Егее Ьаье), аис( 2 пг) о( 0.5 м ЕГгТА (РН 8.0) со 90 ги! о( 6(ьс(1)ес( Н О, йси сгеа6и8 йе ьо(ииои ьч!сЬ ОЕРС, Еиа) соисеисгаиои 0.196, Еог с Ьоиг ас 37'С, аиг( сЬеи аисос!ач!и8 (сог гааге с(еса!1ь, р1емс ьее сЬе ш(опиаиои раис) ои О!ЕТНгЕРгКОСАКВОЫАТЕ).
ОМ5О <!> РигсЬаье а ЫВЬ Вгаг(е о( ОМЕО (НРЕС Вгас(е ог ЬсССег). С!уоха! Сопииегсга! ьсос1с ьо1шюиь о( 8(уоха! (4098 ог 6 м) соисаш чапоць Ьус(гасес( Еопиь о( 81уоха1, аь чге!1 аь охЫаиои ргоаись ьисЬ аь 81уоху1к асЫ, Еогиис асЫ, аиг( осЬег сошроиииь сЬас саи с(е8гас(е КС(А, аис( йеге(оге ишя Ье гешочег( (р!еаье ьее Арреийх !). С!уоха! геае6оп пихсиге 6 ш! о(ЕГМЕО 2 ги( о( г(еюи(хес( 81уоха1 7.2 ги1 ос сох ВРТЕ е!ессгориогеьп Ьийег 0.6 ги( о(8096 81усего! (и Н О 0.2 ги) о(ейггВши ЬгогиЫе (!О ш8)ш! !и Н О) <! > ЕПчЫе !исо ьгиаП а1(срюсь аид яоге ас — 70'С. КА)А це1-!оас(705 Ьиууег Се!5 Ааагоье де! Саьс аи а8агоье Ве1 аь с(еьсг(Ъег( !и СЬарссг 5, Ргососо( 1 ш Сх ВРТЕ е!ессгорЬогеяь Ьи((ег.
Уье а согпЬ ьч!й ас 1еаьс Еош пюге ссесЬ сЬаи сЬе ишиЬег о( КНА ьагир1еь иис(ег сеьс. ТЬеье ехсга!аиеь аге мед Сог КХА яхе гиагЕегь аис( гиии!и8 с(уеь (р!еаье ьее 5сер 4). А 1.596 а8агоье Ве1 Ь ьи!саЫе Еог геьо!ч(и8 К5(Аь ш сЬе 0.5 — 8.0-)сЬ яхе гаи8с. Ьаг8ег КХАь ьЬои16 Ье ьерагасег( ои 1.096 ог 1.296 Ве!ь. Ргогосо! 53 5ерагапоп оЕК1ъГА АссоггЕЕпд го 51гег Е!ескгорБогеык оу С1уоху!агегЕ ЙГъГА 729 прес!а! Ецп!ркпепЕ ЕГ101ргпепг Гог Ьопгопга1 е1ессгорЬогеяк А рагс!си!аг е1ессгорЬогеяк аррагагт кЬои1й Ье гекегчей Гог КХА апа!уяк, С1еап е1есггорЬогеяк гап1ск апй согиЬк окей Еог е1есггорЬогеяк оЕ КХА Гргогосо1к 5 апй 61 ъчКЬ йегег8епг ко1игюп, пикс ги Н О, йгу ъчггЬ егЬапо1, апй ЕЬеп ЕН члй а ко1и6оп оЕ 396 Н О .
АГгег 10 пипигек аг гоопг гепгрегагиге, пике ЕЬе е1ессгорЬогеык сапЫ апй согпЬк ЕЬогоиЕЫу ъчпЬ Й О ггеаъей чйгЬ 0.1с6 РЕРС. Яи!ег, Егапкрагепс Иасег ЬаЕЬ ргекеЕ Ео 55'С МЕТНО0 1. 5сг ир ГЬе 81уоха! йепаъига6оп геас6оп. 1п ясп!с ш!сгоЕи8с ЕиЪек пих: 2 НГ 10 1г! КХА Еир го 10 рф 8!уоха1 геас6оп пихшге 1УР го 1О 08 оЕ КХА гпау Ье апа!усей Ги еасЬ 1апе о! ГЬе Ее!. АЬипйапг пъКХАк 10 196 ог пюге оЕ йе пгКХА рори1агюп1 сап нкиа11у Ъе йегесгей Ьу погйегп апа1уяк оЕ 10 08 оЕ гога! се1! и1аг КХА.
Регес6оп оЕ гаге К 1Ак гегГшгек аг 1еакг 1.0 08 оЕ ро!уЕА1' КХА. 5атр!ек сопгагпгп8 КХА ыге тагГсегк кЬои!й Ье ргерагей гп 81уоха! геас6оп тгхшге 1п йе кагпе ъчау ак ЕЬе КХА сагир!ек ипйег гекг. Р!саке кее ЕЬе 1пггойис6оп го Хогйегп НуЬпйгабоп ГЕсГиа11г1п8 Апюипь оГ КХА 1п Хогйегп Се!к1. 2. С1оке ЕЬе Еорк оЕ йе гпкгой8е 10Ъск, апй шсиЪасс ЕЬс КХА ко106опк Еог 60 пипиЕск аЕ 55 С. СЬ61! йс катр!ек Еог 10 пипи!ек ш ке ъчасег, апй ЕЬеп сепъпй8е йегп Еог 5 кесопйк го йерояг а!1 оЕ йе Ви1с1 ш йе Ьопош оЕ ЕЬе писгоуп8е гиЪек. 5огпе Гпчек68агогк ргсЕег го Ьеаг ЕЬе КХА капгр!ек ЪеЕоге е1есггорЬогеяк Еог 10 пипшек ас 65'С.
3. 'ъъгЫ!с йс кашр1ек аге ЕпсиЬа608, шяа!1 йе а8агоке 8е! ш а Ьопгопеа! е1есегорЬогеяк Ьох. АсЫ киЕЕЕс!спс! х ВРТЕ е!есъгорЬогеяк ЬиЕЕег Го сочег йе 8е! Ео а йерй оЕ -1 шгп. 4. АсЫ 1 — 2 р! оЕ КХА Вс!-!пай!08 ЬиЕЕсг го йс 81уоху!а!ей КХА кашр1ек, апс1 ъчЕЕЬои! с1е!ау, 1оад ЕЬе ц!уоху!аЕсс! КХА катр!ск Еиъо ЕЬе ъче11к оЕ ЕЬе 8е1, 1еагйи8 йе Еъчо оиъегшокъ!апек оп еасЬ яйс оЕ йс Вс1 сдпр!у. Еоас1 ЕЬе КХА яге гпаг1сегк Еи ЕЬе оиъкЫе 1апек оЕ ЕЬе Вс!. 5. Саггу оиъ с!сссгорЬогсяк а! 5 ъг1сш ип61 йе ЪготорЬепо1 Ыие Ьак пи8гаъей -8 сгп.
Ряп8 ЫКЬег чо1га8ек йиип8 е!есггорЬогеяк 1еайк со ктеаг1и8 оЕ Ьапйк. Ь!пс!е1с Ас1Г15 апд О!коппс!еобде5 КАГА кагпр!ек 5агпр1ек оГ гога! ог ро!уЕА1' КХА кЬои!й сопякг оЕ ир го 10 08 оЕ КХА Ги а чо1игие оЕ 1 — 2 р!. Еошча!епг апюипгк оЕ сЛе КХА катр!ек го Ье апа!усей агс гепючей Егот кгога8е Ер!саке кее йе рапе! оп 5ТОКАСЕ ОР КХА Ги Ргососо! 11. РгесГРГгаге ЕЬе КХА чйй егЬапо1 апй йкко1че ЕЬе реПег Ги ап арргориасе чо1ипье оГ кгеп! е, РЕРС-ггеасей Н О.
ТЬе ргекепсе оГ кара ог 5Р5 гп Йе кагпр1ек, ог 1оай1и8 оЕ >1О 08 оЕ КХА рег!апе, сап саике ыпеапп8 оЕ ГЬе КХА йиг1и8 е1есггорЬогеяк. МАГА яге гпагГсегк 61уоху1асей КХАк апй РХАк оГ ЕЬе кате ыге пи8гасе ГЬгоиЕЬ а8агоке Ее!к ас ГЬе кате гаге. Ноъчечег, ъче гесогпгиепй ияп8 КХА!аййел Ее.8., Егогп ЫЕе ТесЬпо1оейек1 ГЬас сопгагп КХАк оГ 9.49, 7.46, 4.40, 2.37, 1.35, апй 0.24 !сЬ гп 1епЕГЬ. ТЫк а!1оъчк ГЬе тагГъегк го Ье шей ак кеп6пе!к со йегесг КХаке сопгапйпабоп ог ойег ргоЫегпк йас тау оссш йиг1и8 81уоху1а6оп ог с1ессгорЬогеяк. Р1еаке кее ГЬе !пггоъ1ис6оп го Хогйегп НуЬпйга6оп ргесейп8 Ргогосо! 5. 7 30 СЛаргег 7: Ехггасдоп, РигГ гсагюп, аид Апа1уя)я о7 тКХА агат ЕиЕагуопс Се))я Ч)яиа1)яе йе К)я)Ая Ъу р1ас(пц (Ье ке1 оп а р|есе оГ 5агап гЧгар оп а Е)Ч (гапя11ипппасог.
А)1Вп а (гапярагеп( гп1ег ид(Ь йе я(а)пед ке1 апд рЬо(оВгарЬ (Ье ке1 шпаг Е)Ч К1шшпадоп. Р|еаяе яее (Ье репе! оп СНЕСК(Ь)С ТНЕ О()АЕ)ТТ ОГ РКЕРАКАТ)О)я)5 ОГ КМА. Ияе (Ье рЬо(одгарЬ (о шеаяиге гЬе д(я(апсе Ггогп йе 1оад|пВ ччеП (о еасЬ оГ (Ье Ьапдя оГ К)х)А. Р1ог йе!оВ,е оГ йе Иге оГ (Ье Ггарпеп(я оГ КЬ)А ака(пяг (Ье д|я(апсе пега(ед. Е)яе йе геяи!((пВ сигче (о са!си1а(е (Ье яжея оГ йе К)х)А ярес|ея де(ес(ед Ьу Ыо( ЬуЪпйкадоп. Ргосеес1 яч(й )пягпоЬК1|каг)оп оГ К)ч)А оп(о а яоЬд яиррог( Ъу ирчгагд ог доячпччагд сар|11агу (гапяуег (р1еаяе яее Ргояосо! 7 ог йе рапе1 оп АЕТЕКМАТ)ЧЕ РКОТОСОИ САР)ПАКТ ТКАМ5- ГЕК ВУ 0ОХМФАК0 ГЕОЪЧ ш Рго(осо1 7).
СНЕСК!)Я)С ТНЕ ОЕ)АЕ!ТУ ОГ РКЕРАКАТ!О)я(5 ОГ К)я)А А((ег е)ес(горЬогея)я о( КЬ)А |п йе ргеяепсе о( ейИИгп Ьгопиде, йе 285 апд $85 ярес|ея о( гКНА яЬои|д Ье с|еаг|у ч)я)Ые ипдег ОЧ $$)ит)па()оп, ая яЬоиИ а пюге д)((ияе, (аяигп)ига()пи Ьапд соп1рояед оГ(КЬ)А, 5.85 апд 55 гКМА. К (Ье КЬ)А ргерагадоп )я ипдецгадед, (Ье 285 гКМА Ьапд яЬои|д Ье я(а)пед а( арргох|гпа(е|у Ьяя|се йе )п(епя)(у о( (Ье $85 Ьапд апд по ягпеаг)пе о( еКЬег Ьапд яЬоиИ Ье ч)я)Ые.
5(а)п)пВ с|ояе (о йе )оад(пе яче|| |я а я)Кп (Ьа( 06)А )я яд|| ргеяеп( )п йе ргерагадоп. гпКНА 'ь )пч)я)Ые ип)еяя (Ье ие! )я очег|оадед, ТЬгее ойег те(Ьодя сап Ье ияед (о сЬес)е йе )п(еВг)(у оГ КМА; ° Апа!уия оу (Ле яие оу с0АА яуп(Лея(кед иягпц о))до(с)27 ая а рг)тег. Кад(оасдче с06)А 'ь яупйея)хед )п а р||о( Вгяия(гапд с0НА геас(юп.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
