Sambrook, Russell - Molecular cloning. Laboratory manual - v.1 (522940), страница 164
Текст из файла (страница 164)
!шшоЪ(1(хед пис1ек асЫв сап |ЬегеЕоге Ье ЬуЪг(д)хед велрлепда11у то венега1 д!ГЕегепт ргоЬев. Ригйепиоге, Ьесаиве пис1ек ас!дв саи Ье ЗпппоЪЗ!!хед оп пу!оп ш ЪиГЕегв оЕ!оъч юшс втгеп8|Ь, тгапвГег оЕ пис!ек ас)дв Ггош Ве1в то пу1оп сап Ье сагпе|1 оит е1естгорЬогетка11у. ТЫв а|Ь апта8е сап Ье иве6л1 ънЬеп сар|11агу ог часиши тгапвЕег Зв |пеЕ6степт, Еог ехашр1е, ъчЬеп япа1! пю1еси1ев оЕ К)ъ)А аге тгапвЕеггед Егош ро1уасгу1ашЫе 8е1в.
Тъчо турев оГ иу!оп шешЪгапев аге ача|1аЫе сопипегс|а11у: иппюс66е|1 (ог пеитга1) пу1оп апд сЬаг8е-шос66ед пу!ои, ъчЬ|сЬ сагпев апппе 8гоирв апд Зв йегеЕоге а1во Зсиоъчи ав роядче!у сЬаг8е|1 ог (Г) пу!оп. Вой турев оГ пу!оп Ь~п|1 яп8!е- апд доиЫе-ягап|1ед пис1ек ас(дв апд гетеитюп Зв ср|апдтадче ш во1чептв ав сбчегве ав ъчатег, 0.25 Н НС1, апд 0.4 Н )ъ)аОН. СЬаг8ешой6ед пу1оп Ьав а 8геатег сарасду то ЬЗпд пис1е(с асЫв (вее ТаЫе 7-3), Ъш К Ьав а |епдепсу |о 8|не Ысгеавед!ече!в оЕ Ъас)|8гоипд ЬуЪг(д(хат(оп, ънЬЗсЬ геви!68 а| 1еавт Зи рагт, Еготп попврес|6с Ь|псбп8 оГ пе8айче1у сЬаг8ед РЬоврЬате 8гоирв |и К)ъ)А то |Ье роядне1у сЬаг8ед 8гоирв оп йе вигЕасе оЕ тЬе ро!ушег.
Ноъчечег, |Ь|в ргоЫегп сап ивиа11у Ье соптго1!ед Ьу ияп8 Зпсгеавед т)иапт(т(ев оЕ ЫосЫп8 а8ептв ш |Ье ргеЬуЪг)д(хат)оп апд ЬуЬпйхадоп втерв. Ну)оп Зв а 8еиепс пагие Еог апу Зоп8-сЬйп вуидтет)с ро!угпег Ьач|п8 гесигпп8 ро1уатиЫе ( — СОЬЗН-) 8гоирв. Ь)у)опв о( д)Г(егепт |урев аге Гоггиед тгоп| наг)оив соп|Ь|иаиоив о( д)ас)дв, йагп|пев, аи|1 апПпо ас)|Ь. Зи |Ье в|аит(агд по|пепе)атосе, а в(и8!е иии|ега) (е.ц., и)(оп 6) Зпйсатев йе пип|Ьег о( сагЬоп атоитв Зи а п|опои|ег. Тъчо иигпЪегв (е.8., лу!оп 6,6 ог 66) Зпйсате а ро)уп|ег Еогптед Ггопз йапПпев аи|1 д)Ьав(с ас)дв. ТЬе Пгвт пии|Ьег |пгйса|ев йе иип|Ьег о( сагЬои а|оп|в верагаии8 |Ье п)|го8еп а|оп|в о( |Ье д)аш)ие, апд |Ье весопс( пигиЪег Зпсбсатев |Ье ииптЪег о( втга(8Ь| сЬа|п сагЬоп атошв Зп |Ье |ПЬавк ати(по ас)й Г|Ьег 66, |Ье ог)8)па! пагпе о( пу!оп, ънав г)ече)оред Зп |Ье т 930в Ьу ЧчаПасе Сагодзегв, а сЬетп(вт ъъог)ь|и8 Гог Оиропт (вее ГеикЬеП | 999).
Н(в |Пвсоче|у, ъчЬкЬ 8геън (гоги а с)есат)е о( гевеагсЬ оп |Ье втгисолге аис) аввеп|Ыу от' 1ои8-сЬа|и ро)уаи|Ые ро(уп|егв, вЬои!|1 Ьане Ьееп |Ье саряопе о( Ыв сагеег, Ьит Зпвтеад ъчав |Ье сага)уя то тга8еду. Саго|Ьегв, итоге а вйеп|ЗПс аев|Ьете |Ьап а Ьнепт(е(Ь сеитигу согираиу п|ап, Ьеса|ие ~ деер!у дергеввед Ьу йе Ыеа йат Ье Ьад дьсочегед а п|атепа) ъчЬове сЬ)е( иве вееп|ед то Ье ав а гер!асе|пеит Гог я)П в(ос(т)п8я Зи т 937, а Ееън г(аув айег Я!Зп8 Ь)в ратепт Гог ГЗЬег 66, Саго|Ьегв, Зивт 4| уеагв о)д, ЗаПе|1 Ь)и|ве)Е Зи а Ьоте) гоо|и Ьу ячаПомвп8 суаиЫе.
Оироит ргевве|1 аЬеа|З ъий |Ье соп|тиегс)а) с)ече)орп|еит о( Г|Ъег 66 аи|1, Зп а сегегпопу |Ьат ънои!|1 Ьаче Ъееи апа|Ьегиа то Сагод|егв, с(е|Пса|ед |Ье патпе пу1оп то Пте риЪПс по|па!и ат а Нега)д ТпЬипе Гогииь Зи Ос|оЬег о( |Ье (оПоив)п8 уеаг. 5(ос)т)п8в, о( соигве, |игпед оит то Ье Зивт йе 8гя о( а! 1ие от пу!оп ргодиств, вопле о( ънЫ)сЬ ъчои!д вите! у Ьаче 8(неи Сагойегв 8геат р!еаялге, Зпс1ийи8 регЬарв, пу!оп птегиЪгапев тог Залитой!Зх(п8 пис)ек ас||Ь. Г)|ТЕегепт Ьгапдв оЕ пу1оп гиегпЬгапев аге ана|1аЫе йа| чагу !и |Ье ехтепт апд туре оЕ сЬаг8ед 8гоирв апд йе депя|у оЕ йе пу1оп тиевЬ.
Сошрапвопв оГ йе еубс|епсу оЕ |Ьеве |пеи|- Ьгапев Еог погйегп Ыотдп8 апд ЬуЪг(д(хат(оп иидег чапоив соис66оив аге риЫЗвЬед Еготи |иие то типе (е.8., р1еаве вее КЬапд)Зап 1987; Ковеп ет а1. 1990; Чнчошеу апд Кгаъчетх 1990; Вес1|егв ет а!. 1994). 1п адс66оп, еасЬ |папиГастигег ргочЫев врес|6с гесоиипепдадопв Гог йе тгапвЕег оЕ пис1ек ас)дв то йе|г рагтки!аг рго|1ист. ТЬе шяпкдопв 8(чеп Зи Рготосо!в 6 (ЬгоиВЬ 8 (погйегп ЬуЪпд)хат!оп) апд ш СЬартег 6, Рготосо!в 8 — 10 (5оийегп тгапвЕег) ъчог1| ъне11 |п а1пювт а6 с|гсшпвтапсев, апд |и ноше савев, у(е1д геви!тв |Ьат ехсеед |Ье шапиЕастигег'в яапдагд.
Епгтодисдоп со Ргососо1г 5, 6, 7, 8, апд 9 7.25 ТАВЪЕ 7-3 РгорегНеа ос Ыу1оп МетЪгапеа С!бед Еог СгптоЪ114хаНоп ос 0ЪСА апд ПЫА Сплаоси Ычсом Раоееагч Ъ!еигаАс Ъ!чсоп Сарасду (и8 пассек ас!д/ст~) -200-500 >50 Ър 400-500 >50 Ър 5Ье оЕ пассек асЫ гецисгед Еог гпахипа! Ъспйп8 1оп ютс асгеп8сЪ очег а поде гап8е ос РН Тгапьсег Ъиссег спппоЪ11гхасюп Ъасдиб Еог С Ъоиг ас 70'С; по чачи ит ге9иСгед ог писд аПса!! ог ССЧ !ггайадоп аг 254 пги; датр тетЪгапеь аге ПепегаПу ехроаед Со С.б ЦСт'; дг!ед тетЪгаиеа гециСге Сбо П!Ипг Сопипегсга1 ргодисса НуЪопд-М Сеие-5сгееп НуЪопгС-ЪС+ 7еса-РгоЪе Нуггаи 4 Сепе-5сгееп Р!иа ТКАМйГЕКК1(ЧС КЫА ГКОМ СЕъй ТО йОЬ10 ЮРРОКТБ ° (урсчагд сарсИагу стапхЕег. ТЬе оПупа! ятр1е апд есопоииса! сесЬищие деч(ьед Ьу 5ошЬегп (1975) сино!чеь ап онеги(8Ьс сгапхЕег оЕ пис!ек асЫх Егогп Пе1 со тегпЬгапе (и ап иригагд йочч оЕ ЬпЕЕег (р1еаае бее Р!8иге 7-2).
А гпа)ог дгасчЬас)с !х ае1есдче геСепдоп оЕ 1аг8е то!еси!еа оЕ пис!егс асЫ ччссЬ!п сЬе Пе!, счЬгсЬ (а саиаед Ъу Пассеп(08, сотргеаяоп, апд деЬу г1гадоп оЕ йе Пе!. ТЬ(а ргоЫет сап Ье ге1(ечед (1) Ьу иа(п8 йе СЬсппеаС Пе14 роаяЫе, (2) Ьу епапгсп8 йас сЬе В!сег рарега ш !пппейасе сопсасс чч(сЬ йе Ве! аге сЬогоиВЫу аасигасед сч!сЬ ЬиЕЕег ЬеЕоге СгапаЕег Ьеупя апд (3) Ьу рагда1 Ьудго1уяа оЕ 8!х(А Ьу а!)са!1 (Кеед апд Мапп 1985) ЬеЕоге сгапаЕег. 1с (а пирогсапс йас рагс(а! Ьудго1уых Ье ихед чдсЬ спос1егасюп япсе очегепсЬпяаяп сап 8епегасе Ега8тепса соо хЬогс со Ь!пд еЕЕсс!епс1у со сЬе тегпЬгапе. 5(псе 1975, йе соппиоп ргасдсе Ьах Ьееп со саггу оис прсчагд сарс11агу сгапьЕег Еог 16 Ьопгь ог ьо. Ноччечег, авсепд!08 сгапзуег 14 посч (спосчи со Ье а!тиас сотр1есе аЕсег 4 Ьопгх (1.кйепьсе!п ес а1, 1990), апд чче почч гесопппепд ишсЬ хЬогсег сгапхЕег Нпсея А тоге хеН- оиь ргоЫегп чдй ахсепд!08 сгапаЕег 15 йе росепс!а! Еог хоппе оЕ сЬе ВЫА со июче Егот сЬе Ве1 си а деасепйп8 йгесдоп соипсег со йе Е!осч оЕ сЬе ЬпЕЕег.
ТЬса аррагепс апота!у осспгх счЬеп йе Ес!сег рарег ппдег сЬе Пе1 14 пос Еп!1у аасигасед чдсЬ ЬиЕЕег. НпЫ 15 йеп дгаччп Егогп ТЬе сгис!а! асер !и погсЬегп апа1уяа 15 йе сгапаЕег оЕ депашгед КХА Егот сЬе (псегьдсев оЕ ап а8агохе 8е1 со сЬе аигЕасе оЕ а псегпЬгапе. ТгапаЕег тиас Ье допе (и а счау сЬас пос оп1у ргеаегчех сЬе йасПЬидоп оЕ сЬе то1еси1ез а1оп8 сЬе 1еп8сЬ оЕ йе Ве1, Ьпс ъчог(са еЕВс(епс1у Еог ппс1ек ас(да оЕ с!шсе ййегепс яхея Очег йе уеагя тапу тесЬодх Ьаче Ьееп Еоипд со асЬ(ече сЬехе Воа1я тс1ийп8 е!ессгоЫосссп8, часшип Ыосс!08, хетЫгу Ыосс(08, апс1 ирсчагд сар!11агу Ыосдп8. 1п адйдоп, хечега! ассетрсв Ьаче Ьееп спаде со ачоЫ сгапаЕег сопср1есе1у Ьу регЕогт(п8 ЬуЬПйхаСюп йгесг!у !и йе Ве! (е.8., р1еахе бее Ршге!1о апд Ва!ага 1983; Трао ег а1.
1983). Носчечег, Ь !а пос с1еаг ччЬесЬег сЬеье сесЬпкрсея счЬкЬ гиау гег)шге ехрепяне р(осев оЕ ег!шртепс, аге аирег(ог со сЬе опупа1 гиесЬод оЕ ирсчагд сар!11агу сгапхЕег (5оийегп 1975). Сегса(п!у, сЬеге доеа пос аеет со Ье апу Воод геагюп со гихЬ оис апд Ьиу а часпшп Ыосс(08 ог е!ессгоЫоссш8 арра- гасы сп сЬе Ье1сеЕ сЬас Ь тч(11 я8п(Ессапс1у пиргоче погйегп апс1 5оисЬегп Ыося Ьерага6оп о1 К,МА Ассогйпц 1о Яке: Е!ес1горЬогеыь о1 С!уоху!а1ес1 КМА ЙгоидЬ Адагоье Се! ь не метно0 065сР(860 (н тн|5 РРотосог (нсоРРОРАт65 сгуохл( депашгадоп |ч!й ацагоае це1 е1ес(горЬогеяа (адар|е|1 (гот МсМах(ег апд СагппсЬае! [1977] апд ТЬотаа [1983] ).
ТЬе сопй(юпхт (ог яти1(апеоиа ц!уоху1адоп ог" Р)х)А апс1 а(а!и!пц идй ей!д(ит ЪготЫе, аа |че!1 аа йе тод!([са(юпа |о йе е1ес(горЬогеях Ьи(уег, аге (Ьоае ог Вшпеи (1997). С(уоха( (ацо (гпоьп ач д!(огву( апд е(Ьапед(а() ь иаед |о е1!т!па(е ьесопдагу агюс(игеып х!пц(е-ъггапдед Р!хА диппц е(ес|горЬогеяа |Ьгоиф ацагоье це!я ТЬе пно аЫеЬуде цгоира о( ц!уоха( геас| ипдег а!!ф|!у ас|д сопд!дои нч!(Ь йе !тво цгоирь о! циапох!пе |о (оггп а суйс соп|роипд |Ьа| ргенеп(а (оппадоп о( !п(гах(гапд 'чча(хоп-СпсР Ьопда (5а(огпаа 1956; 5Ьар!го алд НасЬп|апп 1966; На)гауа е| а(.
| 968). Опсе ех|аЫВЬед, (Ь!ь аддис| 'ь яаЫе ас гоогп |егпрега|иге а| рН < 7.0, ю ап аЫеЬуде пеед по| Ье !псогрога|ед 'в|о |Ье ацагоье це! (МсМах(ег апд Сапп!сЬае( | 977). Весаиае йе ц(уоху(а(ед РНА !а ипаЫе |о (опп а(аЫе ьесопдагу а(гис(игеа, || ю!цгагеыЬгоиф ацагоье це!ь а| а гасе |Ьа| ь арргохипа(е(у ргорогцопа( |о йе (оц| о( !(а яхе (МсМач(ег апд Сапп!сЬае( | 977). Ацагоае це! е!ес(горЬогеяа ог 81уоху1асед РХА тиаг Ье сагпед ои| а| !онч юпк аггепцй |о аирргеаа гепа(игабоп ог" |Ье Р(х(А. ТЬе гиптпц Ъиггега ихед ип(!! гесепс!у (1О тм РЬоарЬа(е ог 40 тм 3-Х-гпогрЬо!!поргорапеаи1|опк асЫ [МОР5]) Ьа|1 1(пп(ед Ъийег!пц сарасду. ТЬия а гпа)ог |1га|чЬас1| |о йе иае ог 81уоха1 аа а г(епа|идпц ацеп| |чае йе ир|чагд ьЬ!й ш РН ог" йе яапдагд е1ес(горЬогеяа Ъийег |Ьа| оссиггед !п |Ье са|Ьойс сЬатЪег дидпц гипп!пц ог йе ацагоае це1.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
