Sambrook, Russell - Molecular cloning. Laboratory manual - v.1 (522940), страница 167
Текст из файла (страница 167)
А1|егпа6че!у, сгапв(ег сЬе Ъи((ег спапиа11у ечегу Ьош ог во |тоги опе Ьи((ег сЬатЬег со йе осЬег. Ки!ег, Сгапврагепг Яагег Ьай ргеве( Го 55 С МЕТНО0 1. Яес ир сЬе с!епасигасюп геас6оп. 1п всеп1е ппсго6лце сиЬев ппх: КХА (ир Со 20 С|Е) 2.0 Р1 10х МОРЯ е1ессгорЬогевп Ьи((ег 2.0 р1 (огтаЫеЬубе 4.0 р! (оппатЫе 10.0 и! ейЫиии ЪгогиЫе (200 РЕ)т)) 1.0 )с! Ав ишсЬ ав 20 РЕ о(КХА тау Ье апа!усе|( (и еасЬ 1апе о(сЬе Ве1. АЬипбапс тКХАв (0.19 о ог пюге о( Йе гиКХА рори1асюи) сап авиа!1у Ье бесессе6 Ьу пог|Ьегп апа!ув(в о( 10 )|Е о( соса1 сеПи!аг КХА.
Рог г(егесг(оп о( гаге КХАв, аС 1еаЯ 1.0 РВ о(ро1у(А)+ КХА вЬоиЫ Ье арр1(ег) Со еасЬ (апе о(сЬе Ее!. Яагир1ев спаса)пшЕ КХА ясе таг)сегв вЬои16 Ье ргерагед ш |Ье вате |чау ав сЬе КХА вагпр!ев ши1ег сев|. 2. С!ове йе сора ос йе гпкгоуиЕе сиЪев, апс) шсиЪасе йе КХА во1исюпв Еог 60 пйпшев ас 55'С. СЬ|!1 сЬе вап|р!ев Еог 10 ппписев ш ке |часег, апс! йеп сепсг)(иае йеш 1ог 5 весопс)в со с)ерояс а1! 01 (Ье ((и!с1 (п (Ье Ьоссогп оуйе ппсгоуиае шЬев. Мапу )пчевс(Еасогв рге(ег со )псиЬасе |Ье КХА во1и6опв Сог 10 гшписев ас 65 С. 3.
Ас(д 2 )с! ос 10х гогша16еЬус!е Ее!-!оайпц Ьигсег со еасЬ вашр!е апс) гесигп йе сиЪев со ап ке Ьис1сес. 4. 1пвса!1 СЬе аЕаговег'Еогша1деЬус)е ае! (п а Ьопхопса1 е1ессгорЬогеяв Ъох. А|Ы виубс!епс 1х МОРЯ е!ессгорЬогеяв Ьибег со сочег йе ае1 со а с)ер(Ь оу -1 ппп. Кип йе Ее1 (ог 5 пппшев 734 СЬаргег 7: Ех пас!)оп, Риг!)гсапоп, апс)Аиа!уж о! тКХА угот Еи)сагуог1с Се!!г ас 5 Ч/сш, апг! йеп !ой йе К)ч)А аашр1ез 1п!о йе иге!1а оГ гЬе 8е1, !еач)п8 йе ьчо ои1егшоаг 1апеа оп еасЬ ыс$е оу йе Ве! егпргу. ноас! йе КЬ!А яке агапс!агс!а ш гЬе ои1аЫе 1апеа оугЬе Ве!. 5.
Кип йе Ве1 аиЬшег8ес) 1п 1х МОРЯ е!есггорЬогеяа Ъиууег аг 4 — 5 Чгсш ипг1! йе ЪгошорЬепо! Ыие Ьаа пщгагег! -8 сш (4 — 5 Ьоига). 1!а1п8 Ь!8Ьег чо!га8са 4иг!п8 е1ес!горЬогеяа !еа4а го агпеаг!п8 оу Ьапг!а. Весапае гЬе РН оу гЬе е!есггорЬогеяа Ьиууег сЬап8еа диг1п8 йе гип, аег ир йе е1есггорЬогеяа гап!с ао йас йе Ъпйег сггсп1асеа сопг1ппоиа1у Тгогп опе сЬатЬег го йе огЬег ла а репяарпс ршпр.
А1гегпапче1у, ггапауег гЬе Ъпууег гпаппа1!у ечегу Ьопг ог ао Копг опе ЪпГГег сЬагпЬег го гЬе ойег. 6. Чьиа1гае йе КЬ)Аа Ьу р1асш8 1Ье 8е1 оп а ргесе оу Яагап гЧгар оп а УЧ ггапя11иш!пагог. А!!Вп а СгапарагепГ ги1ег чг!ГЬ йе агашес! Ве! апс) РЬого8гарЬ ип<$ег 1)Ч г!1шшпа8оп.
Р1еаае аее гЬе рапе! оп СНЕСК!ЫС ТНЕ О11АЕ!ТУ ОГ РКЕРАКАТ1ОЬ!5 ОГ КЬ!А а! йе спи оу Ргогосо! 5. 7. с)ае йе РЬого8гарЬ го шеааиге гЬе г!1агапсе Ггогп йе 1оас!1п8 юе11 го еасЬ оу йе ЬапсЬ оГ К1!А. Р1ог йе 1о8,о оу !Ье а!ке оу 1Ье Гга8шеп1а оу КЬ!А а8апь1 йе йа1апсе пега!ей. Уае йе геаи11!пц сигче го са1си!аге йе а!кем оу гЬе КЬ!А прес!еа с!егессег! Ьу Ъ|ог ЬуЬг!Йхаг!оп. 8. Ргосеег! ичгЬ 1пппоЪ|1!хаг!оп оу КЬ!А оп!о а ао!Ы аиррогг Ъу ирччагг! ог с)огчпгчагс! сарг11агу Ггапа|ег (р1еаае аее Рго1осо1 7 ог йе рапе! оп АЕТЕКЬ!АТ1ЧЕ РКОТОСОЕ".
САР1ПАКТ ТКАЬ!5- ГЕК ВУ ООМ/МЧЧАКО ГЕОчч аг ГЬе епс1 ог Рго1осо1 7). РГО1ОСО! 7 Тгапйег апс1 Г|ха6оп о1 ОепаШгес1 КМА 1о Мегп'огапеь | н моят сляяя, явлст!онлт!оы оя ко!А вч лслвояв сн. Б.ествовновыв ся Ъш а рте!иде со ЬуЬг!д!гас(оп оЕ йе Егасс!опасед рори1адоп со ярес!Есс!аЪе1ед ргоЪея сЬас десесс рагски!аг саг8ес шКХАя. КХА !я 6гяс сгапяЕеггед Егогп ап а8агояе 8е1 со а сччо-д!шепа!опа! яиррогс, ияиаПу а пу1оп шепгЬгапе. Ая дсясияяед гп сЬе 1псгодиссюп со ХогсЬегп НуЬпйаадоп, шчея68асогя ш псапу саяея Ьаче а сЬо!ее оЕ яо!чепся апд гпешЬгапея со Ье ияег1 Еог сгапяЕег, апд гпоге йап опе орсюп Еог аиасЫп8 йе сгапяЕеггед КХА с!8Ьс!у со йе шеспЬгапе.
1п оиг ЬапсЬ, сЬе Ьеяс погсЬегп Ыося аге оЪсашед ЕоПояч!п8 сгапяЕег оЕ К)я)А Егопс КеЬ со пу!оп гпеспЬгапея ас пеисга) ог а1КаПпе рН. ТКАЬ!БГЕК ТО РОЯТ!ЧЕ!У СНАВСЕО )я!У!О)я! МЕМВКАМЕ6 АТ А!.КА!.!МЕ РН Весаияе сЬаг8ед пу!оп гпешЬгапея гесаш пис!ек асгдя гп а1КаПпе яо1шюп (Кеед апд Мапп 1985), КЫА сап Ье ейк!епс1у сгапяЕеггес1 Егогп а8агояе 8е1я !и 8.0 шм ЫаОН чдй 3 м ХаС! (СЬошсхупя16 апс1 Мас1сеу 1994). ТгапяЕег ипдег йеяе сопгПСюпя рагдаПу Ьудго!ухея йе К!Я)А апд йегеЬу !псгеаяея сЬе яреед апд еЕЕсс!епсу оЕ сгапяЕег оЕ 1аг8е (>2.3 КЪ) КЬСАя.
Вееаияе К!я(А сгапяЕеггед !и а!КаПпе яо1исюп Ъесошея соча1епс1у 6хед со йе сЬаг8ед пу1оп гпеспЬгапе, сЬеге ся по пеег1 со Ьа)се йе гпешЬгапе ог со ехрояе К со (ЕСг птагПадоп ЬеЕоге ЬуЪНйхасюп. АПсаПпе СгапяЕег ся пог Егее оЕ ргоЫешя: !С яогпеСипея 8епегаСея а Ь!8Ь 1ече1 оЕ Ьас)с8гоипд ЬуЬгсд)гас!оп, еврее)аПу ячЬеп КХА ргоЬея аге ияед. Ехсепдед ехрояиге оЕ сЬаг8ед пу1оп шешЬгаиея со аПгаПпе яо1идопя (>6 Ьоигя) ехасегЬасея сЬе ргоЫеш. ТЬ!я яЬогссоипп8 сап яошедшея Ье очегсоше Ъу десгеаядп8 йе сгапяЕег типе апд Ьу иядп8 !исгеаяед ашоипся оЕ Ыос!дп8 а8епся !и йе ргеЬуЪгсдсгас)оп апд ЬуЪг(дсгас!оп ясеря. !и адд(сюп, йеге аге герогся оЕ чапаЪс!Пу ш йе ясгеп8й оЕ йе ЬуЬгсдсхас!оп я!8па! 8епегасег1 Ьу КХА айег аПса1гпе сгапяЕег.
ТЬ!я чапаЪггиу гпау Ье ге1асед со сЬе ягч)ссЬ Ьу шапиЕассигегя со пу!оп 66 шешЬгапея, гасЬег йап йе ог!8!па! пу!оп 6 шешЬгапея, ъч(сЬ ъчЫсЬ аПса!)пе сгапя) ег счая Еггяс деяспЬег1 (Кеед апд Мапп 1985). ТКАМБГЕК ТО ЕЛЧСНАКСЕО )я(ЧЕО)Ч МЕМВКАЬ!ЕБ АТ )ЧЕ$3ТКА!. РН ТгапяЕег со ипсЬаг8ед пу)оп гпегпЬгапея ь сагпед оис ас пеисга! рН, ияиаПу сп 10х ог 20х 55С. ТЬе К)4А гя йеп соча!еис!у 1ш)сед со сЬе шаспх Ъу йе сгаг66опа! шесЬод оЕ Ьа)дп8 ипдег час- 7.35 7.3б СЬарсег 7: Ехггагбоп, Риг)Т)саг)оп, апг) Апа!утЬ о)г тй)х!А)сот Еи)сагуогсс СеЕЬ чгещнт д!азе р!а1е рарег !отче!е ргетеет пагосеаи!оее ог пу!оп твгпЬгапе ргетчет Чуиаттап ЗММ рарег 1гапесег Ьпап Е1СС)КЕ 7-2 Стрсчагс) Сар!Вагу Тгапасег Сар!!!агу сгапесег о1 пис!е!с ас!с)а стоги ап а8агоье 8е! со ео!!с) еирропе 'ь асЬ!ечег) Ьу с)гачч!п8 йе 1гапя !ег ЬиССег сгот йе геьегчоа иригагс! 1Ьгои8Ь йе Ве! !псо а яас!с о1 рарег соъче!я ТЬе пис!е!с асн1 'ь еlисес! стоги 1Ье 8е! Ьу а гпоч!п8 асгеагп о1 ЬиСсег апс! ь г)ерое!сес) опто а и!сгосеПи!оье 1!!сег ог пу!оп гпегпЬгапе.
А чче!фС арр!!ес! Со 1!те сор ос СЬе рарег СоъчеЬ Ье!рь Со епаиге а 1!8ЬС соппестюп Ьесччееп СЬе !ауеге о1 гпа1епа! пьес) !и сЬе сгапесег ьуьсет. иит Тот 2 Ьоигк, Ьу Ьеапп8 гп а ттсгоччаче очеп Сот 2 — 3 ппписее (Аи8е1е111 ес а1. 1995), ог Ьу ехрояп8 йе пу)оп гиегпЬгапе со 1Лг 1ггайаНоп ас 2541312 ит. Мосс 1пчесй8а1оге а8гее тч!й КЬапс)11ап (1987) йас КХА 1гпитоЬ)!)гет! оп пу1оп гпетпЬгапеа Ьу 1Л' )ггайас)оп 8епегасеа итоге 1псепке я8па!а 1и погсЬегп ЬуЬпйгасюп йап К)х)А !гпитоЬ11!гес) Ьу Ьа!с)п8. ТЬ!а рго1осо1 ргеьепь йе актера 1пчо1чес! !и 1Ье сгапауег оу КХА Столп ап а8агоае Ве! со а итегпЬгапоиа ьиррогс, гас)!!тагес! Ьу йе ирсчагс) Стотч оу Ьи)уег (р1еаае нее Рсциге 7-2), Т01!отчет! Ьу чаг!оиа гпесЬосЬ Гог 6хас!оп оГ 1Ье КХА со сЬе тиегпЬгапе )и ргерагабоп Сот ЬуЬпйгаЬоп.
Ап а1сегпапче тпейос1 Сот сгапауег Ьу с)осчпчгагс) сар111агу 1)очч Ь 81чеп ш йе рапе1 оп АЕТЕКЬСАТ!ЧЕ РКОТОСОМ САРсИАКЧ ТКАЬС5ЕЕК ВЧ РОЧЧЬСЧЧАКО ЕсОЧЧ ас 1Ье епс! оусЬЬ ргососо1. МАс Есс1А15 т !МРОКТАЬСТ Ргераге а!! геа8еп15 иаес) !и йь ргоСосо! ъч!1Ь ОЕРС-Сгеасес) Н,О Ср!еаье ьее йе !псогптасюп рапе! оп нОсч тО чч!Ъс тне ВАттсе сч!тн к!хтадс). САСтТ!О!хС: Рсеаее нее Аррепйх 12 сог арргорпаСе Ьапс)1108 ос тасегсасе тат!тес! те11Ь <! >.
Вссйегд апс! Ьо!НЕ1опд Рсеаее аее Аррепйх 1 1ог согпропеп15 о1 асос)с 50101!опа, Ьиссегя апсс геадепся П!1исе атос)с ео1иНопе со 1Ье арргорпа1е сопсепсгаНопя Атгпоптит асе1асе !0.7 м) ччтсИ 0.5 щ/гиl еЯ!г1!иит Ьгопт!г!е <! > ОРСсопа, р!еноте нее 5тер !3.
АСеЯу!епе Ыие гю!и!топ 0.02% !Мч) тегЬу!епе Ыие !5!8та, 8990 риге) т 0.3 м тйшгп асесасе !РН 5.5). 5оа)г!пд ьо!исгоп Еог сЬагдетС тетЪгапея ые 0.0! Н НаОН <! > сотЬ!петС тч!сЪ 3 м ХаСЬ сот ипсЬагдетС тетЬгапеь, ые 0.05 М ЬтаОН. 0.2х 55С чч!Я 1% Стчуч) 505 20х 55С Тгапатег Ьийег Еог а!!та!!ие станстед со сЬагдетС гпептЪгапеа ые 0.0! .*~ ХаОН абсЪ 3 м ЬтеС1; сот пеии е! сгапьсет то ипсЬагдетС тетЬганеь, ые 20х 55С. 7ЗВ СЬарсег 7: Ехсгассгоп, Ригфсас(оп, апс(Апа!уз(з оГт1ЕХАГгот Еи(сатуосгс Се!)з Р1асе а р!есе оГ ЕЬ!с)с Ыосс!пц рарег оп а зЬеес оГ Р!ех!ц!аз ог а ц!ааз р1асе со Еоггп а зиррогс йас ь!опцег апс1 чч)с!ег йап йе ЕНпипес1 це1.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
