Sambrook, Russell - Molecular cloning. Laboratory manual - v.1 (522940), страница 168
Текст из файла (страница 168)
Ма1се сиге йас йе епс)з оГ ЕЬе Ыоссшц рарег с!саре очег ЕЬе ес!цез оГ ЕЬе р1асе. Р1асе ЕЬе зиррогс !пяс)е а 1агце Ьа(с!пц сыг. Хеорсепе ыоррегз сап Ъе изесЕ со е1ечаге сЪе зирросс р1аге аЪоче йе ЪиЕЕег гезесчои. РП1 йе еПзЬ зч(ГЬ йе арргорпаге ГгапзГег Ьийег (0.01 Х ХаОНЕЗ М ХаС1 Гог рояпче!у сЬагцес) пгешЬгапез, апс! 20х 55С Гог ипсЬагцес! гпешЬгапез) ип61 ЕЬе!ече1 оГ йе Пс)шс! геасЬез а1гпоя со ЕЬе сор оГ ЕЬе зиррогс.
ЪЪеп ЕЬе Ыосппц рарег оп йе сор оГ ЕЬе зиррогг Ы ЕЬогоицЫу счег, япоогЬ оис аП а!г ЬиЬЫез зч(ЕЬ а ц1аза гос1 ог ргрепе. АуааПпе сгапзЕег ЪиЕЕег (0.01 х ХаОН, 3 зг ХаС1) Ь изес1 со сгапзЕес ПХА со роыс!че1у сЬагцес1 пу!оп гпегпЪгапез. Хеигса1 ссапзЕег ЪиЕЕег (20х сце) Ь мед го ггапзЕег ПХА го ипсЬагцес! пу!оп шешЪгапез. Ргерага6оп оГ1пе МеспЬгапе Гог ТгапцГег Озе а ГгезЬ зса! Ре1 ог а рарег сигсег со сис а ргесе оГ ЕЬе арргорпасе пу!оп пгешЬгапе -1 гпгп 1агцег ЕЬап ЕЬе це! !п ЬосЬ с1ипепяопз. 1Ле арргорпасе ц1очез апсЕ Ыипс-епаесс Еогсерз (е.ц., Мсцсроге Еогсерз) го ЬапсПе ЕЬе гпегпЪгапе.
А пу1оп гпегоЪгапе ЕЪаг Ьаз Ъееп соисЬед Ъу цгеазу Ьапс!з зч10 пос зчес! Р1оас ЕЬе пу1оп шепгЬгапе оп ЕЬе зигГасе оГ а еПзЬ оГ с!е!оп!хес( Н,О ипП1 !с иге!а сопгр1есе1у Ггогп Ьепеай, апс1 ЕЬеп шипегзе йе шешЪгапе гп 10х 55С Гог аг 1еазс 5 пиписез. 1Езе а с1еап зса1ре1 Ыас!е со сие а согпег Ггош йе шепгЬгапе со пгассЬ йе согпег сис Ггопз йе це1. ТЪе гаге аг зчЬЕсЬ сПЕЕегепс ЪассЬез оЕ пу!оп шегоЪгапез зчес сап чагу. !Е ЕЪе гпешЪгапе сз пог зас- исасезЕ айег Поаипц Еог зечега! шгписез оп зчасес, П зЬои!с! Ъе сер1асес1 зч!ЕЬ а пезч шепгЪсапе; сЬе сгапзЕег оЕ ПХА го ап ипечеп1у зчеиесЕ гоегпЪгапе зз ипсе11аЫе. СагеуиПу р1асе ЕЬе це! оп ЕЬе ягррогс !п ап !пчегсес( рояПоп зо йас гс !з сепгегес) оп йе исес ЫоЕ Ппц рарег. Ма!се сиге йас ЕЬеге аге по азг ЪиЪЫез Ъегзчееп йе ЕЫс1с Ыосгшц рарег авс! ЕЪе це1.
5иггоипд, Ьис с)о пог сочег, ЕЬе це! сч(ЕЬ 5агап Ъгар ог Рага61гп. ТЪП Ъагпег ргечепь Пои!с! Егогп Позч!пц сцгесс!у Егого ЕЬе гезегчосг со рарес гозче!з р!асес! оп ЕЪе гор оЕ ЕЬе це1.!Е ЕЬезе созче1з аге пог ргес1зе!у ыас1сес1, йеу сепг! го й оор очес йе есЕце оЕ ЕЪе це1 апи пзау соисЬ ЕЬе зирросс. ТЬ|з суре оЕ зЬосс-с!гси!Е1пц 'ь а гоа)ос сеазоп Еос !пеццс!евг сгапз(ег оЕ КХА Есош ЕЪе це! со ЕЬе соесаЪгапе. Ч~ес ЕЬе сор оГ ЕЬе це1 зч!ЕЬ йе арргорпасе сгапзГег Ьи(Гег (р1еазе зее 5сер 4). Р1асе йе ъчес пу1оп шегпЬгапе оп гор оГ гЬе це! зо ЕЬас ЕЬе сш согпегз аге аПцпей Опе ес(це оГ ЕЬе шеш- Ьгапе зЬои1с! ехсепс()ия Ьеуопс1 ЕЬе ес1це оГ ЕЬе Ппе оГ з!осз ас ЕЬе сор оГ йе це1, а 1МРОКТАХТ Оо пос точе ЕЬе гпегпЪгапе опсе П Ьаз Ъееп аррцес1 Ео СЬе зигЕасе оЕ йе це!.
Ма1се сиге ЕЛас !Песе аге по а1г ЪиЪЫез Ъеичееп СЬе шегпЬсапе апг! йе це1. ЪЧес гзчо р!есез оГ й|с1с Ыосппц рарег (сис го ехасс1у ЕЬе загпе яке аз ЕЬе це1) !п ЕЬе аррго- рпасе сгапзГег Ьийег апс! р!асе ЕЬегп оп Еор оГ ЕЬе ъчег пу1оп гпешЬгапе, 5шоогЬ оис апу агг ЬиЬЫез зч!ЕЬ а ц1азз гой 10. Си! ог Го!а а яас1с оГ рарег созче1з (5 — 8 сш ЫПЬ) )ия япаПег ЕЬап ЕЬе ЫосПпц рарегз. Р!асс ЕЬе созче1з оп ЕЬе Ыошпц рарегз. Рис а ц1азз р1асе оп сор оГ ЕЬе зсас1с апд ъче!ПЬ гг с)озчп чч!ЕЬ а 400-ц чче!ПЬЕ (р1еазе зее Р(циге 7-2).
АПоъч ирсчагс! ЕгапзГег оГ В.ХА со оссиг Гог по пюге ЕЬап 4 Ьоигз гп пеисга1 сгапзГег ЬиГГег апс) -1 Ьоиг гп аПсаПпе сгапауег ЬиГГег. 12. АццегпЫу оГ 1пе ТгапцГег БуцГегп апсГ ТгапьГег оГ Йе К)ЧА (Р!еаце Бее Г!доге 7-2) Рготго! 7с ТгаияЕег аиг( Рсхабоп оу Етепапсгегс К)с(А го МетЬгапея 7.39 14. Кеточе йе птетпЬгапе 1гот йе бх 55С апс( а!1осч ехсеяя Яи(с( со с(гаш асчау. 1ау ТЬе тпетЬгапе, КЫА яс1е ирсчагй оп а с(гу яЬеес оЕ Ыоспп8 рарег Еог а Еесч пиписея.
Яасптпе ОЕ йе УЧА апд Г!хаЕ1оп ОЕ $!те К1ЧА Ео Е!те МептЬгапе ТЬе огс!ег оЕ ясеря диг(п8 яса(п(п8 апс( 6хапоп с(ерепс(я оп ТЬе суре оЕ сгапяЕег, сЬе суре оЕ тетпЬгапе, апс( сЬе тесЬос1 оЕ бхапоп. Весаияе аїсабпе сгапяЕег геяи!ся 1п соча1епс апасЬтепс оЕ КЫА со рояпче1у сЬаг8есс пу!оп тпетпЬгапея, сЬеге !я по пеес1 со 6х йе КЫА со сЬе гпетпЬгапе Ьесоге яса(п(п8. К)ч(А сгапяЕеггесс со ипсЬагВес) пу!оп тпетпЬгапея ш пеисга1 сгапяЕег ЬиЕЕег яЬои!ЕЕ Ье яса(пес( апс) сЬеп Етхес( со йе гпетЬгапе Ьу ЬаРПп8 ипс(ег часишп ог Ьеа6п8 сп а т(сготчаче очеп. 1Е сЬе КЫА ся со Ье сгояя-1ш1сес( со йе тетЬгапе Ьу (2'чг 1ггасбасюп, ТЬеп сЬе ята(п(п8 яСер яЬои!6 Ео!1осч 6ха6оп (р)еаяе яее ТаЫе 7-4). КЫА сЬас Ьая Ьееп сгапяЕеггес( со а пу1оп тетЬгапе сап Ье чсяиа1схес1 Ьу яса(п(п8 сч(ТЬ тейу1епе Ыие (Негпп апс( 5сЬт(с)с 1988).
ТЫя ятр1е тейос1 а!!осчя топ(сот(п8 оЕ йе шсе8псу оЕ йе КЫА, еясппасюп оЕ йе ербс(епсу оЕ ТЬе сгапяЕег ргосеяя, апс( 1осасюп оЕ ТЬе рояЬопя оЕ ТЬе пта!ог К)ч(Ая (ияиа11у ТКЫАя) оп ЕЬе тпетЬгапе. 1Е ТЬе КЫА гя со Ье 6хес1 Ьу БАЛТ сп айасюп, ргосеес! 6гяс со 5сер 16. 15. 5са(п йе тетЬгапе. а.
ТгапяЕег йе ссатпр тетЬгапе со а 81аяя сгау сопсашш8 тейу!епе Ыие яо!ис(оп. 5саш йе тептЬгапе Еог !ияс епоиПЬ сипе со ч(яиа112е ТЬе ГКЫАя (-3 — 5 пипшея). Ь. РЬосо8гарЬ йе яса(пес( тетпЬгапе ипс(ег ч(я(Ые 68ЬТ счиЬ а уе11оъч 61сег. с. Айег РЬосо8гарЬу, с)еясаш ТЬе тпетпЬгапе Ьу счаяЬ(п8 ш 0.2х 55С апс1 ! 9о (игу) Я>5 Еог 15 пиписея ас гоот сегпрегасиге. Бх йе КЪтА со сЬе шешЬгапе !Е арргорпасе (р!еаяе яее ТаЫе 7-4), аис1 ргосеес1 йгесс1у со ЬуЬпйгабои (Ргосоео1 8). Аиу гиегиЬгапея пос ияесс спииейасе!у си ЬуЪпйаасюп геасс!оия яЬои1сс Ье сЬогоиПЫу с1гу, итаррес( 1оояе!у си а!шисиши Еос1 ог Ыоссшх рарег, аист ясогест ас гоош сешрегасиге, рте(егаЫу иис(ег часиши. 16. Р(х сЬе КЫА со йе ипсЬагВес( пу!оп тетЬгапе. ТАВЕЕ 7-4 5еииепсе ос 5Са1п1п8 КЬСА апс( Р!Хсп8 Со СЬе МетЬгапе ТУРЕ ОГ МЕАсВВАГсЕ Метноп ОГ ЕсхАтсояс ОВОЕЙ ОГ 5ТЕР5 Рояихе1у сЬаг8ес( пу1оп а1Ыше сгаия(ег 1.
5саш сч!ЕЬ спейу!еие Ыие. 2. Ргосеес( со ргеЬуЬпйсасюи. 1. Р(х йе КЪСА Ьу СЛ (ггайаиоп. 2. Яаси гчссЬ сиейу!еие Ыие. 3. Ргосеег( со ргеЬубпйкас(ои. СтисЬагхес( иу!ои ог роябче!у сЬагхес( оу1ои (иоиаПсаПие сгаия(ег) !Л' сггайабоп (р!еаяе яее 5сер 16 Еог ПесаПя) СтисЬаг8ес( иу1ои ог роябче!у сЬаг8ес( иу!оп (иоиаПса1сие сгаияуег) Ъах!о8 ш часиши очеи ог ш!егочгаче очеп (р!еаяе яее 5гер 16 Еог с(егаПя) 1. 5саш сч!й шесЬу1еие Ыие. 2.
Ва1се сЬе шешЬгаие. 3. Ргосеес( Со ршЬуЬпйкабои. 13. (3(ягпапс!е ТЬе сар61агу сгапяЕег яуясет. Маг)с йе роясюпя оЕ сЬе я!оп оп сЬе тептЬгапе сч(ТЬ а ЬаПро(пс реп ТЬгоицЬ ТЬе Ве1. ТгапяЕег тЬе тетЬгапе со а 81аяя сгау сои!а(п(п8 -300 т! оЕ бх 55С ас 23 С. Р1асе йе сгау оп а р1асЕоггп ВЬаЬег апс( а8(тасе ТЬе тетпЬгапе чету я!осч!у Еог 5 пиписея. То аяея сЬе еП!с!еосу оу сгаиясег оу КЪтА, пияе сЬе це! ЬпеПу си яечега1 еЬаи8ея оЕ Н,О аис( сЬеп яСаш и Еог 45 ппиШея сп а яоЬиюп о( ейга!ши Ъгогихае (05 тсхтш! ш 0.1 я апииои1ши асеСаге). Ехапиие аис( РЬосо8гарЬ йе ясашес( Пе! иис(ег СЛ' П!шишабоп. 7 40 СЬаргег 7: Ехггасг1оп, Риг17гсаг1оп, апй Апа!узЕз оЕ тЯЕзЕА Яот ЕиЕсагуог1с Се!!з ТО Р!Х Вт ВАК!ЫС ° А1!ов йе зпегпЬгапе го йгу гп агг апй 1Ьеп ЪаЬе Еог 2 Ьоигз Ье1вееп Еи о ргесез оЕ Ыос11п8 рарег ипйег часишп а1 80'С ш а часишп очеп.
ог ° Р1асе ЕЬе йашр гпешЪгапе оп а йгу ргесе оЕ Ыог!1п8 рарег апй Ьеа1 Еог 2-3 пппи1ез ас Еиц ровег гп а гшсговаче очеп (750 — 900 ЧЕЬ Ргосеей сПгесс!у го ЬуЪпй!айаг!оп ЕРгогосо! З!. Апу шегпЬгапез пег изей !шшей!аге1у !и ЬуЬгЫыагюп геасгюпз зЬои1й Ье гЬогоиПЫу йгу, вгаррей 1оозе1у !и а1шшпшп Еог! ог ЫогПп8 рарег, апй погей аг гоопг гешрегагиге, ргеЕегаЫу ипйег часииш.
ТО СРО55-ПЫК Ву Е!Ч !ВКАО1АТ!ОЫ а. Р!асе 1Ье йашр, ипз1агпей шегпЪгапе оп а р1есе оЕ йгу Ыо111пц рарег апй Еггай1аге ас 254 шп Еог 1 пппиге 45 зесопйз а1 15!Есш~. ТЬЬ пер Ь Ьеы ассогпр1ЬЬей гп а сопипегсга! йегйсе ассогй!п8 го ЕЬе шапиЕасшгег'и шзггисПопз. Ь. АЕЕег Еггай1а11оп, з1аш йе пзешЬгапе илй гпе1Ьу1епе Ыие аз йезспЪей ш 51ер 15.
Ргосеей сПгесг!у го ЬуЬг!й!газ!оп 1Ргогосо1 З!. Апу шешЪгапез пес ыей ишпегПаге1у ш ЬуЬг!й!лагюп геасгюпз зЬои!й Ъе ЕЬогои8Ыу йгу, итаррес1 1оозе1у 1п а!ипипшп Еог! ог ЫогПп8 рарег, апй згогей аг гоош гегпрегасиге, ргеуегаЫу ипйег часишп. ргевез Ьипег в!са в>са сечег аипап Г !гааз 9е! ргеве! пагосеаи!озе — з ог пу!оп гпешЬгапе ргевез ИГЬагшап ЗММ рарег йгу ЧЧЬа!шап ЗММ рарег рарег говеш — — ~ Ггау — з Р!ОБКЕ 7-3 Оовпвагй Са !!!аг ТгапзЕег !и 1Ыз аггап8егпеп1, сарП!агу сгапзЕег оЕ пис!е!с ас!йз Егот ап а8агозе Ве! Ео зоЬВ зиррогг ь асЫеней Ьу йгав!п8 ЕЬе 1гапзЕег ЬиЕЕег Егогп 1Ье гезегчо!г йовпвагй ЕЬгоиВЬ Пзе Пе! !пго а агасси оЕ рарег сове!з. ТЬе пис!е!с аой !з е!изей Егот ЕЬе Ве! Ьу а гпон!п8 з1геагп оЕ ЬиЕЕег апй !з йероз!1ей оп!о а пПгосеПи!озе 81- гег ог пу!оп тетЬгапе.
Ргогосо! 7: 7гапь~ег апг( р(хаг(оп оЕг Т2епагигег( К)ъ(А го МетБтапез 7А1 Ку ТКА)Ъ)5ГЕК ВУ $3О)Е)ЕЕЪЕ)А(АКТ) ГЕО)Е)Е ап аПегпайне 1о ирънагг)(гапх(ег. ТЬ(ь арргоасЬ, аг)ар(ег$ Пою аь(ег Егапа(ег Яюеь апг( (псгеазее) ей)с(епсу о( (гапаЕег Еог )опйег Ы |Ье а(ерш (пно)чеъ) Еп (йе 1гапн(ег о( КЬЕА Егогп ап а8аюье Яе! г(оънпънагс) Яоъч о( Ьийег (р(еаье нее Г(8иге 7-3). рпа|е Ьапг)!|ай о( пъагег(а)ь пъагхег$ ил|6 <! >. 1. Ргераге (Ье Яе! Еог Егапа(ег о( К|хА, аъ г|еьсг(Ьед еп 51ерь 1 апс(2 о(|йе гпаЕп рго|осо! (Рго|осо! 7). 2. Махе ап — 3-сгп а(ас)ь о( $$(хроьаЫе рарег Еоъне)ь.
Р|асе Еоиг р(ест ог' Ыо(йп8 рарег оп |ор о( (Ье в(ас)ь. ТЬе ь(ас)ь аЬои)$$ ехсеег(|Ье а|ге о( |Ье Ег(гпгпег)8е! Ьу 1-2 сгп |п еасЬ г)(гпегь)оп. 3. О хе а ЕгеьЬ ьса)ре! ог а рарег си($ег 1о си| а р|есе о( Фе арргорпа(е пу|оп гпепъЬгапе -1 пып )агйег(Ьап йе Яе! еп Ьо(Ь ЕЕ(гпепь)опт. Охе арргорпаге 5(очеь апа Ь)ип(-епг|еъ$ Еогсерь (е8., М($$(роге Еогсерь) Ео Ьапг|(е ЕЬе гпепъЬгапе. А пу|оп гпегпЬгапе ЕЬа( Ьаъ Ьееп Еои<Ьед Ьу Ягеаъу Ьапг|ь ъч|И по( ъче(! 4.
Г|оа( |Ье пу|оп гпегпЬгапе оп йе еиг(асе ог' а с(|аЬ о( $(е(оп|нее) Н О ипЫ $1 ъне(ь сопър|е(е)у ггогп Ьепеа(Ь, апг)|Ьеп 'нтппегье|Ье пъегпЬгапе |п Егапх(ег Ьийег Еог а( )еаза( 5 гп(пи(еь. Оье а с|еап ьса)ре! Ео си| а согпег Я огп (Ье пъепЕЬгапе |о пъа(сЬ (Ье согпег си| Егогп 1Ье це!. ТЬе га1е а1 ъчЬ(сЬ гййегеп1 Ьа(сйеь о| пу$оп гпегпЬгапеь ъче( сап чагу. й Яъе гпегпЬгапе Ь по1 ъагигагег$ айег Яоа1- $08 Еог ьенега( гп(поги оп Н,О, $1 йои(г$ Ье гер(асег$ ъч(ЕЬ а пеъч пъегпЬгапе, аъ Ейе Егапъ(ег о( йЧА го ап ипенеп$у ъченеъ$ гпепъЬгапе (н ипге((аЬ(е.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
