Sambrook, Russell - Molecular cloning. Laboratory manual - v.1 (522940), страница 169
Текст из файла (страница 169)
АЕ(ъа))пе агапа(ег Ьийег (0.0$ $$ Ь)аОН <! >, 3 м Г(аС() 'ь иъег)1о 1гапь|ег ЯЕ(А (о роь|йче|у сЬагйеъ$ пу|оп гпегпЬгапеь. Ь(еи1га((гапъ(ег Ьийег (10х 55О Ь инсч|го Егапъ|ег ПЕЕА Ео ипсЬагйед пу|оп пъегпЬгапеь. 5. Си| йъиг р(есор оЕ Ыо| Яп8 рарег Ео |Ье ьаюе а)ле аь 1Ье Яе! апс( ъче1 |Ьепз |ЬогоицЫу ъч((Ь Егапн(ег Ьийег.
Си( Ьно )аг8ег рЕ есор оЕ Ыо| Я 08 рарег е Ьа| ъч! П Ье инее(1о сап пес| |Ье (ор о( (Ье а(ас(ь |о | Ье Ьийег гевегноЕгь, аъ йоъчп 'в Г)80 ге 7-3. АааепЕЬ|у оЕ1Ье Тгапн(ег 5ун1егп апг) ТгапнЕег оЕ 1Ье К)ъ(А (Р)еаае 5ее Г)Виге 7-3) 6. чуогй)08 $)и(с)ъ|у, аййп опе оЕ |Ье аЬее(ь о( ъне1 Ыо(Яп8 рарег оп (ор оЕ |Ье з(ас)ь. ТЬеп р|асе йе пу|оп юетЬгапе ехасйу оп 1ор о( 1Ье ъне( Ыо( Пп8 рарегз. Р|асе 1Ье Ег)юнее) айагоае Ве! оп (ор о( йе тегпЬгапе, хо|Ьа( (Ье си| согпегь аге ай8пее). 5иггоипг$, Ьи( г)о по| сонег, (Ье Яе! илй 5агап ччгар ог Рагай)гп. 4)ъ (МРОЕ(ТАЬЕТ Оо по1 гпоче 1Ье Яе! опсе $1 Ьач Ьееп р|асег$ оп |ор о( ЕЬе гпегпЬгапе. Майе яиге Ейа| 1Ьеге аге по а|г ЬиЬЫеь Ьеьъееп ЕЬе гпевЬгапе апг(ЕЬе Яе|.
7. М(е(|Ье 1ор еиг|асе о( $Ье Яе! ън|ЕЬ |гапа(ег ЬиЯег апс) Егпгпегйа|е|у сонег й ън(ЕЬ йе|Ьгее геюа)п)пц р|есеь о( чче1 Ыо| 608 рарег. Соппес| (Ье ь(ас)ъ (о |Ье гевегно)гх ън((Ь 1Ье Ьно (агйег р(ест о( ъче1 Ыо| Ппй рарег. 8. Р|асе а аЬее1 о( Р)ех(8)аь ог а |Ып 8(аън Р|а(е оп 1ор о(|Ье аеас(ь |о ргечеп| ечарогайоп, 9. АПов е)оънпнчаге)(гапн(ег о( КЬ(А |о ассе н Еог по гпоге |Кап 4 Ьоига |п пеи(га! Егапх(ег ЬиЯег апг( -1 Ьоиг |п а))ъа()пе (гапх(ег Ьийег. 10. Сопйпие ъч1Ь 51еря 13 1ЬгоиЯЬ 16 о( 1Ье гпа!п рго1осо! (Рго1осо! 7).
Рго1осо! 8 Могйегп НуЬпйкабоп (х)А 5ЛМР(85 тНЛт НАС Е ВЕЕ)4 ТКЛН5ГЕККЕР ЛНР НХЕР то Л МЕМВКЛНЕ (р!еаае атее Ргогосо1 7 ог 1Ье рапе1 оп АЕТЕКНАТ!тсЕ РКОТОСОЕ: САР1ЕЕАКТ ТКАЫ5ГЕК ВТ РОЪЧЧ)к!АКР ГЕОК !и Ргогосо1 7) шау Ье ЬуЬг16!хек гу1!Ь а арес(Е)с ргоЬе 1о 1осате йе К)х)А прес(еа оЕ шсегеас. Апу опе оЕ а 1агке пшпЬег оЕ шейос!а сап Ъе иае6 1о!аЬе! апс! с!егесг ргоЬея аг 1Ье йасге6оп оЕ 1Ье (пче86касог; р1еаье атее СЬаргега 9 апс) 10 1ог шегЬос!а !о ргераге ргоЬея АЕ(ег ггеаг(пк 1Ье шешЬгапе епй Ыос!с(пВ авепо йаг аирргеаа попарес(6с аЬаогргюп оЕ йе ргоЬе, йе гпешЬгапе !8 ЕпсиЬагес! ипс1ег сопйгюпь йаг Еауог ЬуЬпйха6оп оЕ йе 1аЪе!ес1 ргоЬе Го ГЬе шипоЬ!1(хед гагкес К)с)А. ТЬе шегпЬгапе 18 1Ьеп иааЬед ехгепяче1у Со гешоуе ас1чеп660081у Ъоипс1 ргоЪе апс1 Впа11у шап(ри1агес! го у(е16 ап ипаВе оЕ йе 6(агг!Ъиг!оп оЕ гЬе щЬ(1у Ьоипс1 ргоЬе оп гЬе шешЬгапе.
АЕ(ег апа1уяь оЕ 1Ье ЬуЪпйгабоп геки!Вв йе ргоЬе шау Ье ьгг!Рред Егош (Ье шешЬгапе, апс! 1Ье гпегпЬгапе иаес! ацаш ш апойег ЬуЬпйга6оп ехрегппепг (р1еаье аее гЬе рапе1 оп 5ТК1ррвчС )х(ОКТНЕК(9 ВЕОТ5 ОГ КА01ОАСТ)тс)ТУ аг ГЬе епс1 оЕ(Ь!а ргогосо1). ТаЫе 7-5 с1еасг!Ъеь Ьои Го с)еа1 и !1Ь Гас!оса 1Ьа! саиье Ъас)скгоипс) шгегуегепсе ш погйегп ЬуЬпйгагюп. МАТЕ В! А1.Б ,Вс 1МРОКТА)ЧТ Ргераге аП геацепо иаес( 10 1Ыа ргогосо! су((Ь РЕРС-1геагес( Н О (р!еаье аее ГЬе !псоггпавоп рапе! оп НОта( ТО та!(Ы ТНЕ ВАТТЕЕ ЪЧ!ТН КНА58), САНТ!О)х: Р(еаае аее Аррепс))х 12 Еог арргорпа1е Ьапс(11пВ оЕ ша1ег(а!ь шаг1сес! ис(ЕЬ <1>. Войегв апд Яо!116оп5 Р1еаае аее Аррепс)(х 1 Еог сошропеп18 оЕ а!оскс ао!и6опь, ЬиЕЕега, апд геаВеп1я О!101е ь1оск 80106008 1о йе арргорпа(е сопсеп1га6опя РгеЬуЬпс((га((оп ао106оп 0.5 м сосвшп рЬоьрЬаге (рн 7.2) 798 (Мч) 505 ! тм ЕРТЛ (рН 7.0) Васхвгоопс( ь ойсп а ргоЫего ивеп ояпв пу1оп гпетЬгапся ОЕ йе 1агве пшпЬег оЕ ЬуЬпйгакоп Ьо((сгс сЬас Ьазс Ьссп с)езспЬсс( ш све 16егаыге, йоге сопгаспшв 1686 сопсепсгасюж оЕ 5Р5 аге йе пюя скосите ас гарргсьяпв Ьас)свгоопс) и Ы1с ргсгегнпк ЫВЬ зепи(г!х!су, ТЬеае Ьо((сп агс шойуссас!опт (с.к., р1еаас сес Ксч)1 с! а1, 1997; МаЬгпоой аос( 1(п 1989) оЕ све ЬуЬпйааиоп ЬнЕЕег Есгзс с(езспЬсс( Ъу СЬогсЬ апс1 Ос!веп (1984).
55С (0,5х, 7х, апс) 2х) и!ГЬ О. 79' (ис)г) 505 55С (О. 7х апс( 0.5х) иой О. 7;4 (и)г) 505 Орсюпа!, р!саге сес 5!ар 4. 7.42 Ргогосо( 8: ХоггЬегп НуЬги(!гаг(оп 7АЗ Ь(пс1е!с Асн15 апд О!фопос1еоЕ!де5 РгоЬе О(ЧА ог й)ЧА Г>2 х 70а срт)РВ) <1> Ргераге апс( гайа!аЪе! сЬе ргаЬеа ш Ысга со ЫПЬ аресс6с ас6чПу 96ГЬ 'гр, аа с(езсг!Ъес) сп СЬарсег 9.
Н!ПЬ-арес!Гсс-асс!ч!су (>2 х 1Оа ерш)98) асгапйарессбс ргоЬеа (еПЬег ЕгХА ог КХА) сап с(есесс шКХАа сЬас аге ргеаепс ас 1осч со псейшп аЬипдапсе. ТЬе Ь(ПЬеас аепяс!чКу сп пагсЬегп Ыасс!п8 Ь оЬса!пей Егапс а!в81е-асгапдес) ргоЪеа — еЬЬег ГЗХА аг КХА — га6!а!аЬе!ес) сп исго са ЫПЬ аресс6с аспйсу сч!ЕЬ 'гр (>2 х 10" арап)98). ЕсоиЫе-асгапс(е6 ЕгХА ргаЪеа аге ьчо са сЬгее с!шеа 1еь аепяпче сЬап а!п81е-асгапс(е6 ргаЬея ВАГА, ГттоЬйгесГ оп тетЬгапе Ргерагед аа деасг!Ьед !п Ргососо! 7 ог сЬе рапе! ап АЕТЕКХАТ!ЧЕ РКОТОСОЫ САР1ПАКУ ТКАХ5- ГЕК ВЧ ООЪЧХЧЧАКО ГЕОЧЧ сп Ргососо1 7. прес!а! Ецп1рптеп$ 81огпп8 рарег (ГЧЬастап ЗММ ог едисча1епп ВогВпд иасег Ьай Ч(гасег Ьай ргехе1 Го 68 С Ьасег Ьай ргехес Со йе ЬуЬг(с((гас(оп Еетрегагиге Р!еаае аее Гпер 3. сч1ЕТНО0 1.
1псиЬасе сЬе гпепсЬгапе Гог 2 Ьоига ас 68'С ш 10 — 20 гп1 оГ ргеЬуЬгЫ!гасюп ао)ипоп. Апу пшпЬег аЕауасеша Гаг ЬуЬпйгапап оЕ погсЬегп Ыоь Ьаче Ъееп с)еасг!Ьес) гап8!п8 Егагп е(6- с!епс Ьис ехресьсче сопнпегс!а! гаса!!вд счЬее1а са а чапесу а( есапописа1 Ьошешаде Печ!сеа !вс1и6!п8 р!агбс )ипсЬ Ьохеа, аапйчкЬеа оЕ 6!сег рарег (!опеа ап6 !овес !992), апс( Ьеас-аеа(ес( р!агбс Ъа8с (5еага 5еа)-А-Меа) Ьа8а аге а60 йе Ьеас). 39!ЕЬ ргас6се, аП оЕ сЬеае Пас)Песа сап Ье шабе са счог)с геааопаЫу счеП, апд сЬе сЬоссе ашоп8 сЬеш ь ПепегаПу а пгапег оЕ регаопа) ргеЕ- егепсе.
Сопппегс!а! гога!!в8 ыЬее1а, Ьачгечег, Ьаче опе с!еаг абчавса5е: ТЬеу аге 1ея ргопе са 1еа1с счЬеп иа!п8 ЬуЬгЫиасюп Ьибега иасЬ Ь!8Ь сопсепсгас!апа аГ 5()5. Весагье р!ааск Ъа8а апд Ьохеа сапсаспсп8 аисЬ Ьибега аге чегу ййки1с со аеа1, сЬе гиЕ айса)ь апд сапсапипапоп сч!ГЬ гайоасспбсу !а !псгеааей 2. 1Г иа!п8 а с)оиЫе-асгапс(ес) ргоЬе, депасиге сЬе агр-1аЪе1ес) с)оиЫе-асгапс)ес) Г)ЫА Ьу Ьеапп8 Гог 5 гп!писеа ас 100"С. СЬс!1 йе ргоЪе гари)!у сп ке ччасег. А1сегвас1че!у, с)епасиге йе ргоЬе Ьу аййпц 0.1 ча!шпе оГ 3 х ХаОН. Айег 5 пиписеа ас гоош сешрегасиге, сгапаЕег сЬе ргоЬе со ке счасег ав6 асЫ 0.05 чо1шпе оЕ 1 М Тгь-С1 (РН 7.2) авс( 0.1 ча1- шпе аЕ 3 Х НС!. 5соге сЬе ргоЪе ш ссе счасег ип61 Ь Ь пеес(ес(. 56вц1е-асгапдед ргаЬеа пеес) вас Ъе девашгей 3. Асы сЬе с)епасигес! ог яп8!е-асгапс)ес) гас)ю1аЬе!ес) ргоЪе еПгесс1у со сЬе ргеЬуЬНеПгаПоп ао!ис!оп.
Сопйпие спсиЬапоп Гог 12 — 16 Ьоигз ас йе арргорпасе сегпрегасиге. То десесс )асч-аЬипбапсе шКХАс, гье ас!еаас О. ! иа оГ ргоЬе чгЬоае арессбс асс!чиу ехсееба 2 х 10" сргп)и8. Еосч-асг!п8епсу ЬуЪпйгасюп, сп счЫсЬ сЬе ргаЬе Ь пас Ьапсо!о8аиа са сЬе !агнес Пепе, Ь Ьеас сагг!е6 аш ас! осчег сепсрегасигеа (37-12'С) сп а ЬуЪпйгасюп Ъийег спаса!и!в8 50аа Пе!оп!гес) ЕоппапсЫе, 0.25 М аайшп РЬоарЬасе (РН 7.2), 0.25 М ХаС1, апс( 796 Ю5. Гог айаг!!апа! с)есаПа оп сопйсюпа Еог ЬуЪгЫиасюп а( ргаЪеа са пис!ек аскЬ !шшаЫПгес( ап аа1Ы гиррагся р1еаае аее СЬарсег 6, Ргосасо1 1О. 4.
АГ(ег ЬуЬг!6!гас!оп, гегпоче йе псетЬгапе Ггот ГЬе р1аас!с Ьа8 апс) сгапаГег Ь аа срлс1с!у аа роаяЫе со а р1аас!с Ьох сопсашгп8 100 — 200 гп! оГ 1х 55С, 0.!ага Яб ас гоот сетрегасиге. Р1асе ГЬе с1оаес) Ьох оп а р!а(Гоггп 5Ьа!сег апс( аи!Гасе ГЬе Пи!с! Вепс1у Гог 10 ппписея Ь 1МРОКТАХТ Оо пос аПоъч йе гпегпЬгапе со с)гу оис ас апу аса8е с)иг!п8 СЬе счахЫп8 ргосес)иге.
744 СЬаргег 7г Ехггасйоп, Риггугсаг1оп, апг1Апа)уги ог'тЕМА)гот ЕиЕсагуоггс Се1Ь 1исгеаае гЬе соисеиггабои оЕ Ю5 1и гЬе гнааЬ1и8 ЬиЕЕег со 1% 1Е а1и81е-аггаисЕес! ргоЬеа аге ыес1. Ро11оМи8 1онг-агг1и8еису ЬуЬпсВгабои ш Еогшаш!с1е-соига1иш8 ЬиЕЕега, г!иае ЕЬе игегибгаие 1и 2х 55С ас 23 С аиг1 ГЬеи аиссеаа!не!у чааЬ ги 2х 55С, 0 5х 55С юЕЕЬ 0.1% Ю5, аиг! 0 1х 55С ге11Ь 0 1% 5135 Еог 15 ииишеа еасЬ аг 23'С. А йиа1 ъчааЬ соигагиш8 0 1х 55С аис! 1% Ю5 ь саге!ей оиг аг 50'С 5. Тгапауег гЬе пгешЪгапе го апойег р1ааг)с Ьох сои!а!и)п8 100-200 ш! оЕ 0.5х 55С, 0.1% Я15, ргегнагшес) !о 68 С. Аруаге йе Е)и!с) 8еп11у Еог 10 ш)пи!ее а! 68 С. 6.
Кереас гЬе ънааЫп8 гп 5гер 5 гичсе пюге Еог а го!а1 оЕ 1Ьгее ъчааЬеа аг 68 С. 7. 1)гу гЬе шешЬгапе оп Ыогг)п8 рарег апс) еьгаЫ!аЬ ап аи!огайо8гарЬ Ьу ехрояп8 1Ье шегпЬгапе Еог 24-48 Ьоига го Х-гау 61ш (Кос)а)с ХАК-5 ог есрпна1еп!) аг — 70'С сн!!Ь ап гпгепяЕуш8 асгееп (р!еаае аее Аррепйх 9). Тип851а!е-Ъааес1 шгепяууш8 асгеепа аге пюге еЕЕесггне гЬап йе 01с)ег гаге-еагй асгеепя А)гегпаг!не!у, ап !ша8е оЕ !Ье гпешЪгапе сап Ье оЪга!пес) Ьу асапп!п8 ш а рЬоарЬог!ша8ег.
ВЕ.ОТ5 гош иу)ои Ус!5-С1 !РН ои)гес) Еогги , 0.1х 55С, 0.1% Ргососо! 81 фогт)сегп Ну)ггсг)тхаг!оп 7А5 ТАВЕЕ 7-5 Вас)сегоцпт) сп 5ои$Ьегп апт$ )ъсогСЬегп НуЬТ161хас)опв апт$ Ноъч со АчоЫ И 5чм етом САРЕЕ РОтеьстсАс 5Отсттсоьс5 РгеЬуЬпйте Еог 1оп8ег регютЬ оЕ типе. Ве ч)8йапс 1п 1сеер)п8 тесиЬгапе ъчес ас ай сипев. В!отсЬу Ьас1с8гоши1 очег йе епбге тегпЬгапе. Рье оЕ 10ауа Пехиап во!Тасе ш ЬуЬпйтабоп ехрегипепо. Рарег соъче1ь Ьесоте сотр1есе!у ъчес дцгсп8 сар!Вагу сгапьЕег 1вее Ргососо! 7). Рье оЕ сЬаг8ей пу)оп тетЬгапеь апд ю!ц6опв сопса1шп8 1оъч 5Р5.
1)ве оЕ иприге (уейоъч) Еогтат)де. Рье оЕ а р!аьск сйт йас Ь реппеаЫе со гпоысиге. Рье оЕ ипргорег ЫосЬ)и8 геа5епс. Ргевепсе оЕ ЬцЬЫеь )и ргеЬуЬпй- тас!оп)ЬуЬг)йтс)оп во)ц1юпь, Еас!цге са аВйасе теитЬгапе. Ргеч апп ьо1исюпь ЬеЕоге ше. АВ)тасе йе итеспЬгапе. На!оея очег йе еп6ге тетЬгапе. !тргорег!у депасцгес1 сагпег РЬ)А. Вас1с8гошхс сопсеп- сгасед очег йе !алев солса)п)п8 пцс1есс асЫ. Рве оЕ ргоЬев сопсасп)п8 ро!у!Т) стась ш погсЬегп ЬуЬгЫ)тасюпв. 1пс1цйе ро1у1А) ас ! 08)т) сп ЬуЬгЫ1табоп яо1шюпв. Рве оЕ ВЬ)А ргоЪеь. В1оссЬу Ьас1с8гоцпс1 арреапиВ оп ьоте тетЬгапеь апд пос осЬегв.
Тоо гпапу исетЬгалеь ЬуЬг)6!гей ш йе вате чеьье!, пос епоцВЬ чо!шпе оЕ ргеЬуЬпйта6оп! ЬуЬгЫиасюп ьо1ш!оп. Рье оЕ о)6 гайо1аЪе) со ргераге ргоЬе. 1псепве Ыас)с яроь аП очег тетЪгапе. 1псотр!есе ЫосЫп8 йцгш8 ргеЬуЬпйтабоп. Ргуш8 ош оЕ гпетЬгапе Пцг)п8 ехрептеп1. Ю5 ргес!Р)татей Егот апу аЕ йе во!ос!опь цю6 !и йе ехрегипепс.
Ргераге ьо!шюпв ас гоопь сегпрегацсге, ргеъчапи со 37'С, сЬеп асЫ 5Р5; По пос аПоъч Я)5 со ргесср)саге ас апу типе. ВеЬеас!п8 а во1цсюп Егопт ъчЫсЬ Ю5 Ьаь реестр!тасей чиП вотесцпеь у)е16 а с1еап гею1с. ТЫь ро)утег ц асЫей со )пдцсе тасгоию1есц)аг сгоъчйп8 апд йцв со епЬапсе 1Ье гасе оЕ ЬуЬпйтасюп. Ехсерс сп гаге спвсапсев Кп 61ц ЬуЬгЫиа6опв ог иоп8 ьцЬсгассей ргоЬея), с$ехсгап ю1Еасе сап Ье!ей ош о! игоьс ЬуЬгЫиа6оп яо1шюпь. $)ве оПаг8е чо1шпеь о! ч аьЫп8 во!исюпв аге гет)шеей со геточе сЬЬ чЬсоив соспроцпй ъчЫсЬ К 1ей оп 1Ье исептЬгапе айег ЬуЬгЫЬабоп, старя ргоЬе апй ргойцсев Ьас1с8гоипй ЕЬе а!аг8ег пас!с оЕ сои еЬ ог геиюче ъчес соъчдь апй гер!асс ч Ей с1гу соъче!в Пцгш8 сгапйег ргосейцге. 5ъчйсЬ со цпсЬаг8ей пу1оп птеспЬгапеь. 1исгеаье йе сопсептгасюп о!5Р5 со !туя Ечпч) ас аП веера.
НуЬгЫстасюп ЬцКегь сопсаспш8 ЫВЬ сопсепсгасюпя оЕ Я)5 аге йте иювс ейессй е тп юрргеюи18 Ьас1сВгошн1 ъчЫ!е ргеьегчт8 Ь)ВЬ веп66Ы- су. ТЬеье ЬцКегь аге исоййсасюпь Ее.8., р!еаяе ьее Ма$циоцй апй ).тп 1989; Кечй е1 а!. 1997) оЕ 1Ье ЬуЬпйтабоп Ьц Пег 6пи с1евспЬес$ Ьу СЬцгсЬ апд С ПЬегС 11984). РшсЕу ЕоппаптЫе оп Роъчех ХС-8 Ьеуоге иъе (ьее Аррепйх 1). Рве а Ьеиег т)ца))су 61т.
Ро пос ые ВЕОТТО Еог Вепопцс 5ошЬегп Ыоь. 1пюеай сгу 50 Р8)пз1 Ьера- пп аь ЫосЫп8 геа8епт $ЯпВЬ апд !опеь 1984) ог ияе СЬцгсЬ ЬцКег $СЬцгсЬ апд 061Ьегс 1984) ав ЪосЬ ргеЬуЬгЫсга6оп апс$ ЬуЪпйтасюп ьо!цсюп. ВеЬой сЬе ва!июп ьреип РХА цю6 сп 1Ье ргеЬуЪгЫЬабопгЬуЬпйгасюп ьо1шюпь. Ро пос айоч 1Ье Ьеас-йепасцгей РЬ)А то геаппеа!. Ргаьйсайу спсгеаье йе юппйепсу оЕ ЬуЬийта1юп Ьу )псгеаь)п8 1Ье сопсепсгабоп оЕ ЕоипагпЫе!и сЬе ЬуЬ1$6)тас!оп ЬЫЕег, ше 1% Ю5 сп Йе ЬуЬг1йхаиоп Ьцсуег, !псгеаье Йе ъчаяЫп8 сетрегатгеь, апд йесгеаве йе юптс ьсгеп81Ь оЕ ъчаьЫп8 ЬцКегя 1е.8., 0.1х 55С). !псгеаье сЬе чо!шпе оЕ йе ЬуЪгЫ!тасюп апд ъчаь1цп8 ю!шюпь апйог йесгеаве пшпЬег оЕ тетЬгапеь )и а ЬуЬг!йтайоп Ьа8 ог соптатег.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
