Диссертация (1174348), страница 12
Текст из файла (страница 12)
16.Клиническая характеристика пациенток и результаты МРТ головногомозгаПримечание: * – Анализ внутригрупповых различи проведен по критериp<0,05χ²,773.3О енкафунк иональноактивностифаго итовиобщеантиокси антно активности лазмы с ис ользованием мо ифи ированномето ики люминол-активированно хемилюминис ен ии3.3.1О енкауровняокислительногострессасис ользованиеммо ифи ированно мето ики люминол-активированно ХЛБольшая часть современной медицинской литературы, посвященнаяизучениюпатогенезаПЭ,сосредоточенанепосредственнонапроблемеокислительного стресса [16,87,110].
В связи с этим, одной из задач нашегоисследования была оценка уровня окислительного стресса в плазме кровибеременных с ПЭ модифицированным методом кинетической ХЛ. В первуюочередь, в нашей работе особое внимание было уделено оценке общейантиоксидантной активности плазмы у пациенток с тяжелой ПЭ.Хемилюминесцентный анализ применяется для обнаружения катализаторов,разлагающихпероксидводородасобразованиемсвободныхрадикалов(например, обнаружение гемсодержащего соединения - миоглобина в моче послеинфаркта, оценка скорости заживления ран по экссудату), определениясодержания гемоглобина в крови, исследование защитных механизмов крови(обнаружение фагоцитов и оценка их активности), диагностики небактериальнойаллергии (оценка активности эозинофилов, контролирующих воспалительныереакции) [6].В нашем исследовании, оценка состояния оксидантно-антиоксидантнойсистемы плазмы крови была основана на регистрации кинетики ХЛ в системеAБАП+люминол.
Подробное описание методики представлено в главе 2.Модифицированнаяметодикаподразумеваетновыйспособоценкианалитического сигнала.Принцип метода кинетической ХЛ заключается в регистрации и обработкеполной кривой развития ХЛ во времени [5,29]. В качестве генератора свободныхрадикалов использовали органическое соединение АБАП, которое при нагревании(370С) распадается на два радикала (рисунок 17). В присутствии люминола78регистрировали свечение, достигающее постоянного уровня I0 (рисунок 18, фаза1).
После добавления исследуемой плазмы свечение прекращалось благодарянейтрализации радикалов содержащимися в ней антиоксидантами, прежде всего –мочевой кислотой (рисунок 18, фаза 2). После расходования антиоксидантов,свечение вновь нарастало (рисунок 18, фаза 3) и достигало нового стационарногоуровня I* (рисунок 18, фаза 4), который при превышении уровня ХЛ додобавления плазмы может служить показателем прооксидантного действиябелков крови.Рис.
17. Схема получения алкилпероксильных радикалов при термолизе АБАП.Рис. 18. Кривая развития ХЛ в системе АБАП+люминол+плазма79Был проведен анализ 40 образцов плазмы крови, взятых у пациенток,поступивших в ОРИТ с тяжелой ПЭ. Группу контроля составили 40 пациенток сфизиологически протекающей беременностью, которые так же были обследованыс помощью данной методики. Все пациентки были сопоставимы по возрасту,паритету и сроку беременности на момент госпитализации и забора образца крови(таблица 6).Таблица 6Клиническая характеристика пациенток с тяжелой ПЭ в зависимости от формыкривой активированной ХЛ НФГруаХарактеристикаВозрастНеосложненнаяТяжелая ПЭбеременность(n=40)(n=40)30,6±7,233,9±4,8221935-36.6 недель1814доношенный2226Повторноро ящиеСрок беременности на моментзабора образ а кровиВ антиоксидантном профиле каждого образца плазмы определялись 2параметра – общая антиоксидантная емкость сильной фракции плазмы,обеспечиваемая мочевой кислотой и прооксидантная активность ее белковойфракции (уровень оксидативного стресса в белковом звене).Как видно из данных, приведенных в таблице 7, оба параметра имеютдостоверные различия у пациенток с тяжелой ПЭ по отношению к контрольнойгруппе.80Таблица 7Общая антиоксидантная емкость сильной фракции плазмы и антиоксидантнаяактивность белковой фракции у пациенток с тяжелой ПЭ и физиологическипротекающей беременностьюПоказательНеосложненнаяТяжелая ПЭбеременность(n=40)(n=40)Общая антиокси антнаяемкость сильно фрак ии252 [209,5; 278,8]651 [507,5; 849,7]*лазмы (усл.
е .)Проокси антнаяактивность белково0,0099 [0,0052; 0,0349]0,0056 [0,0040; 0,0075]*фрак ии лазмы (усл. е .)Примечание: * Данные пред тавлены медиано(Ме) и квартил ми [Q1; Q3].Анализ проведен по критери Манна-Уитни, p<0,05.Аналитический показатель, отражающий емкость сильной антиоксидантнойфракции (мочевая кислота, билирубин, аскорбат) в нашем исследовании имелдостоверное отличие (p<0,05) у пациенток с тяжелой ПЭ по сравнению с группойнеосложненной беременности. Повышение значения общей антиоксидантнойемкости сильной фракции плазмы у пациенток с тяжелой ПЭ в 2,5-3 раза посравнению с группой контроля, свидетельствует о повышенном уровнеоксидативногострессауниз.Полученныерезультатымогутбытьинтерпретированы как подтверждение более высокого уровня оксидативногостресса у пациенток с ПЭ, в ответ на который и происходит мобилизацияэндогенных антиоксидантов.Прооксидантнаяактивностьбелковойфракцииплазмы(альбумин,глобулины) так же имеет достоверное различие (p<0,05) у пациенток с ПЭ и снеосложненной беременностью.
Среднее значение данного параметра в 1,6 развыше у пациенток с ПЭ. Как показано в исследованиях Владимирова Ю.А. и81соавторов,повышениепрооксидантнойактивностибелковплазмысвидетельствует о хроническом окислительном стрессе [29]. Вероятно, снижениезначений данного параметра у пациенток с ПЭ в нашем исследованииотносительно и связано с гипопротеинемией, отмеченной у 28 (70%) пациенток.При индивидуальном анализе пациенток с тяжелой ПЭ, проведенном сучетом большой вариабельностью значений общей антиоксидантной емкостиплазмы, достоверных различий в выраженности симптомов заболевания, срокеего манифестации, сопутствующей патологии выявлено не было. Вероятно, стольширокий диапазон значений связан с лекарственной терапией, которую рядпациенток получал до поступления в стационар.
В частности, ряд препаратовцентрального действия, например, метилдопа, влияет на метаболизм эндогенныхантиоксидантов и, в частности, мочевой кислоты.3.3.2О енкафунк иональноактивностиНФсис ользованиеммо ифи ированно мето ики люминол-активированно ХЛВ современных клинических исследованиях показана ассоциация между ПЭи увеличением уровня циркулирующих TH17, которые характеризуютсяпродуцированием и секрецией IL-17, провоспалительного цитокина, наиболееизвестного благодаря его способности к активации НФ, продуцирующихактивные формы кислорода [96].
Активные формы кислорода обладаютвыраженной деструктивной активностью по отношению к липидному бислоюклеточных мембран, что играет важную роль в развитии, в частности, системногоэндотелиоза при ПЭ.В связи с этим, кроме определения антиоксидантной активности плазмы, у40 пациенток, поступивших в ОРИТ в тяжелом состоянии с ПЭ, нами былапроведена оценка функциональной активности нейтрофилов с помощьюмодифицированной методики люминол-активированной ХЛ. Группу контролясоставили 40 пациенток с физиологически протекающей беременностью, которыетак же были обследованы с помощью данной методики.82Полученная кривая ХЛ (методика проведения эксперимента была описана вглаве 2) состоит из 3 частей: 1) Спонтанная ХЛ, 2) ХЛ после предстимуляцииФМА и 3) ХЛ после основной стимуляции фМЛФ (рисунок 19).Рис.
19. Типичная хемилюминограмма крови здорового человека1 – спонтанный ответ; 2 – предстимуляция ФМА; 3 – основной стимул фМЛФ.Асп – амплитуда спонтанного ХЛ ответа; АФМА – амплитуда ответа,индуцированного ФМА; АфМЛФ – амплитуда ответа, индуцированного фМЛФИз аналитических показателей, которые можно вычислить и оценить поданным кривой ХЛ, нами были рассчитаны 4 значения:1. Интенсивность спонтанной ХЛ на 10й минуте свечения, нормированное наколичество НФ (n) (I*сп=Iсп/nНФ).2. Коэффициентпраймирования(Kп),определяемыйкакотношениемаксимальной интенсивности свечения после добавления ФМА к Iсп.3. Коэффициент активации (Ка), определяемый как отношение максимальнойинтенсивности свечения после добавления фМЛФ к Iсп.834.
Коэффициентзатухания(Кd),определяемыйкакотношенияеинтенсивности ХЛ спустя 23 минуты после пика быстрой вспышки (в ответна добавление фМЛФ) к значению ХЛ на этом пике.Проведя сравнение перечисленных аналитических показателей, выявленыдостоверные отличия между значениями коэффициента праймирования икоэффициента активации между пациентками с тяжелой ПЭ и пациентками сфизиологическим течением беременности (p<0,05) (табл. 8)Таблица 8Аналитические показатели кривой развития ХЛ нейтрофилов у пациенток с ПЭ инеосложненной беременностьюНеосложненнаяПЭбеременность(n=40)(n=40)I*с1,85 [0,33; 3,13]1,41 [0,57; 1,78]Кd0,41 [0,36; 0,52]0,42 [0,29; 0,62]K5,21 [2,2; 7,07]75,41 [25,84; 120,58] *Ка91,18 [28,35; 122,27]177,96 [41,8; 262,42] *Примечание: *Данные пред тавлены медиано(Ме) и квартил ми [Q1; Q3].Анализ проведен по критери Манна-Уитни, p<0,05Уровень спонтанного свечения НФ (I*сп) достоверно не отличался междупациентками с ПЭ и физиологически протекающей беременностью, чтозакономерно, поскольку данный параметр отражает фагоцитарную активностьпри инфекционном процессе, который не был отмечен у пациенток, включенныхв исследование.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
