Диссертация (1174342), страница 7
Текст из файла (страница 7)
МРТ дает возможность выявлятьинфаркт мозга в более ранние сроки, чем КТ, а такие методики как диффузно-39взвешенное изображение, позволяют диагностировать инфаркт мозга в первыеминуты его развития [90, 93].Магнитно-резонансный томограф GESignaExcite 1,5T представлен наРисунке 2.9.Рисунок 2.9 – Магнитно-резонансный томограф GESignaExcite 1,5T2.2.2. Ультразвуковая допплерографияДля выявления и определения степени стеноза, а также для диагностикианомалий брахиоцефальных артерий всем 160 пациентам, участвовавшим висследовании, проводилась ультразвуковая допплерография с использованиемаппарата Logiq 7 GE на основе матричных датчиков с многочисленными рядамиэлементов, которые помогают добиться однородного разрешения по всему полюобзора, что снижает объемное усреднение и увеличивает общую однородностьизображения как в ближнем, так и в дальнем поле.
Матричная технология GEснижает компромисс между глубиной сканирования и разрешением.Функциональные возможности аппарата:1) диагностика стенозов, окклюзий экстара- и интракраниальных артерий;402) диагностика аневризм, артериовенозных мальформаций различнойлокализации;3) выявление гипоплазии в каротидном или вертебро-базилярном бассейнах;4) выявление деформации хода артерий, врожденных сосудистых аномалий;5) наличие недостаточности, усиления или асимметрии кровотока всосудистых бассейнах.Аппарат для ультразвуковой допплерографии Logiq 7 GE изображен наРисунке 2.10.Рисунок 2.10 – Аппарат Logiq 7 GE2.3.
Методики оценки лабораторного статуса для верификацииокислительного стресса в исследуемых группах пациентовЛабораторное исследование проводилось на базе НИИ экспериментальнойбиологии и медицины (НИИ ЭБМ) ФГБОУ ВО ВГМУ им. Н. Н. БурденкоМинздрава России. Забор крови для биохимического исследования проводилсяпациентам с геморрагическим инсультом на 1-ые, 5-ые и 10-ые сутки41заболевания, больным с и ишемическим инсультом – однократно в первые суткипоступления в специализированное неврологическое отделение для больных снарушением мозгового кровообращения.При выполнении биохимических анализов использовался концентратлейкоцитов, стабилизированная кровь, взвесь плазмы, эритроцитов и сывороткикрови, которые были получены стандартным методом.
Забор крови дляпроведения общего анализа осуществляли в пробирки «Vacuette», с сиреневойкрышкой («Greinerbio-one», Австрия).Среди основных методик, которые применялись в исследовании, следуетотметить: спектрофотометрию,спектрокалориметрию, фотоэлектрокалориметриюибиохимлюминисценцию.фотоэлектроколориметр,определенияиспользуемыхспектроколориметрвеличиныспектрофотометрыСредиСФ-26флуоресценции,иСФ-56,вработе«Спекол-10»сприборов:насадкойспектрофлуориметрхемилюминометр.для―F-8‖,Биохимическиеисследования проводили на биохимическом анализаторе ClimaMC-15 (Испания).Ниже отображены методики исследования продуктов СРО белков, липидов,метаболитов оксида азота и показателей системы антиоксидантной защиты собозначением единиц измерения согласно методическим рекомендациям полабораторной диагностике [3, 21, 40, 41, 48, 58, 59, 60, 95, 96].1, 2. Кетодиены и диеновые коньюгаты (ОЕ/мл*100) -первичные(нестойкие) метаболиты СРО липидов.Исследуемый материал: гепаринизированная кровь.Реактивы: 96% этиловый спирт, смесь гептан изопропиловый спирт 1:1.Принципперегруппировкааналитическогодвойныхметода:подсвязейдействиемполиненасыщенныхАФКжирныхпроисходиткислотсобразованием сопряженных диеновых структур.Ход измерения: Экстрагирующую смесь добавляют в пробирки сисследуемой кровью и встряхивают около 2 минут.
После центрифугированияперемещают 2 мл верхнего слоя в чистые пробирки и выпаривают на водянойбане. К остатку добавляют 3 мл этилового спирта и оставляют при комнатной42температуре. Вычисляют относительную плотность исследуемых пробпридлинах волн 232 и 273 нм и сравнивают с контрольной, содержащей этанол.3. СО-концевые остатки аминокислот (ОЕ/мл) – первичные метаболитыСРО белков. Для их анализа использовался метод оценки окислительноймодификации белков.Исследуемый материал – сыворотка (гемолизированная сыворотка недопускается для анализа) 100 мкл.
Для взятия крови необходима пробирка скрасной крышкой или сухая стеклянная центрифужная пробирка. Сывороткаполучается стандартным методом, отбирается в эппиндорф, хранится при t +8ºС втечение дня. Исследование проводится в день забора.Методика исследования: основана на реакции взаимодействии окисленныхостатков аминокислот с 2,4-динитрофенилгидразином (2,4-ДНФГ).Ход измеренияНеобходимо приготовление трех опытных проб. Для получения первой впробирки помещают 0,05-0,1 мл сыворотки. Во второй к исследуемой сывороткедобавляют раствор в эквивалентном количестве, содержащий Fe2+, ЭДТА иН2О2. Контрольная проба формируется путем добавления 4 мл HCl к 0,05-0,1 млисследуемого образца.Вкаждуюопытнуюпробувносятпо1мл20%-огорастворатрихлоруксусной кислоты (ТХУ), затем охлаждают и центрифугируют.К образовавшемуся осадку добавляют 1 мл 2,4-ДНФГ, пробы инкубируют ицентрифугируют в течение 15 минут.Белковый осадок растворяютв 2,5 мл мочевины с последующейинкубацией.
Спектрофотометрически определяют содержание карбонильныхгрупп, измеряя оптическую плотность опытных проб в сравнении с контрольной,обработанной HCl.Единицы измерения карбонильных групп исчисляются в нмоль на мл, илиотнесенных на 1 мг белка. Степень окислительной модификации белковвыражают в единицах оптической плотности при длине волны 340 нм,отнесенных на 1 г белка или 1 мл плазмы.434. Малоновый диальдегид (мкМ/л) – вторичный метаболит СРО липидов.Исследуемый материал – сыворотка (гемолизированная сыворотка недопускается для анализа) 300 мкл. Для взятия крови необходима пробирка скрасной крышкой или сухая стеклянная центрифужная пробирка. Сывороткаполучается стандартным методом, отбирается в эппиндорф, хранится при t +8ºС втечение дня. Исследование проводится в день забора биоматериала.Реактивы:раствор2-тиобарбитуровойкислоты(2-ТБК),раствортрихлоруксусной кислоты (ТХУ), дистиллированная вода.Принцип аналитического метода.
Определение МДА в крови основано навзаимодействии МДА при высокой температуре в кислой средес 2-ТБК, собразованием окрашенного триметилового комплекса с максимум поглощенияпри 532 нм.Ход измеренияВ химические пробирки к 2,5 мл образца добавляют 2,5 мл 10%-го раствораТХУ. После центрифугирования проб к 3 мл полученного раствора добавляют 1,5мл 0,8%-ной 2-тиобарбитуровой кислоты (2-ТБК), перемешивают.
Закрытыепробками или фольгой пробирки помещают на водяную баню, далее охлаждают ицентрифугируют. После приобретения раствором розовой окраски измеряюткоэффициент пропускания света (T%) относительно контрольной пробы,содержащей 2,5 мл дистиллированной воды; 2,5 мл 10 %-й ТХУ; 1,5 мл 0,8 %-гораствора 2-ТБК.Расчет содержания МДА проводится по формуле:C = T% Eгде Т% – коэффициент пропускания света;Е = 15,8 М-1см-1 – коэффициент молярной экстинкции.5.
Битирозиновые сшивки (битирозин) (ОЕ/мл) – это вторичныеметаболиты СРО белков.Принцип аналитического метода базируется на регистрации с помощьюспектрофлуориметрииоптическойплотностиосовбождаемыхвысокомолекулярных пептидов трихлоруксусной кислоты в сыворотке крови.446. Флуоресцирующие основания Шиффа (ОЕ/мл*100) – конечныйметаболит СРО белков и липидов.Исследуемый материал – сыворотка крови.Реактивы: метиловый спирт, очищенный хлороформ, серная кислота,экстрагирующий раствор хлороформ-метанол 2:1, раствор хинин-сульфата.Принципаналитическогометода:методбазируетсянаизмерениифлуоресценции оснований Шиффа, извлекаемых из сыворотки крови липиднымирастворителямиХод измеренияВ пробирку к 1 мл исследуемой сыворотки добавляют 4 мл растворахлороформ-метанол.
Перемешав содержимое пробирок, их размещают наводяную баню, центрифугируют и фильтруют нижний хлороформный слой.Приступаюткизмерениюфлуоресценцииэкстрактовхлороформа,флуоресценции стандартного раствора и чистого хлороформа.7. Метаболиты оксида азота (мкМ/л) – образуются вследствие окисленияазотсодержащих активных функциональных групп.Принцип аналитического метода: метод базируется на восстановлениихлоридом ванадия (III) NO3– до NO2– с дальнейшим измерением концентрациинитрата с использованием реактива Грисса методом фотоэлектрокалориметрии.8.
Витамин Е (мкМ/л) – эндогенный биоантиоксидант.Исследуемый материал – сыворотка крови.Реактивы: 96 %-й спирт этиловый; гексан; бензол; раствор FeCl3 в этаноле;0,05 %-й раствор орто- или батофенантролина в этаноле.Принцип аналитического метода: метод основан на определении йонов Fe2+,образующихся в результате взаимодействия токоферолов с FeCl3 , в видеокрашенного комплекса с орто – или батофенантролином.Ход измеренияВ пробирки добавляют по 1 мл сыворотки крови и 1 мл этилового спирта, споследующим внесением 3 мл гексана.
Пробы встряхивают и центрифугируют.Выпаривают гексан на водяной бане и к сухому остатку прибавляют1 мл450,025 %-го раствора FeCl3. В пробы вносят по 1 мл 0,05 %-го раствора орто- илибатофенантролина. Измеряют оптическую плотность опытной и контрольнойпроб при длине волны 510 или 535 нм.9. Белковые тиолы (мМ/л) – SH-группы белков и аминокислот.Исследуемый материал – цельная кровь, сыворотка.Принцип аналитического метода: сульфгидрильная группа, являющаясясоставной частью белковых тиолов, взаимодействует с n-хлормеркурибензоатом собразованием меркаптидов, в результате чего происходит увеличение оптическойплотности раствора.Ход измерения: 0,1мл крови гемолизируют разведением водой в 30 раз.Далее к гемолизированной крови добавляют 1мл 10%-й метафосфорной кислотыи центрифугируют.
В центрифугате определяют SH-группы, не связанные сбелком. Готовят раствор объемом 10 мл путем добавления 1мл 5М раствора nхлормеркурибензоата,депротеинизированнойкровиисоответствующегоколичества ацетатного буфера с последующим инкубированием смеси прикомнатной температуре.Для приготовления контрольного раствора вместо n-хлормеркурибензоатаберется 1 мл воды.Содержание SН-групп выражают в мкг, после чего ведут перерасчет в мг%или мМ/л.10. Восстановленный глутатион (мМ/л) – эндогенный биоантиоксидант.Исследуемый материал–гепаринизированная кровь.Реактивы: 0,3 М фосфатный буфер; 20 %-й раствор трихлоруксуснойкислота (ТХУ); реактив Эллмана.Принцип аналитического метода: При взаимодействии сульфгидрильнойгруппы глутатиона (GSH) с реактивом Эллмана в эквивалентных количествахсинтезируется тионитрофенильный анион, имеющий желтый цвет с максимумомпоглощения при 412 нм.Ход измеренияПроводят измерение оптической плотности проб при λ= 412 нм.46В центрифужной пробирке восьмикратно разводят сыворотку и добавляют1,0 мл 20%-ой ТХУ.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
