Диссертация (1174323), страница 9
Текст из файла (страница 9)
журнал учета, хранения и использования витрифицированных эмбрионовпри анализе экстрагенитальной патологии учитывались данные о наличииНЖО, заболеваниях сердечно-сосудистой и эндокринной систем. Изучаягинекологический анамнез отмечался фактор и стаж бесплодия, попытка ЭКО,паритет, наличие в анамнезе операций по поводу различных образованийяичников, патологии эндометрия.Для определения степени выраженности снижения овариального резерва ифакторов эффективности ЭКО и ПЭ были подробно изучены данные изполиклинических карт.При анализе течения беременности после эффективного цикла ЭКО и ПЭоценивалисьособенноститеченияпервоготриместрабеременности.Оценивались такие осложнения как угроза прерывания и неразвивающаясябеременность.50Клинико-лабораторные методы. Изучение овариального резерва проводилис помощью определения уровня ФСГ, ЛГ, эстрадиола (Е2) в сыворотке крови сиспользованием метода ИФА, а также основного маркера овариального резерва– антимюллерова гормона (АМГ), методом иммуноферментного анализа (AMGGen II ELISA производства Beckman Coulter, Inc.
USA).2.3.2. Инструментальные методы.Проводилось 2D и 3D ультразвуковое исследование на аппарате Voluson730 Expert (GE Healthcare, Zipf, Austria) c использованием объемного 5-9 МГцтрансвагинального датчика:- в начале менструального цикла для решения вопроса о возможностиначала стимуляции суперовуляции с помощью 2Д УЗИ,- затем динамическая оценка роста фолликулов в стимулируемом цикледля определения количества растущих фолликулов с использованием 2DУЗИ.- в день переноса эмбриона для измерения параметров кровотока в матке,субэндометриальной зоне и эндометрии c использованием 3D УЗИ(настройки препарата: Gn -9,0, Frq low, Qual norm, WMF low1, PRF 0.9kHz.- приположительноманализекровинав-ХГЧдляопределениялокализации плодного яйца, установления факта маточной беременностии в последствии для диагностики таких осложнений как анэмбриония,неразвивающаяся беременность, наличие ретрохориальной гематомы –при 2D УЗИ.В день переноса эмбриона при помощи программы VOCAL (Virtual OrganComputer-aided AnaLysis) определяли объем ткани матки, субэндометрия иэндометрия в ручном режиме (Manual), который включал следующие этапы:- выбор изображения матки с использованием регулятора Zoom, позволяющегоувеличить масштаб изображения;- выбор угла вращения - 12° при помощи Rotation Step, который должен быть неболее 15°, поскольку при малой дискретности сосуды, расположенные рядом с51маткой, могут попадать в объем реконструкции объекта ;- выбор частоты среза - 1,5 мм, что является достаточным для получениядостоверных результатов;- построение объемного изображения.Погрешностью при построении считали зазубренный контур в некоторыхсрезах органа и в целом, несмотря на корректную обводку каждого среза.
Далееиспользовалась программа VOCAL TM, включающая в себя функцию (ColorAngio), которая автоматически рассчитывала следующие показатели: индексваскуляризации(VI),отражающийпроцентноеотношениесосудоввопределенном объеме ткани; индекс кровотока (FI) или интенсивностькровотока, определяющего объем клеток крови, перемещающихся в сосудах вовремя исследования; индекс васкуляризации-потока (VFI), сочетающий в себеинформацию о количестве сосудов и величине кровотока путем ихперемножения VI и FI. Данные показатели измерялись в матке, эндометрии иэндометрии с захватом субэндометриальной зоны (кнаружи на 5 мм отбазального контура эндометрия).На рисунке 4 представлено изображениеинформационного окна программы VOCAL с исследуемыми данными.Рисунок 4 – Информационное окно с данными об объеме исследуемойструктуры и индексах кровотока.522.3.3.Определение антиоксидантной активностифолликулярной жидкостиметодом кинетической люминол-активированной хемилюминесценции.Для оценки антиоксидантной активности фолликулярной жидкостииспользовали методику, основанную на подавлении хемилюминесценции (ХЛ).Вкачествеисточника свободныхрадикаловвсистеме использовалидиазосоединение — 2,2’-азобис(2-амидинопропан) дигидрохлорид — АБАП(«Fluka», США).
В качестве хемилюминесцентного зонда использовалилюминол(5-амино-1,2,3,4-тетрагидро-1,4-фталазиндион,гидразид3-аминофталевой кислоты, «Sigma-Aldrich»).Хемилюминесцентный анализ плазмы проводили на однокюветномхемилюминометре SmartLum 100 («ДИСофт», Россия).В микропробирку объёмом 1,5 мл помещали 50 мкл 50 мМ раствора АБАП и20,0 мкл 0,1 мМ люминола.
Смесь перемешивали в течение двух мин навстряхивателе «Vortex yellow line tts2» при частоте 1400 об/мин и инкубировали20 мин в темноте при комнатной температуре. Образование свободныхрадикалов в системе инициировали добавлением в кювету 930 мкл нагре- того(37°С) фосфатного буферного раствора (100 мМ KH2PO4, pH 7,4; «Sigma»,США) к 70 мкл смеси АБАП и люминола. Помещали пробирку в кюветноеотделениехемилюминометра.Регистрировалисвечениедодостижениястационарного уровня (I0) при 37°C, затем добавляли 10 мкл фолликулярнойжидкости, которую до этого разбавляли в 10 раз. После добавления пробысвечение прекращалось благодаря нейтрализации радикалов антиоксидантамифолликулярной жидкости. После расходования антиоксидантов свечение вновьнарастало и достигало нового стационарного уровня I. Общий объём пробы вкювете составлял 1 мл.Аналитические сигналы: S (АОА) — площадь над кривой, «вырезаемая»антиоксидантами,tgα—уголнаклонавосходящейчастикривой,характеризующий антиоксидантную активность белковой части (рисунок 5).53S-активность сильных антиоксидантовtg a – активность альбуминаРисунок 5 – Кривая развития хемилюминисценции при исследованииантиоксидантных свойств фолликулярной жидкости.Учитывая, что данный метод был изначально разработан для исследованияАОА плазмы крови, проводилась адаптация разработанного метода к анализуфолликулярной жидкости.
Выяснилось, что методика определения АОА можетбыть без изменений применена для анализа фолликулярной жидкости.Кинетическаякриваяхемилюминесценциифолликулярнойжидкостианалогична по виду кривой антиоксидантной активности плазмы крови.Активность сильных антиоксидантов так же может быть оценена по площади S,а антиоксидантная активность альбумина — по тангенсу угла наклона второйфазы восходящей части кривой.Для того чтобы оценить, действительно ли сильный антиоксидантпредставляет собой мочевую кислоту, в реакционную среду добавляли уриказув количестве 144 Ед/мл.
Такую активность ранее использовали для полнойнейтрализации мочевой кислоты в плазме крови. Действительно, в присутствииуриказы исчезает фаза действия сильного антиоксиданта, который, по всейвероятности, является мочевой кислотой. Следовательно, как и в плазме крови,антиоксидантная активность фолликулярной жидкости обусловлена мочевойкислотойиальбумином.Фолликулярнуюжидкостьполучалипри54трансвагинальной пункции фолликулов, которая производилась в цикле ЭКОчерез 34-36 часов после применения триггера овуляции.На пятые сутки производилась оценка качества эмбрионов, котораяосущетвлялась по классификации Gardnera на 5 сутки после оплодотворения:степень зрелости бластоцисты (1-6), внутриклеточная масса (А-плотноупакованная с большим количеством клеток, В – более свободная группировкасреднего количества клеток, С – незначительное количество клеток),трофэктодермальный слой (А- много клеток, формирующих трофэктодерму, В– немного клеток, С – незначительное количество больших клеток).Статистический анализ полученных данных осуществлялся с помощьюпрограмм MedCalc версии 18.5 и Microsoft Excel 2016.
Данные былипредставлены с помощью методов описательной статистики. Количественныезначения были представлены как среднее стандартное отклонение (М±SD)ПрималойчисленностииспользовалсягруппкритерийиотсутствииМанна-Уитни.нормальногоКритическоераспределениязначенияуровнязначимости принимали равным 5% (p≤0,05). Для определения зависимостиисследуемых параметров применяли ROC-анализ, при котором анализировалиплощадь под кривой, оценивающей качество модели. Чем выше площадь поROC-кривой, тем лучше качество модели: 0,9-1,0 – отличное; 0,8-0,9 – оченьхорошее; 0,7-0,8 – хорошее; 0,6-0,7 – среднее; 0,5 – 0,6 – неудовлетворительное.55ГЛАВА 3.
Результаты собственных исследований.3.1.Особенности течения беременности в первом триместре при сниженномовариальном резерве (ретроспективный этап исследования).Целью данного этапа работы была оценка особенностей течения первоготриместра беременности у пациенток со сниженным овариальным резервом. Входе исследования была изучена и обработана 151 история пациенток,забеременевших после ЭКО и ПЭ. Распределение пациенток на группыпроизводилось в зависимости от овариального резерва. Первую группусоставило 111 пациенток со сниженным овариальным резервом, вторую – 40 снормальным овариальным резервом.Оценивая особенности течения первого триместа у пациенток с различнойфункцией яичников выявлено, что их частота в I триместре чаще встречалась вгруппе пациенток со сниженным овариальным резервом - 88 (79,3%).
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
