Диссертация (1174307), страница 10
Текст из файла (страница 10)
Предварительное закапывание пациенту местных анестетиков (инокаин0.3%) для проведения А-сканнирования.3. Выбор режима А-сканнирования для опеределения передне-заднего размераглаза, глубины передней камеры, размера (толщины хрусталика). Асканнирование проводилось с помощью установки датчика для проведенияэхобиометрии на роговицу.4. Выбор режима В-сканнирования для обследования состояния стекловидноготела, сетчатки, ретробульбарного пространства.
«Перед началом исследованияна датчик наносилось небольшое количество геля, обеспечивающего контактдатчикасглазомребенка.B-сканирование(эхография)транскутанно с помощью установки датчика на веки»5.45Там же.Там же.проводилось532.3. Иммунологические исследования.Иммунофенотипирование клеток периферической крови, включая Трегуляторные клетки (Т-рег):1.
Забор крови у детей из вены на операционном столе во время оперативноговмешательства под общим обезболиванием. Периферическую кровь отбирали впробирки с антикоагулянтом K3EDTA (Greiner Bio One, Austria).2. Лизирование эритроцитов производили при помощи лизирующего буфераRed Blood Cell Lysing buffer (Life technologies, США) по протоколу производителя. Клетки в количестве 5 x 106 из осадка ресуспендировали в 200 мклфосфатного буферного раствора.3.
Т-рег клетки периферической крови пациентов и доноров метили припомощи Treg detection staining cocktail (Miltenyi Biotec, Германия) по протоколупроизводителя. Количество Трег определяли методом проточной цитометриина цитометре MACS Quant (Milteny iBiotec). Мононуклеарные клетки в количестве 1х106 ресуспендировали в 200 мкл фосфатного буферного раствораиметили антителами CD4-FITC и CD25-APC (все от Miltenyi Biotec).
Далее производили фиксацию и пермобилизацию клеток при помощи Transcription FactorBuffer Set (BD Pharmingen, США), внутриклеточное окрашивание антителамиFoxP3-PE (BD Pharmingen) и последующий анализ на проточном цитометреMACS Quant (Miltenyi Biotec).4. Иммунофенотип клеток крови определяли с использованием 7-цветногококтейля антител: СD14 FITC (clone Tuk4), CD56PE (clone REA196), CD4 PerCP(clone VIT4), CD19 PE-Vio*770 (clone-L T19), CD3 APC (clone BW264/56), CD8APC-Vio770 (clone BW135/80), CD45 VioBlue* (clone 5B1).54Рис.
8. Ламинарный шкаф для пробоподготовкиРис. 9. Центрифуга для пробоподготовкиРис. 10. Флуоцитометр552.4. Методы математической статистики:В исследовании использовались следующие методы математическойстатистики:1. Методы статистического анализа клинических данных:- определение закона распределения признака по критерию Шапиро-Уилка;- описательная статистика (вычисление средних значений, СКО, СОС,дисперсии и т.д.).2.
Методы сравнения групп по количественному признаку:- t-критерий Стьюдента для независимых групп;- сравнение двух групп по критериям Вилкоксона и Манна-Уитни;- сравнение трех групп и более по критерию Краскела-Уоллиса.3. Методы определения взаимосвязи двух признаков:- определение коэффициентов корреляции по Пирсону и Спирмену.4.
Методы построения линий тренда.Статистическую обработку проводили с использованием программы «StatsoftStatistica v.7», и MS EXCEL 2007.Достоверностьполученныхразличийоценивалиспомощьюнепараметрического критерия Манна-Уитни (сопоставление двух независимыхгрупп данных по клиническим признакам в случае распределений, отличных отнормальных).
Достоверными считались различия при р<0,05. Осуществлялсяподбор линии тренда, наиболее точно описывающей тенденции изучаемыхпараметров клеточного иммунитета у детейс различнымистадиямиретинопатии недоношенных.2.5. Методы хирургического лечения.Для лечения больных мы применяли различные методы хирургическоголечения (лазерные операции и витреоретинальные). При РН III+ стадиивыполнялась транспупиллярная диодная лазерная коагуляция сетчатки, при РНIVa стадии и в некоторых случаях 1Vb стадии – микроинвазивнаяленссберегающая витреошвартэктомия, при IVb и V стадии – микроинвазивнаяленсвитреошварэктомия. Операция проводилась под общим обезболиванием (в56большем проценте случаев с использованием ларингеальной маски, востальных (у наиболее тяжелых по общему состоянию и маловесных детей)применялась интубация). Дополнительно применяли местное обезболивание –ретробульбарно вводили раствор наропина 2% (дозировка выбиралась взависимости от веса ребенка).2.5.1.
Методика проведения транспупиллярной диод-лазерной коагуляции.При проведении этой методики мы использовалии диод-лазерныйфотокоагулятор«ЛАХТА-МИЛОН»(производствоРоссия),установкулазерную офтальмологическаz Iumenis (производство Франция), установкулазерную офтальмологическую Supra Quntal Medical (производство Франция).Для проведения операции необходим налобный бинокулярный офтальмоскоп(Heine (Германия) OMEGA 180); линза для проведения лазеркоагуляциисетчатки Quad pediatric (VOLK, США). Также использовались специальныевекорасширители для новорожденных.Методика проведения операции: (Методические рекомендации «Крио илазеркоагуляция в лечении активной ретинопатии недоношенных» Москва –2004 г.
Составители: Сидоренко Е.И., Аксенова И.И., Асташева И.Б. и др.)Проводилась фокусировка с помощью фиксационной лазерной метки.Коагуляты наносились путем нажатия на ножную педаль. Объем операции(число коагулятов) зависит от протяженности периферического вала, шириныаваскулярной зоны, формы течения РН. По наиболее щадящей методикекоагуляты наносят в один ряд по переднему краю фиброваскулярного вала синтервалом в один или половину диаметра коагулята.
Возможно нанесениекоагулятов в два ряда в шахматном порядке. Показанием к этой методикеявляется “классическая” форма течения РН, либо течение заболевания по типу“плюс”- болезни и распространением вала на небольшом протяжении. Подругой методике коагуляцию начинают сразу за ora serratа. Затем наносяткоагуляты спереди назад на всей аваскулярной сетчатке до переднего краяфиброваскулярного вала. Коагуляты располагаются вплотную друг к другу,либо на расстоянии не более половины их диаметра. Показанием для такой57методикикоагуляциислужитналичие“плюс”-болезнисбольшойпротяженностью периферического вала. Всего наносится до 15 криокоагулятовили от 50 до 450 диод-лазеркоагулятов в зависимости от ширины аваскулярнойзоны.Рис.
11. Лазерная установка Supra Quntal Medical2.5.2. Методика витреоретинального вмешательства.Данный вид хирургического вмешательства проводился при ретинопатиинедоношенных IVа, IVb, V стадиях.Данноеоперативноестереомикроскопавмешательство(стереомикроскоппроводилосьоперационныйподофтальмологическийMOLLER Hi-R 900, ОРMI VISU 200, Leica (Германия) (рис. 13).Рис. 12.
Операционный микроскоп Leicaконтролем58Мы проводили витректомию ссистемыIOLTECHиспользованиемдля операций на переднем и(Франция),D.O.R.Cзаднем отрезке глаза(Голландия),использованием контактных линзоперационнойAcurus(Alkon,PentasysСША)сдля проведения витреальных операций –стеклянные линзы (производство США), широкоугольных хирургических линз(Ocular США) (рис.14).Рис.13.Операционная система Acurus (Alkon, США)В зависимости от того, на какой операционной системе мы проводилиоперации, применялись инструменты различных фирм (витрэкторы для заднейвитрэктомии 20 Gа, 23 Gа, 25 Gа, эндоосветители 20 Gа, 23 Gа, 25 Gа,троакарные системы 23 Gа, 25 Gа, силиконовые канюли 20 Gа, 23Gа, 25Gа(Фирма RUMEX (США),DORC (Голландия), Acurus(Alkon, США).
Мыиспользовали витреоретинальные инструменты многоразовые и однократногоиспользования (ООО «Алкон Фармацевтика», Мединурал, «Титан» (Россия)).При ретинопатии недоношенных IVа стадии и в ряде случаев IVb восновном применялись операции с сохранением хрусталика – микроинвазивнаяленссберегающая витреошвартэктомия (рис.15). Витрэктомию проводили постандартной методике с использованием инструментов 23 Gа или 25Gа.Применялисьспециальныевекорасширителидляноворожденных.Производился разрез конъюнктивы в области лимба (расположение и величинаразреза зависили от преполагаемого расположения портов). С помощьютроакаров23Gаили25Gачерезплоскуючастьцилиарноготела59устанавливались порты в трех сегментах. Расположение портов зависело отлокализации отслойки сетчатки.
Через один из портов осуществлялась подачажидкости с помощью силиконовой канюли соответствующего диаметра. Черездругие два порта осуществлялись манипуляции инструментами. Витректомияпроводилась с помощью высокочастотного витреотома (частота резов 2500) подконтролем световода 23 Gа или 25Gа. С помощью пинцета и ножниц удалялисьтрас- и эпиретинальные мембраны. При необходимости производиласьдополнительнаяилипервичная(применялись лазерныйРоссия),эндолазеркоагуляцияаваскулярныхзонкоагулятор «ЛАХТА-МИЛОН» (производствоустановка лазерная офтальмологическая Iumenis (производствоФранция), установка лазерная офтальмологическая Supra Quntal Medical(производство Франция). На область пунктур склеры и конъюнктивунакладывали швы 7-0 викрил.Рис.14.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
