Диссертация (1174300), страница 25
Текст из файла (страница 25)
Кроме того, Gębura et al. (2017) навыборке пациентов с РА из Польши показали, что наличие гомозиготного генотипаNFKB1 rs28362491*II ассоциировано с повышением риска отсутствия ответа наингибиторы TNFα в целом, а наличие аллеля NFKB1 rs28362491*D, и вособенности генотипа NFKB1 rs28362491*ID, ‒ напротив, с более высокойэффективностью соответствующего лечения [223]. Нами также было установлено,что аллель NFKB1 rs28362491*D способствует снижению риска отсутствия ответана этанерцепт у детей с ЮИА. В то же время оказалось, что генотип NFKB1rs28362491*DD маркирует повышенную предрасположенность к отсутствиюответа на метотрексат при ЮИА (у девочек). Полученные данные представляютособый интерес в отношении прогнозирования эффекта терапии при ЮИА, так какпозволяют выявить группу риска по отсутствию ответа на метотрексат и припервыхпризнакахреализациинеблагоприятногопрогнозаилиисходнорекомендовать усиление терапии за счет назначения этанерцепта.3.5 Исследование особенностей цитокинового профиля у больных сювенильным идиопатическим артритом до назначенияиммуносупрессивной терапииДля исследования особенностей цитокинового профиля при ЮИА былапроведена оценка содержания TNFα, IL1β, IL6, IL10 в сыворотке крови, а такжеизучена их спонтанная и митоген-индуцированная продукция в культуре клетокцельной крови пациентов до назначения иммуносупрессивной терапии.
Далее былвыполнен анализ наличия взаимосвязи показателей цитокинов между собой, а такжес особенностями течения заболевания и ответом на терапию.Клиническая характеристика пациентов с ЮИА, которым проводилась129оценка цитокинового профиля, представлена в Таблице 13.Таблица 13 ‒ Клиническая характеристика обследованных пациентов с ЮИАПризнакВозраст включения в исследование,Me (Q1;Q3), летПол, ni (pi, %)Увеит, ni (pi, %)Тяжесть течения, ni (pi, %)Повышение СОЭ, ni (pi, %)Повышение СРБ, ni (pi, %)Дефицит IgA, ni (pi, %)Повышение IgA, ni (pi, %)Повышение IgM, ni (pi, %)Повышение IgG, ni (pi, %)Наличие ответа на метотрексат, ni (pi, %)Достаточный ответ на метотрексат, ni (pi, %)ВариантыЗначение*-4,42 (3,43;8,66)Женский /МужскойДа /НетТяжелое /Умеренное /ЛегкоеДа /НетДа /НетДа /НетДа /НетДа /НетДа /НетДа /НетДа /Нет19 (67,86) /9 (32,14)2 (7,14) /22 (78,57)6 (21,43) /18 (64,29) /2 (7,14)17 (60,71) /8 (28,57)12 (42,86) /14 (50,00)4 (14,29) /24 (85,71)9 (32,14) /19 (67,86)8 (28,57) /19 (67,86)19 (67,86) /9 (32,14)21 (75,00) /4 (14,29)5 (17,86) /11 (39,29)Уровни цитокинов TNFα, IL1β, IL10 в сыворотке крови и при спонтаннойпродукции у пациентов с ЮИА оказались низкими, причем от 50% до 100%значений были ниже регистрируемых пределов (Таблица 14).
В то же время былоотмечено существенное нарастание уровней всех изученных цитокинов пристимуляциикомплексныммитогеном(pcor<0,05).Уровеньмитоген-индуцированной продукции IL6 в последующий анализ не включался в связи сбольшим количеством значений, превысивших максимальный регистрируемыйанализатором порог, и ограниченным объемом первичного материала дляисследования.130Таблица 14 ‒ Содержание цитокинов TNFα, IL1β, IL6, IL10 в сыворотке крови ипоказатели их спонтанной и митоген-индуцированной продукции в культуреклеток цельной крови пациентов с ЮИА до назначения иммуносупрессивнойтерапииЦитокин1TNFαIL1βIL6IL10СывороточныйуровеньСпонтаннаяпродукцияМитогениндуцированнаяпродукцияMe(Q1;Q3)min-max, пг/млni20,0(0,0;0,0)0,0-0,0280,0(0,0;1,15)0,0-154,0284,2(1,5;11,4)0,0-467,6270,0(0,0;0,0)0,0-81,828Me(Q1;Q3)min-max, пг/млni30,0(0,0;0,0)0,0-46,1280,35(0,0;6,85)0,0-522,42817,7(5,8;71,1)1,4-4496,0280,0(0,0;0,0)0,0-21,528Me(Q1;Q3)min-max, пг/млni480,0(40,0;112,0)15,2-200,028750,0(510,8;1073,6)240,4-1264,0274536,0(4360,0;7412,0)4114,0-7606,07109,3(47,2;149,6)0,0-334,828Сравнение показателейспонтанной и митогениндуцированной продукции(критерий Вилкоксона)Zppcor6784,5770,000005 <0,0000014,5170,000006 <0,0000012,3664,4570,0180,0170,000008 <0,000001Для исследования наличия взаимосвязи показателей цитокинов между собойиспользовался корреляционный анализ.
Было выявлено наличие статистическизначимой слабой прямой взаимосвязи между уровнями IL6 и IL10 в сывороткекрови (R=0,497, t=2,86, p=0,008, pcor=0,007), а также между содержанием IL6 всыворотке крови и уровнем его спонтанной продукции (R=0,485, t=2,77, p=0,010,pcor=0,011). Кроме того, было показано наличие умеренной прямой статистическизначимой взаимосвязи между показателями спонтанной продукции TNFα, IL1β иIL6 (R=0,54, t=3,29, p=0,003, pcor=0,002 для TNFα&IL1β; R=0,54, t=3,26, p=0,003,pcor=0,002 для TNFα&IL6; R=0,57, t=3,551, p=0,001, pcor=0,002 для IL1β&IL6).Уровень спонтанной продукции IL10 существенно коррелировал только с131аналогичным показателем для TNFα, при этом связь оказалось прямой, но слабой(R=0,41, t=2,30, p=0,030, pcor=0,048).
Была отмечена тенденция к наличию прямойвзаимосвязи между значениями спонтанной продукции IL10 и IL6 (R=0,36, t=1,97,pcor=0,059). При анализе показателей митоген-индуцированной продукциицитокинов корреляций установлено не было. Наблюдалась лишь тенденция кналичию прямой взаимосвязи между уровнями IL1β при спонтанной и митогениндуцированной продукции (R=0,36, t=1,95, pcor=0,063).Далее был выполнен анализ ассоциаций показателей цитокинового профиляс клиническими характеристиками ЮИА.Между возрастом пациентов и изученными параметрами цитокиновсущественных корреляций выявлено не было (p>0,1). В то же время былаустановлена слабая обратная взаимосвязь между длительностью заболевания иуровнем митоген-индуцированной продукции TNFα (R=-0,47, t=-2,72, p=0,011,pcor=0,012) (Таблица 15).Таблица 15 ‒ Анализ взаимосвязи показателей цитокинового профиля склиническими характеристиками ЮИАКлиническиехарактеристики(особенности)ЮИАПоказателицитокиновогопрофиля12митогениндуцированнаяпродукция TNFαспонтаннаяпродукция IL6митогениндуцированнаяпродукция TNFαcывороточныйуровень IL10спонтаннаяпродукция IL10спонтаннаяпродукция IL6ДлительностьзаболеванияФормированиеувеитаПовышение СОЭПовышение IgMИзменение показателей цитокиновогопрофиля при наличии клиническойособенности в сравнении с ее отсутствием(vs)качественноколичественно,Me(Q1;Q3), пг/мл34ppcor5NA(снижение)NA(R=-0,47)0,0110,012повышение2827,5 (1159,0;4496,0) vs17,7 (4,2;61,6)0,0070,004снижение32,2 (27,6;36,8)vs 85,6 (52,0;112,0)0,0290,0290,0 (0,0;0,0)vs 0,0 (0,0;39,8)0,0 (0,0;0,0)vs 0,0 (0,0;10,45)92,7 (16,5;634,35)vs 7,0 (4,1;24,1)0,0400,0240,0100,0240,0130,013снижениеснижениеповышение132Статистически значимых различий по изученным показателям цитокиновогопрофиля в зависимости от пола пациентов, тяжести течения заболевания и ответана метотрексат у пациентов с ЮИА не наблюдалось (p>0,05).
Была отмечена лишьтенденция к снижению уровня спонтанной продукции IL6 у пациентов с легкимтечением ЮИА (pcor=0,058).На момент обследования увеит был выявлен только у одной пациентки, аспустя 2 месяца поражение глаз было установлено также у второй больной. Прианализе уровней цитокинов оказалось, что у обеих пациенток с увеитоммногократно (более чем в 100 раз), в сравнении с остальными больными, былповышен уровень спонтанной продукции IL6 (p=0,007, pcor=0,004). В то же времяуровень митоген-индуцированной продукции TNFα при наличии поражения глазбыл существенно ниже, чем при отсутствии такового (p=0,029, pcor=0,029). Приэтом длительность заболевания в обеих группах значительно не отличалась(p=0,133).Повышение СОЭ у больных с ЮИА сопровождалось статистическизначимым снижением содержания IL10 в сыворотке крови и уровня его спонтаннойпродукции (p=0,040 (pcor=0,024) и p=0,010 (pcor=0,024) соответственно).
В то жевремя взаимосвязи показателей цитокинов с повышением уровня СРБ установленоне было (p>0,05).Гипериммуноглобулинемия класса М у пациентов с ЮИА оказаласьассоциирована со значительным повышением спонтанной продукции IL6(p=0,013,pcor=0,013).Следуетотметить,чтоприналичиигипоиммуноглобулинемии класса A наблюдалось повышение спонтаннойпродукции TNFα и IL10, а при наличии гипериммуноглобулинемии класса A –увеличение сывороточного уровня IL1β, однако после коррекции различияоказались несущественными (p=0,035 (pcor=0,059), p=0,046 (pcor=0,072), p=0,042(pcor=0,053)соответственно).Крометого,упациентовсЮИАcгипериммуноглобулинемией класса G была отмечена тенденция к снижениюуровня спонтанной продукции IL10 (p=0,052, pcor=0,045).133Таким образом, нами было показано, что уровни TNFα, IL1β, IL10 всыворотке крови и при спонтанной продукции у пациентов с ЮИА до назначенияиммуносупрессивнойтерапиибылинизкими.Данныйфакт,вероятно,свидетельствует об отсутствии или слабой активации иммунных клеток на моментобследования.
В то же время было отмечено существенное нарастание уровнейвсех рассмотренных цитокинов при стимуляции митогенами, что свидетельствуето наличии у иммунных клеток высокого потенциала к секреции соответствующихпродуктов.Исследование уровней цитокинов у пациентов с ЮИА ранее проводилось вряде работ, однако данные противоречивы. По данным Muller et al. (1998), уровниIL1β, IL6 и TNFα при спонтанной продукции в культуре клеток цельной кровипациентов с системным ювенильным хроническим артритом оказались нижерегистрируемого порога, однако, как и в настоящем исследовании, было отмеченонарастание соответствующих показателей после стимуляции липополисахаридом[17, 151].
При этом авторами не было выявлено статистически значимыхкорреляций между уровнями спонтанной или индуцированной продукции TNFα,IL1β, IL6, IL10 с показателями активности заболевания. Следует отметить, чточасть пациентов в указанной выборке получала иммуносупрессивную терапию иглюкокортикостероиды.ВработеПашнинойссоавт.(2014)медианысывороточных уровней IL1β и TNFα у пациентов с ЮИА были равны нулю, приэтом исследование цитокинов в супернатантах культур клеток периферическойкрови, как и в представленной работе, оказалось более информативным (медианысоответствующих показателей после культивирования: 8,0 пг/мл (0,2;22,0) и 3,0пг/мл (1,0;5,0)) [9].
В то же время, согласно данным Закирова с соавт. (2016), приизмерении методом проточной флюориметрии медианы показателей спонтаннойпродукции IL6, IL10 и TNFα в культуре клеток цельной крови пациентов с ЮИА,получавших генно-инженерные биологические препараты, составили 356,4 пг/мл(34,1;303,7), 1,5 пг/мл (1,8;7,9) и 33,0 пг/мл (6,8;67,9) соответственно. При этомстимуляцияфитогемагглютининомсопровождаласьповышениемцитокинов, что согласуется с результатами нашей работы [148].уровней134В ряде работ сообщается о высоком или, по крайней мере, детектируемомсодержании TNFα, IL1β, IL6 в сыворотке крови пациентов с ювенильным артритом[7, 78, 98, 108, 169, 252].
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
