Диссертация (1174300), страница 29
Текст из файла (страница 29)
Кроме того, на выборке здоровыхиндивидов было показано, что у носителей аллеля MIF rs755622*С уровень MIF всыворотке крови значительно выше, чем у таковых с генотипом MIF rs755622*GG[196]. У пациентов с системным вариантом ЮИА аллель MIF rs755622*С такжебыл ассоциирован с более высоким (в сравнении с генотипом MIF rs755622*GG)уровнем MIF в сыворотке крови и синовиальной жидкости, а у детей солигоартикулярным вариантом – только в синовиальной жидкости [115, 180].Представленные сведения, а также данные о способности MIF индуцироватьобразование IL6 [182] согласуются с результатами нашей работы, где былапоказана взаимосвязь генотипа MIF rs755622*CC c повышением, а генотипа MIFrs755622*GG – cо снижением сывороточного уровня IL6 при ЮИА.
Кроме того,нами было установлено, что аллель MIF rs755622*C служит маркеромповышенного риска формирования РФ-позитивного полиартикулярного вариантаЮИА (в целом), а также гипериммуноглобулинемии классов A и G у пациентов сЮИА.148При исследовании полиморфного локуса CTLA4 rs3087243 Ueda et al.
(2003)было показано, что соотношение мРНК растворимой и полноразмерной изоформCTLA4 в нестимулированных CD4+ Т-лимфоцитах индивидов с генотипом CTLA4rs3087243*GG оказалось значительно ниже, чем у таковых с генотипами CTLA4rs3087243*GA и CTLA4 rs3087243*AA (наиболее выраженно в последнем случае)[66]. В связи с этим авторами было сделано предположение, что область,содержащая данный полиморфизм, может определять эффективность сплайсинга ипродукции растворимой изоформы CTLA4 [66]. De Jong et al.
(2016) показали, чторассматриваемый полиморфный локус практически полностью сцеплен с (AT)nдинуклеотидным повтором в 3’-нетранслируемой области гена CTLA4 (D’=1,0),длинные варианты которого оказались ассоциированы, с одной стороны, сналичием аллеля CTLA4 rs3087243*G, а с другой – со снижением уровня CTLA4 иего мРНК в аутореактивных к островковым клеткам поджелудочной железы Tклетках [298]. Кроме того, Kasela et al.
(2017) установили, что аллель CTLA4rs3087243*G ассоциирован со значительно более низким уровнем экспрессииCTLA4 в поликлональной популяции CD4+ и CD8+ T-лимфоцитов [208]. В нашейработе наблюдалась лишь тенденция к наличию взаимосвязи полиморфныхвариантов локуса CTLA4 rs3087243 с некоторыми показателями цитокиновогопрофиля при ЮИА, а в ходе исследования предиктивной роли были установленыполоспецифические ассоциации. Так, оказалось, что аллель CTLA4 rs3087243*A, соднойстороны,служитмаркеромсниженногорискаразвитияраспространившегося олигоартикулярного варианта ЮИА у девочек, а с другой –маркером повышенного риска недостаточного ответа на метотрексат у мальчиковс ЮИА.
Кроме того, было показано, что генотип CTLA4 rs3087243*AАассоциирован с повышенным риском формирования гипериммуноглобулинемиикласса M при ЮИА (у девочек). Некоторая противоречивость результатов,вероятно, обусловлена специфическим влиянием CTLA4 и его изоформ нареализацию указанных выше нарушений.В работах Karban et al. (2004) и Park et al.
(2007), посвященных изучениюполиморфного локуса NFKB1 rs28362491, было показано, что экстракты ядерных149белков преимущественно связывались с олигонуклеотидами, содержащими аллельNFKB1 rs28362491*I, а соответствующие конструкции в опытах по транзиентнойтрансфекции обладали более высокой промоторной активностью, в сравнении саллелем NFKB1 rs28362491*D [116, 198].
Кроме того, Park et al. (2007) былоотмечено повышение содержания p50/p105 в цитоплазме эндотелиальных клетокпупочной вены при наличии генотипа NFKB1 rs28362491*II (в сравнении сгенотипом NFKB1 rs28362491*DD) [198]. В нашем исследовании была показанаассоциация гетерозиготного генотипа NFKB1 rs28362491*ID c повышениемспонтанной продукции IL6 и IL10 у пациентов с ЮИА. При этом у носителейгенотипа NFKB1 rs28362491*II наблюдалась тенденция к более низкому уровнюспонтанной продукции IL6 и IL1β в культуре клеток цельной крови, чем уносителей аллеля NFKB1 rs28362491*D.
В ходе исследования предиктивной роливариантов данного локуса наблюдалась некоторая противоречивость, что можетбыть связано с преобладанием роли тех или иных медиаторов в патогенезеотдельных состояний при ЮИА. Так, было выявлено, что аллель NFKB1rs28362491*Dассоциировансосниженнымрискомформированияперсистирующего олигоартикулярного варианта ЮИА и отсутствия ответа наэтанерцепт у пациентов с ЮИА (в целом). В то же время оказалось, что генотипNFKB1 rs28362491*DD маркирует повышенную предрасположенность к энтезитассоциированному варианту ЮИА (у мальчиков), а также к отсутствию ответа наметотрексат при ЮИА (у девочек). При этом гетерозиготный генотип NFKB1rs28362491*ID выступал протективным маркером в отношении недостаточногоответа на метотрексат при ЮИА (у девочек).Сведения о функциональном значении полиморфного локуса PTPN22rs2476601несколькопротиворечивы.Согласнооднимданным,наличиемутантного аллеля PTPN22 rs2476601*A приводит к снижению функциисоответствующей фосфатазы, согласно другим – к усилению таковой, однако неисключается более сложный механизм реализации эффекта, который зависит оттипа клеток и взаимодействия с различными белками [79, 240, 246, 304].
Тем неменее ранее была установлена взаимосвязь аллеля PTPN22 rs2476601*A с рядом150иммунологических расстройств,способствующих развитиюаутоиммунныхзаболеваний, в том числе со специфическим изменением функционирования T- иB-клеточныхрецепторныхсигнальныхпутей,нарушениемконтролязаподдержанием аутотолерантности с накоплением ауто- и полиреактивных Вклеток и усиленной продукцией аутоантител плазматическими клетками,экспансией T-клеток памяти и сдвигом T-клеточной дифференцировки в сторонуTh1, а также с некоторыми нарушениями врожденного иммунного ответа [79, 240].Vang et al. (2013) установили, что аллель PTPN22 rs2476601*A ассоциирован созначительным повышением продукции TNFα активированными CD4+ Tлимфоцитами здоровых доноров [270].
Rieck et al. (2007) на выборке индивидов безаутоиммунных заболеваний было показано, что у носителей генотипа PTPN22rs2476601*GA уровень продукции IL10 активированными CD4+ T-лимфоцитамибыл существенно ниже, чем у таковых с генотипом PTPN22 rs2476601*GG, однакопо уровню TNFα существенных различий не наблюдалось [124]. Кроме того, Wanget al.
(2013) не выявили различий в уровне экспрессии TNFα и IL6липополисахарид-стимулированными дендритными клетками здоровых доноров взависимости от наличия или отсутствия аллеля PTPN22 rs2476601*A [271]. Внашей работе не было установлено ассоциаций полиморфных вариантов локусаPTPN22 rs2476601 с показателями TNFα, IL1β, IL6, IL10 у пациентов с ЮИА.
Темне менее была показана взаимосвязь аллеля PTPN22 rs2476601*A с повышеннымриском развития ЮИА и его персистирующего олигоартикулярного варианта, нотолько у девочек. Наличие рискового эффекта для генотипа PTPN22 rs2476601*GAнаблюдалось в отношении формирования обоих олигоартикулярных вариантовЮИА (персистирующего и распространившегося) (у девочек), а также энтезитассоциированного варианта (у мальчиков). В то же время было установлено, чтоаллель PTPN22 rs2476601*A у мальчиков с ЮИА маркирует повышениевероятностилегкоготечениязаболеванияиснижениерискаразвитиягипериммуноглобулинемии класса M, а у девочек с ЮИА служит протективныммаркером в отношении формирования дефицита IgA.Функциональное значение полиморфного локуса PADI4 rs2240336, по151доступным на сегодняшний день сведениям, остается неизвестным.
Тем не менеенами было показано, что у пациентов с ЮИА с генотипом PADI4 rs2240336*AAуровень спонтанной продукции IL1β и IL6 существенно выше, чем у носителейаллеля PADI4 rs2240336*G. Полученные результаты согласуются с установленнымдля генотипа PADI4 rs2240336*GG протективным эффектом в отношении тяжелоготечения заболевания и повышения IgG у пациентов с ЮИА.В целом следует отметить, что некоторая противоречивость результатов,наблюдаемая в нашем исследовании и в работах других авторов, может бытьобусловлена спецификой патогенеза того или иного состояния, взаимодействиемполиморфных вариантов генов, этническими различиями, а также особенностямидизайнаэкспериментакультивируемых клеток).(в томчиследозой и видоммитогена,типом152ЗАКЛЮЧЕНИЕЮИА является одним из наиболее распространенных и инвалидизирующихревматологических заболеваний в педиатрической практике.
Известно, что болезньотносится к группе мультифакториальных, при этом важную роль в ееформировании играет сочетание наследственной предрасположенности и факторовокружающей среды. Углубленное изучение этиологии и патогенеза ЮИА, вчастности его молекулярно-генетических основ, представляет на сегодняшнийдень большой научный и практический интерес. Понимание тонких механизмовразвития заболевания имеет важное значение в выявлении маркеров риска развитияЮИА и особенностей его течения, что играет ключевую роль в разработке методовпрофилактики возникновения болезни и предупреждении осложнений за счетперсонализированного подхода к ведению пациентов. Кроме того, выяснение ролиотдельных молекул в патогенезе ЮИА является неотъемлемым этапом присоздании новых мишеней для терапевтического воздействия.В данной работе была проведена оценка вклада полиморфизма геновмедиаторовиммунногоответавформированиепредрасположенностикювенильному идиопатическому артриту и его клиническим вариантам, а такжеосуществлен поиск генетических и иммунологических маркеров особенностейтечения и эффективности терапии заболевания.Для достижения поставленной цели были сформированы выборки пациентовс ЮИА и индивидов контрольной группы, проведены забор и обработкапервичного материала, а также оценка клинических показателей у пациентов сЮИА.
Далее был выполнен молекулярно-генетический анализ 12 полиморфныхлокусов, в том числе TNFA rs1800629 (-308G>A), LTA rs909253 (252A>G), IL1Brs16944 (-511C>T), IL2-IL21 rs6822844, IL2RA rs2104286, IL6 rs1800795 (-174G>C),IL10 rs1800872 (-592C>A), CTLA4 rs3087243, MIF rs755622 (-173G>C), NFKB1rs28362491 (-94I>D), PADI4 rs2240336, PTPN22 rs2476601 (1858G>A). Кроме того,было исследовано содержание цитокинов (TNFα, IL1β, IL6, IL10) в сывороткекрови, а также изучен уровень их спонтанной и митоген-индуцированной153продукции в культуре клеток цельной крови, полученной от пациентов с ЮИАпередназначениемиммуносупрессивнойтерапии(метотрексата).Назавершающем этапе были выполнены статистическая обработка и комплексныйанализ полученных данных, сформулированы выводы.Результаты проведенного исследования свидетельствуют о существенномвкладе полиморфизма генов медиаторов иммунного ответа и межгенныхвзаимодействий в формирование различий в предрасположенности к ЮИА уотдельных индивидов, а также о наличии полового диморфизма в патогенезезаболевания.Маркеры риска развития ЮИА были выявлены среди полиморфныхвариантов локусов TNFA rs1800629 (у девочек), LTA rs909253 (у мальчиков), IL2IL21 rs6822844 (у девочек), PTPN22 rs2476601 (у девочек), а также гаплотиповлокусов TNFA rs1800629 - LTA rs909253 (у мальчиков).
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
