Диссертация (1174297), страница 12
Текст из файла (страница 12)
albicans.(Рис. 17).596050401830202 3100S.aureusS.hominisM. catarralisS.warneriS.capitis94 2111 1S.epidermdisSt.viridansC. freundiiS.haemolyticusE.coli111M. nonliquefaciensC. pseudodiphtheriticumEnterobacter cloacaeC.albicansРисунок 17. Видовая принадлежность микроорганизмов, высеянных сослизистой носа больных атопическим дерматитом.Анализ интенсивности колонизации S. aureus слизистой оболочки переднихотделов носа показал, что у 11 (18,3%) больных АД наблюдался обильный рост(>100 колоний), у 34 (56,6%) – умеренный рост микроорганизма (10-100 колоний),у 14 (23,3%) детей – скудный рост (0-10 колоний).
(Рис. 18).7423%57%18%Обильный ростУмеренный рост2%Скудный ростРоста нетРисунок 18. Интенсивность обсемененности S. aureus слизистых оболочекпередних отделов носа больных атопическим дерматитом.Таким образом, бактериологическое исследование позволило выявитьвыраженное разнообразие микробного пейзажа как очагов пораженной кожи, так ислизистыхоболочекпереднихотделовноса,дополненноегрибковымкомпонентом.
Было определено тотальное доминирование S. aureus в колонизацииобоих экотопов, свидетельствующее о том, что он является ключевымбактериальным агентом, влияющим на течение АД.При анализе результатов бактериологического исследования материала,полученного с кожи здоровых детей, установлено носительство 5 видовмикроорганизмов, представляющих 3 бактериальных рода: Staphylococcus (S.aureus, S. hominis, Staphylococcus коагулазонегативный), Streptococcus (St. viridans)и Klebsiella (K.
pneumonia). (Рис. 19). Первое место по частоте колонизации кожиздоровых детей занимала группа коагулазоонегативных видов Staphylococcus,которая определялась у 20 (66,6%) здоровых детей. S. aureus был высеян от 10(33,3%) детей, тогда как S.
hominis – у 2 (6,6%) детей. St. viridans и K. pneumoniaопределялись на коже в единичных случаях (3,3%), соответственно.Микробный пейзаж слизистой оболочки передних носовых ходов у здоровыхдетей, был более разнообразным. На ряду с родами Staphylococcus и Streptococcus,определялись представители родов Klebsiella, Pseudomonas и Spingomonas. По75аналогии с поверхностью кожи лидирующее значение в колонизации слизистыхзанимали коагулазонегативные виды Staphylococcus, обнаруженные у 25 (83,3%)детей. Носительство S. aureus установлено у 14 (46,6%) детей.
St. viridans – у 4(13,3%). Тогда как, носительство Klebsiella pneumonia, Pseudomonas putida,Spingomonas paucimobilis было единичным (3,3%) явлением. (Рис. 19).ИНТАКТНАЯ КОЖА20СЛИЗИСТАЯ НОСА25252018201610141514121010826411451 120S.aureusS. coagulase negativeS.hominisSt.viridansK. pneumonia01S.aureusS. coagulase negativeK. pneumoniaP. putidaSt.viridansS. paucimobilisРисунок 19. Видовая принадлежность микробного пейзажа кожи и слизистойноса здоровых детей.При оценке интенсивности колонизации S. aureus кожи здоровых детей(Табл. 10), у 5 (16,6%) определялся умеренный и скудный рост, соотвественно. Всвою очередь, слизистая оболочка передних отделов носа была обильноколонизирована у 2 (6,6%) детей, умеренный рост наблюдался у 6 (20%), скудныйрост – у 6 (20%).
(Табл. 10)76Таблица 10Степень микробной обсемененности S. aureus кожи и слизистых оболочек носаздоровых детейИнтактная кожаСлизистая оболочкаИнтенсивность роста(N=30)S. aureusноса (N=30)N%N%Обильный рост0027%Умеренный рост516,5%620%Скудный рост516,5%620%Роста нет2067%1653%3.2.4 Анализ антибиотикочувствительности штаммов S. aureus, высеянных спораженной кожи и слизистой оболочки носа больных АД.Оценка чувствительности высеянных штаммов S.
aureus проводилась кантибактериальным препаратам следующих групп:• Аминогликозиды (гентамицин);• Пенициллины(пенициллин,ампициллин,ампициллин-сульбактам,амоксициллин-клавулановая кислота, оксациллин);• Амфениколы (хлорамфеникол);• Ансамицины (рифампицин);• Линкозамиды (клиндамицин);• Макролиды (эритромицин);• Оксазолидиноны (линезолид);• Сульфаниламиды (триметоприм-сульфометоксазол);• Тетрациклин;• Фторхинолоны (левофлоксацин, моксифлоксацин, ципрофлоксацин);• Цефалоспорины (цефазолин, цефокситин);• Другие (даптомицин, фузидовая кислота).77Определение антимикробной чувствительности штаммов S. aureus, высеянныхс пораженных кожных поверхностей проводилось у 56 детей с АД. (Табл.
11) Так,камоксициллин-клавулановойкислоте,даптомицину,левофлоксацину,линезолиду, оксациллину, цефтриаксону, цефокситину, фузидовой кислотеопределялась 100% чувствительность. Чувствительность менее 100% установленак моксифлоксацину (98,15%), цефазолину (97,15%), ампициллин-сульбактаму(96,4%), ципрофлоксацину (94,6%), триметоприм-сульфометоксазолу (92,6%),рифампину (88,6%). Чувствительность ниже 80% наблюдалась к гентамицину(79,5%), эритромицину (76%), хлорамфениколу (75,9%), тетрациклину (73%),клиндамицину (66,6%).
У всех исследованных штаммов отмечалась 100%устойчивость к пенициллину и ампициллину.Проведено определение чувствительности к антибактериальным препаратамштаммов S. aureus, полученных со слизистых оболочек передних отделов носа удетей с АД. (Табл. 11) Была определена 100% чувствительность к амоксициллинклавулановой кислоте, ампициллин-сульбактаму, даптомицину, левофлоксацину,линезолиду,оксациллину,цефокситину,фузидовойкислоте.Высокаячувствительность отмечалась к моксифлоксацину (97,7%), ципрофлоксацину(94,7%),цефазолину(96,8%),триметоприм-сульфометоксазолу(92,6%),рифампину (89,7%). Чувствительность менее 80% определялась к гентамицину(80%), эритромицину (73,6%), хлорамфениколу (73,1%), тетрациклину (72%),клиндамицину (64,2%).
Все обследованные штаммы демонстрировали 100%устойчивость к ампициллину и пенициллину, идентично штаммам с кожныхпокровов.Таблица 11.Чувствительность к антибактериальным препаратам S. aureus, высеянногокожи и слизистых оболочек носа больных АДАнтибактериальныйпрепаратЧувствительность Staphylococcus aureusИзоляты сИзоляты со слизистойпораженной кожиполости носа78N%N%2710024100Ампициллин0000Ампициллин-сульбактам2896,426100Гентамицин2779,52480Даптомицин4310044100Клиндамицин2066,61864,3Левофлоксацин2810026100Линезолид4210043100Моксифлоксацин5398,154397,7Оксациллин3910042100Пенициллин0000Рифампин3188,62689,7Тетрациклин35733672ТриметопримсульфометоксазолХлорамфеникол5092,65092,62275,91973,1Цефазолин3497,153096,8Цефокситин2410024100Цефтазидим0000Ципрофлоксацин3594,63694,7Фузидовая кислота1610016100Амоксициллин-клавулановаякислотаТаким образом, у обнаруженных штаммов S.
aureus, колонизировавших кожуислизистыеоболочкиносабольныхАД,былаопределенавысокаячувствительность к большинству антимикробных препаратов. Однако, к двумпрепаратам (ампициллину и пенициллину) установлена абсолютная устойчивость.Их не рекомендуется использовать в терапии стафилококковой инфекции.793.2.5 Анализ результатов молекулярно-генетических исследований изолятов,полученных от здоровых детей и детей с АД.Дальнейшим этапом исследования являлась детекция генов токсинов,обладающих свойствами суперантигенов. Для этого были проведены ПЦРисследования изолятов S. aureus, полученных из очагов кожных поражений (56)(Табл.
12) и слизистых оболочек передних отделов носа (59) (Табл. 13). Наосновании результатов ПЦР-исследования изолятов с поверхности кожныхпоражений, в 39 (69,6%) из них определялось не менее 1 гена тестируемыхтоксинов со свойствами суперантигенов (sea, seb, sec, sed, see, seg, sep, tst).Наиболее распространенным являлся ген seg, обнаруженный в 28 (50%) изолятах.Гены токсинов, кодирующие SEA, были обнаружены у 8 (14,2%) пациентов, SEB –у 3 (5,3%), SEC – у 6 (10,7%) и SEP – у 7 (12,5%).
Ген sed был идентифицирован в1,7% случаев. Ген see в этой группе не определялся. (Табл. 12)Таблица 12.Наличие генов токсинов со свойствами суперантигенов у S. aureus,выделенных с кожных покровов больных АД.ЧисловыделенныхЧисло изолятов, у которых обнаруженыSEA SEB5683SEC6SED SEE SEG1(14,2) (5,3) (10,7) (1,7)0гены токсиновне обнаруженыгены токсинов (%)изолятовЧисло изолятов,(%)SEPTSST-1-2871117(50)(12,5)(19,6)(30,3)Установлены гены одного токсина: seg – у 10 (17,8%) детей, sea – у 3 (5,3%), sep –у 2 (3,5%), tst – у 1 (1,7%); гены 2-х токсинов одновременно были обнаружены визолятах S. aureus, выделенных у 21 (37,5%) пациента, в том числе: seg+tst – у 8(14,2%), seg+sec – у 4 (7,1%), seg+sea – у 4 (7,1%), seb+sep – у 2 (3,5%), sep+tst – у2 (3,5%), seg+seb – у 1 (1,7%), sea+sec – у 1 (1,7%). У одного ребенка был выделен80штамм S.
aureus, который содержал одновременно гены 3-х токсинов seg+sec+sep.(Рис. 20, 21)seg18%Гены SAотсутствуют31%tst2%seg+sec+sep2%seg+sebsea+sec sep+tst2%2%4%seg+tst14%seg+sec7%sep seb+sep3%3%seg+sea7%sea5%Рисунок 20. Распределение генов экзотоксинов у изолятов S. aureus,полученных с пораженной кожи больных АД.Рисунок 21. Молекулярно-генетическое исследование генов токсинов сосвойствами суперантигенов S. aureus.81Таким образом, в 23 изолятах (41%) были определены штаммы S.
aureus,одновременного несущие гены двух и более токсинов, обладающих свойствамисуперантигенов.Были исследованы изоляты S. aureus, полученные со слизистых оболочекпередних отделов носа. (Табл. 13) В 43 (72,8%) изолятах были определены 1 и болеегенов токсинов со свойствами суперантигенов (sea, seb, sec, sed, see, seg, sep, tst).Самым распространенным являлся ген seg, обнаруженный у 33 (55,9%) пациентов.Ген tst определялся у 9 (15,2%) детей, гены sep и sec – у 8 (13,5%), соответственно.У 6 (10,1%) изолятов был идентифицирован ген sea, а seb – у 4 (6,7%).Таблица 13.Наличие генов токсинов со свойствами суперантигенов у S. aureus,выделенных со слизистых передних отделов носа больных АД.ЧисловыделенныхЧисло изолятов, у которых обнаруженыSEA SEB5964SECSED80(10,1) (6,7) (13,5)SEE SEG133гены токсиновне обнаруженыгены токсинов (%)изолятовЧисло изолятов,(%)SEPTSST-1-8916(15,2)(27,1)(1,7) (55,9) (13,5)Установлены гены одного токсина: seg – у 12 (20,3%) пациентов, sea – у 3(5,0%), sep – у 3 (5,0%), sec и tst – у 1 (1,6%), соответственно; гены 2-х токсиноводновременно: seg+tst – у 8 (13,5%) пациентов, seg+sec – у 6 (10,1%), seg+sea – у 2(3,3%), seb+sep – у 2 (3,3%), seg+sep – у 2 (3,3%), seg+seb – у 1 (1,7%); гены 3-хтоксинов: seg+sep+sec – у 1 (1,7%) пациента, seg+sea+seb – у 1 (1,7%).
(Рис. 23)82seg+tst14%seg20%seg+sec10%sea5%sep5%seg+sep3%Гены SAотсутствуют27%seg+sea3%seb+sep3%seg+sea+seb2%sec2%seg+sebtst2%2% seg+sec+sep2%Рисунок 23. Распределение генов экзотоксинов в изолятах S. aureus,полученных со слизистой носа больных АД.При молекулярно-генетическом исследовании изолятов с поверхностикожных покровов и слизистых оболочек носа гены лейкоцидина LukDEобнаружены в 45 (80,3%) и 44 (74,5%) случаев, соответственно.При исследовании изолятов, полученных с пораженной кожи и слизистойполости носа на предмет обнаружения генов кластера иммунного уклонения(CHIPS, SCIN, SAK), было установлено, что 52 (92,5%) изолята, полученных сочагов кожных поражений, несли ген scn, 49 (87,5%) – ген chp и 47 (83,9%) – генsak.
При исследовании изолятов со слизистой оболочки полости носа, в 55 (93,2%)из них обнаружено носительство гена scn, в 46 (77,9%) – гена chp и в 51 (86,4%) –гена sak. (Табл. 14).83Таблица 14.Наличие генов факторов уклонения S. aureus.Кластер иммунного уклоненияБольные АДЗдоровые детиТипГеныКожа(N)Слизистаяноса (N)Кожа(N)Слизистаяноса (N)Asak+chp+scn+sea63--Bsak+chp+scn313029Cchp+scn6421Dsak+scn+sea12--Esak+scn2743Fsak+chp+scn+sep57--Gsak+scn+sep11--При молекулярно-генетическом исследовании изолятов, полученных споверхности кожи и слизистых оболочек передних отделов носовых ходовздоровых детей, были получены следующие результаты.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
