Диссертация (1174248), страница 12
Текст из файла (страница 12)
Вчастности, концентрация вкДНК положительно коррелировала с показателямиСАД, степенью отеков, уровнем белка в моче и ЗРП. Отрицательнаякорреляционная связь была обнаружена между уровнем вкДНК и весом плода, атакже между уровнем вкДНК и сроком гестации. У пациенток с нормальнопротекающей беременностью концентрация вкДНК и клинические параметрыслабо коррелировали между собой.Таблица 14 – Корреляция Спирмена (Spearman Correlation) между клиническимипоказателями и содержанием мтДНК в образцах вкДНКСодержание мтДНК в образцах вкДНКВсе беременныеУсловно здоровыеПреэклампсияRRRВозраст0,100,080,09САД0,42-0,04-0,03ДАД0,320,23-0,08Отеки степень0,570,310,22Белок в моче0,560,360,30Вес плода-0,270,14-0,18Ст. гипотр.0,33–0,15Срок гестации-0,400,01-0,18Примечание: * – при p-значении менее 0,05Как видно из данных, приведенных в Таблице 14, в общей группе беременныхпациенток с осложненной и не осложненной беременностью была выявленастатистически значимая, положительная корреляционная связь между содержаниемвк мтДНК в плазме и показателями САД и ДАД, степенью отеков, уровнем белка вмоче, ЗРП.
Кроме того, в группе из всех обследованных была обнаружена65отрицательная корреляционная связь между содержанием вк мтДНК в плазме ивесом плода, а также между содержанием вк мтДНК в плазме и сроком гестации.Статистически значимая корреляционная связь между уровнем вк мтДНК в плазме иконцентрацией белка в моче была выявлена в группе пациенток с преэклампсией.У всех в общей массе беременных была также выявлена выраженнаястатистическизначимаяположительнаякорреляционнаясвязьмеждуинтегративным показателем «вк мтДНК / клет. мтДНК» и значениями САД иДАД, степенью отеков, уровнем белка в моче и степенью ЗРП.
Одновременно,статистически значимая отрицательная корреляционная связь (Таблица 15) былаобнаружена между интегративным показателем «вк мтДНК / клет. мтДНК» ивесом плода (R = -0,40; p = 0,005), а также между показателем «вк мтДНК / клет.мтДНК» и сроком гестации (R = -0,49; p < 0,001).Таблица 15 – Корреляция Спирмена (Spearman Correlation) между клиническимипоказателями и интегративным показателем «вк мтДНК / клет. мтДНК»Соотношение внеклеточная мтДНК / клеточная мтДНКВсе беременныеУсловно здоровыеПреэклампсияRRRВозраст0,120,150,06САД0,58-0,030,07ДАД0,440,23-0,05Отеки степень0,730,460,26Белок в моче0,640,460,25Вес плода-0,400,09-0,19Ст.
гипотр.0,37–0,10Срок гестации-0,49-0,02-0,17Примечание: * – при p-значении менее 0,05У беременных с преэклампсией показатель «вк мтДНК/клет. мтДНК» иклинические параметры слабо коррелировали между собой.Проведенный частотный анализ (см. Таблицу 16) выявил значительныеколебания изучаемых показателей, однако в большистве наблюдениях убеременных с преэклампсией они отличались от небеременных и здоровых.66Таблица 16 – Результаты частотного анализа исследуемых показателей погруппам наблюденийУсловно здоровые Умеренная преэклампсия Тяжелая преэклампсияКонцентрация вкДНК,нг/млНуклеазнаяактивность, ед./млвк мтДНКОтношение вк мтДНК/клет.
мтДНКПолученные34–250 (78,3%)251–503 (21,7%)0,8–6,9 (70%)7–14,8 (30%)23–250 (65,2%)251–549 (34,8%)0,08–0,60 (57,1%)0,61–1,64 (42,9%)результаты67–500 (64,7%)501–946,4 (35,3%)4–6,9 (18,8%)7–30,7 (81,2%)21–250 (40,0%)251–2510,1 (60,0%)0,11–0,60 (22,2%)0,61–13,35 (77,8%)показывают,589,3–1000 (40,9%)1001–11579,3 (59,1%)3,7–6,9 (16,7%)7–52,4 (83,3%)21–250 (22,7%)251–2181,4 (77,3%)0,09–0,60 (14,3%)0,61–13,22 (85,7%)чтоприпреэклампсии,сопровождающейся повышением артериального давления, отеками происходитповышение концентрации вкДНК и изменение ее характеристик, в частностиповышаетсясущественноколичествомитохондриальныхвозрастаютзначениякопийвинтегративныхсоставевкДНКпоказателейи«вкмтДНК/клет.мтДНК», что свидетельствует о повреждении митохондрий и выходепродуктов их деградации в периферическое русло.
Концентрация вкДНК,содержание митохондриальных фрагментов в ее составе, а также интегральныйпоказательвысококоррелировалисклиническимипараметрами,характеризующими состояние плода и матери.Следует отметить, что при индивидуальном анализе наших наблюдений убеременных с преэклампсией клиническая картина заболевания не всегдасовпадала с результатами исследования вкДНК. Так, при умеренной ПЭ и почтифизиологических колебаниях вкДНК (от 67 до 500 нг/мл) САД и ДАД превышалинормативные показатели у 14 из 22, уровень белка в моче у 13 из 22, отеки у 16 из22, задержка роста плода зарегистрирована у 4 из 22 беременных.
При колебанияхвкДНК от 500 до 1000 нг/мл САД и ДАД превышали физиологические параметрыу 6 из 13, белок в моче у 6 из 13, умеренные отеки наблюдались у 6 из 13,головная боль – у 5 из 13, ЗРП у 2 из 13 пациентов.67При тяжелой преэклампсии у 9 из 22 беременных концентрация вкДНКбыла от 589 до 1000 нг/мл, у остальных 13 превышала эту величину. У пациенток,имеющих в крови концентрацию вкДНК до 1000 нг/мл САД и ДАД превышалифизиологические параметры в 4 из 9, белок в моче – в 6 из 9, выраженные отеки –в 8 из 9, головная боль – в 3 из 9, ЗРП в 1 из 9 наблюдений. При концентрацияхвкДНК в крови беременных выше 1000 нг/мл САД и ДАД превышалифизиологические показатели в 10 из 13, белок в моче – в 10 из 13, выраженныеотеки в 11 из 13, головная боль – в 6 из 13, ЗРП – в 6 из 13 наблюдений.Полученные результаты вкДНК и клинические характеристики пациентовсвидетельствуют либо о гипердиагностике преэклампсии, либо о неизвестных ещекомпенсаторных возможностях у части наших беременных.В современной медицине хорошим тестом (маркером) является таковой,когда при сравнении 2 групп он не встречается в группе сравнения примерно в70%.
В наших исследованиях практически по всем параметрам таких наблюденийбыло большинство при сравнении с группой здоровых и беременных с умереннойпреэклампсиейиприсравнениипациентоксумереннойитяжелойпреэклампсией.Следует отметить, что у пациенток в 23% при умеренной и в 36% притяжелой преэклампсии новорожденные родились с ЗРП различной степенитяжести. Тяжесть ЗРП при умеренной форме ПЭ в 4 наблюдениях составила 1-яст., в 3 – 2-я ст., в 1 – 3-я ст.
При тяжелой форме ПЭ наблюдалось болеевыраженное внутриутробное страдание плодов: 1-я ст. ЗРП зарегистрирована у 2,2-я ст. – у 5, 3-я ст. – у 1 из родильниц. При этом в крови пациенток с умереннойПЭ в 4 из 8 наблюдений концентрация вкДНК колебалась от 611 до 946 нг/мл,нуклеазная активность от 11,1 до 21,6 ед./мл, а количество повторов мтДНК всоставе вкДНК уже в 5 из 8 наблюдений превышало физиологическое значение иколебалось 370 до 1169.
При тяжелой ПЭ в крови этих беременных вкДНКпревышала 1000 нг/мл, нуклеазная активность колебалась в 6 наблюдениях от 9,5до 19,9 ед./мл, а количество копий мтДНК в составе вкДНК уже в 7 из 8наблюдений превышало физиологические значения, колеблясь 257 до 1342 копий.68Клеточная мтДНК в составе вкДНК при этом существенно не менялась.Следовательно, изменения, обнаруженные нами при исследовании вкДНК еесостав и нуклеазная активность, в большей мере были связаны тяжестью ПЭ, чемвыраженностью ЗРП.Индивидуальный анализ тяжелых форм преэклампсии показал, что прикритических формах происходили самые выраженные изменения вкДНК и еехарактеристик. Так, в группе беременных с преэклампсией тяжелой степени(критическая форма) заболевания была выявлена в 6 наблюдениях.
У этихбеременных в крови выявлена концентрация вкДНК от 1595 до 11579 нг/мл,нуклеазная активность от 9,5 до 28,9 ед./мл, вк мтДНК от 257 до 938 повторов,клет. мтДНК от 212 до 348 повторов, отношение вк мтДНК / клет. мтДНК от 2,83до 4,64. Сравнение полученных результатов вкДНК с данными беременных прикритической форме преэклампсии в 5 из 6 наблюдений не выявило перекрестаданных вкДНК и ее характеристик с таковыми у беременных с преэклампсиейумеренной и тяжелой формы.Таким образом проведенные исследования показали, что при тяжелойпреэклампсиивыявляютсяпороговыезначениямолекулярно-биологическихфакторов: концентрация вкДНК выше 1000 нг/мл, нуклеазная активность выше 10ед./мл, вк мтДНК более 250 повторов, отношение вк мтДНК / клет. мтДНК более 1,64.693.3. Изменение концентрации циркулирующей внеклеточной ДНК и еехарактеристик в крови при плацентарной недостаточностии задержке роста плодаДо настоящего времени патогенез развития плацентарной недостаточностиостается невыясненным.
По данным [Sur Chowdhury C., Hahn S., Hasler P. et al.,2016; Ermakov A. V., Kostyuk S. V., Konkova M. S. et. al., 2016; Muñoz-HernándezR., Medrano-Campillo P., Miranda M. L. et al., 2017.] она развивается в результатенекоторой иммунной маладаптации между матерью и плодом в течение самыхпервых недель беременности, приводя к развитию бессимптомных нарушений иотелонение в плодово-материнских иммунных взаимодействий в стенке матки,которые приводят к артериальной инвазии трофобластными клетками.
Этовызывает преобразование спиральных артерий и впоследствии ухудшаетплацентарную перфузию. Хроническая гипоксия вызывает оксидантный стрессткани и увеличивают уровень плацентарного апоптоза и некроза [Hahn S., GiaglisS., Buser A., 2014; Nadeau-Vallée M., Obari D., Palacios J. et al., 2016]. Клиническиенарушения возникают тогда, когда материнские сосудистые и иммунные системыне могут больше взаимодействовать с увеличенной потерей плацентарнымобразом аберрантных провоспалительных, антиангиогенных факторов, приводя ксистемной дисфункции эндотелиальной клетки и высокой воспалительнойреакции [Urbanova M., Plzak J., Strnad H. et al., 2010; Hahn S., Giaglis S., Buser A. etal., 2014; Nadeau-Vallée M., Obari D., Palacios J.
et al., 2016]. Поэтому, длявыяснения критического состояния плаценты и плода, нами проанализированы 3группы пациенток примерно одинакового возраста (22–40 лет), проживающих в г.Москве (РФ) в одинаковых социальных условиях. Группа 1 – небеременные,практически здоровые пациентки (N = 40) (22–40 лет), представляла студенток иординаторов медицинского учреждения (волонтеров); группа 2 – беременные снормально протекающей беременностью сроком более 37 недель (N = 40),которые родили здоровых детей без признаков гипоксии и ЗРП; группа 3 –пациенткисплацентарнаяпроблемнойбеременностью,недостаточность,ЗРП,склиническимихроническаядиагнозами:гипоксияплода,70несостоятельный рубец на матке; сроком более 30 недель, родившие детей спризнаками ЗРП (N = 40).
80 рожениц были обследованы в момент родов.Проведенные исследования показали, что во второй группе наблюдений(пациентки с нормально протекающей беременностью) оценка сердечнойдеятельности плода по шкале Фишера колебалась от 7 до 10 баллов, объемныйкровоток в аорте от 180 до 260 мл/мин, в вене пуповины от 86 до 140 мл/мин накг. В 3-й группе регистрировались в 28 из 40 наблюдений снижениефункционального состояния плода по шкале Фишера от 4 до 7 баллов, объемныйкровоток в аорте плода от 120 до 174 мл/мин, в вене пуповины от 60 до 86 мл/минна кг.Характеристика пациенток с ЗРП I–III степени тяжести представлена вТаблице 19.Таблица 19 – Характеристика пациенток с ЗРППациентки сЗРП I ст.N = 16Пациентки с ЗРПII ст.N = 13Пациентки с ЗРП III ст.N = 11р1150126 ÷ 1808064 ÷ 86–1 (7,7%)1,00006 (54,5%) 0,01240,0233–3 (23,1%)0,22284 (36,3%) 0,09020,659187÷94038÷4127902630÷30304847 ÷ 516,56÷73836÷4125202350÷26504746 ÷ 50Кровоток в пуповинной венеРеверсивный кровоток вартерии пуповины или аортеПреждевременные родыСрок беременности (недели)Вес плода (г)Рост плода (см)0,00020,00010,00010,03970,00010,02211220,0001120÷142640,000160÷68р2220154÷25411082÷120Кровоток в аортеБаллы по шкале Фишерар154,5÷63730÷401720600÷22704329÷470,00050,00020,00010,00020,00080,00840,0001 < 0,00010,00020,0010Наиболее значительные изменения функционального состояния плода былизарегистрированы у пациенток при ЗРП II и III степени.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
