Диссертация (1174248), страница 11
Текст из файла (страница 11)
Кроме того, вес плодапри УЗ исследовании у пациенток со сроком гестации менее 37 недель был57значимо ниже соответствующего показателя в группе пациенток со срокомгестации более 37 недель.В группе пациенток без признаков преэклампсии и плацентарнойнедостаточности со сроком гестации более 37 недель были зарегистрированызначительные изменения концентрации и состава вкДНК по сравнению с группойбеременных со сроком гестации более 37 недель. У пациенток группы «более 37недель» концентрация вкДНК варьировала от 34,0 до 503 нг/мл (медиана 143нг/мл; р = 0,0006). У пациенток со сроком гестации менее 37 недель уровеньвкДНК плазмы был ниже. Значения данного показатели варьировали от 34,0 до270,0 нг/мл, значение медианы составило 53 нг/мл (р = 0,2016).Исследование активности ДНКазы I в образцах плазмы показало, что прибеременности менее 37 недель активность ДНКазы I варьировала от 0,8 до 14,8U/мл, а значение медианы составляло 3,4 U/мл.
У пациенток со сроком гестацииболее 37 недель активность ДНКазы I колебалась между 0,8 и 14,3 U/мл, азначение медианы не превышало 2, 4 U/мл (р = 0,0845).Концентрация вкДНК в группе пациенток со сроком гестации менее 37недель достигала максимальных значений, активность ДНКазы I, основнойэндонуклеазы крови, не отличалась от соответствующего показателя в группездоровых. У пациенток со сроком гестации более 37 недель уровень активностиДНКазы I был значимо выше, чем у пациенток с доношенной беременностью. Уэтих пациенток активность ДНКазы I варьировала от 3,4 до 14,3 ед./мл, а значениемедианы составляло 7,1 ед./мл (р = 0,0299).Полученные результаты показывают, что у пациенток со срокомбеременности менее 37 недель наблюдаются наиболее выраженные измененияконцентрации вкДНК и ее характеристик (см.
Таблицу 9).По данным литературы [Wei Ve, Xiaojun Tang, Chu Liu et al., 2017] вкмтДНК – число копий, повторов митохондриальной ДНК в составе вкДНК,определенные методом ПЦР составляет 168,8±32 копий в микролитре. В нашихисследованирях вк мтДНК в норме колеблется 100–250 копий в микролитре, посвоему строению напоминает плодную ДНК, обладает мощным стимулирующим58эффектом, может провоцировать прерывание беременности, клет клет. мтДНК –число копий, повторов клеточной лейкоцитарной митохондриальной ДНК всоставе внеклеточной, свидетельствует о повреждении либо гибели лейкоцитов,вк мтДНК /клет.мтДНК – интегративный показатель, свидетельствующий онакоплении митохондриальной ДНК в кровотоке. В наших исследованиях (см.Таблицу 9) не было зарегистрировано существенных различий мтДНК междупоказателями беременных со сроком гестации менее 37 и более 37 недель.Следует отметить, что пациентки двух групп с различными сроками гестациистатистически значимо не отличались по количеству митохондриальных повторовв плазме, а также по значениям интегративных показателей «вк мтДНК/клет.мтДНК».Таблица 9 – Характеристики клеточной и внеклеточной ДНК у пациенток сразличными сроками гестации у здоровых беременныхЗдоровые (n=70)≤ 37 недельM±m> 37 недельM±m78,4±3,0953,7±11,14140,6±16,4,4±2,72,1±1,26,8±0,9вк мтДНК140,82±23,18153,5±28,7120,7±31,7клет.
мтДНК238,39±18,02198,9±7,9257,4±10,00,56±0,100,77±0,20,52±0,4ПоказателиКонцентрация вкДНК, нг/млНукл акт, ед./млвк мтДНК / клет. мтДНКПримечание: * – при p-значении менее 0,05. Курсивом выделены показатели, отличие которыхот группы здоровых – незначимы. Различия по всем параметрам в группах с доношенной инедоношенной беременностью – незначимыЧастотный анализ показал, что вкДНК в группе здоровых беременных в78,3% наблюдений не превышала 250 нг/мл, а ДНКза-1 – 7,1 ед/мл. КоличествомтДНК в составе вкДНК не превышало 250 копий в 66%, клет.
мтДНК в 74%, аотношение вк мтДНК/ клет. мтДНК не превышало 1 в 13% и свидетельствовало офизиологическом состоянии пациенток.Таким образом проведенные исследования показали, что у небеременныхконцентрация вкДНК варьировала от 11 до 113 нг/мл (медиана 79 нг/мл). Принормальной беременности в последнем триместре концентрация вкДНК59колеблется (за исключением 1 наблюдения в 503 нг/мл) от 2 до 347 нг/мл(медиана 71 нг/мл) и свидетельствовала о невысоком уровне апоптоза.Следовательно, за физиологический уровень вкДНК здоровых беременныхследует принимать значения от 2 до 350 нг/мл. Согласно критерию Манна –Уитни концентрация вкДНК здоровых небеременных и беременных достоверноне отличаются между собой (p > 0.05). Физиологический уровень (более 70%наблюдений) активности ДНКзы-1 не превышает 7,1 ед./мл, количество повторовмтДНК в составе вкДНК не превышает 250 копий.603.2.
Изменение концентрации циркулирующей внеклеточной ДНКи ее характеристик в крови при преэклампсииВ соответствии с целью и задачами исследования среди обследованныхпациенток ретроспективно были отобраны беременные с ПЭ. Критериямипостановки диагноза послужили наличие артериальной гипертензии САД ≥ 140и/или ДАД ≥ 90 мм рт. ст.
и протеинурии ≥ 0,3 г/л в суточной пробе мочи после20 недель беременности. При таком распределении пациенток мы моглианализировать полные данные 49 из 57 беременных с преэклампсией и 40пациенток с нормально протекающей беременностью.Таблица 10 – Характеристика обследованных беременныхУсловно здоровые беременные Беременные с преэклампсиейВозраст32,0±0,932,6±0,8САД116,5±1,3139,9±1,6ДАД73,5±1,587,7±1,4Отеки (степень)0,1±0,11,8±0,1Белок в моче0,1±0,011,0±0,23485,4±88,32896,9±152,900,7±0,1Вес плода после рожденияСт.
гипотр. плодаБеременность < 35 нед.1 из 3023 из 49Примечание: * – при p-значении менее 0,05. Курсивом выделены показатели, отличиекоторых от группы здоровых – незначимы. САД – систолическое артериальное давление.ДАД – диастолическое артериальное давлениеДля исключения случайного характера появления общеизвестных признаковПЭ у современных больных при развитии болезни была проведена статистическаяобработкаклиническихпризнаковсиспользованиемнепараметрическогокритерия U Манна – Уитни.Как видно из приведенных данных, клинические показатели пациенток спреэклампсией существенно отличались от параметров в группе пациенток снормально протекающей беременностью. Так, пациентки с преэклампсиейдемонстрировали повышенные показатели САД и ДАД, высокий уровень белка вмоче, а также наличие выраженных отеков.
Приблизительно половину пациентокс преэклампсией обследовали при сроке гестации не превышающем 35 недель. ВТаблице 11 представлены результаты исследования корреляционной связи между61клиническими параметрами всех беременных, свидетельствующие о наличиипреэклампсии у части пациенток и хорошей зависимости между различнымипризнаками болезни, исключающими случайные появления. В биологии считаютудовлетворительной корреляцией тогда, когда показатель R – коэффициенткорреляции Спирмена превышает 0,3.Таблица 11 – Корреляционныйобследованные беременные)САДСАДанализклиническихпараметров(всеДАДОтекистепеньБелок вмочеВес плодаСт.гипотр.Срокгестации0,750,790,66-0,300,33-0,410,610,50-0,270,300,260,72-0,400,44-0,50-0,450,590,36-0,790,68ДАД0,75Отеки степень0,790,61Белок в моче0,660,500,72Вес плода-0,30-0,27-0,40-0,45Ст.
гипотр.0,330,300,440,59-0,79Срок гестации-0,410,26-0,50-0,360,680,45-0,45Примечание: * – при p-значении менее 0,05Как видно из приведенных данных, была обнаружена выраженнаястатистически значимая прямая корреляционная связь между показателями САДи ДАД, степенью отеков, концентрацией белка в моче и степенью ЗРП. Обращаетна себя внимание наличие обратной корреляционной связи между срокомгестации и показателями САД, степенью отеков и концентрации белка в моче.Результаты исследования характеристик внеклеточной клеточной ДНК упациентокснормальнопротекающейбеременностьюипациентокспреэклампсией выявили специфические изменения вкДНК, которые представленыв Таблице 12.У пациенток с преэклампсией независимо от срока гестации было выявленоповышенное содержание мтДНК в составе вкДНК, свидетельствующее оапоптозе. Аналогичные данные были получены для интегративных показателей62«вкмтДНК/клет.мтДНК»,значениямедианкоторыхупациентокспреэклампсией были существенно выше, чем в группе здоровых беременных.Таблица 12 – Характеристики клеточной и внеклеточной ДНК у пациенток спреэклампсией и у здоровых беременныхУсловно здоровыебеременные (n=70)Беременные спреэклампсией (n=57)78,4±3,091133,45±321,234,4±2,715,42±1,44вк мтДНК число копий/микролитре140,82±23,18550,39±74,12клет.
мтДНК числокопий/микролитре238,39±18,02201,37±6,300,56±0,103,12±0,45Концентрация вкДНК нг/млНукл акт, ед./млвк мтДНК / клет. мтДНКПримечание: * – при значении p менее 0,05. Клеточную ДНК выделяли из клеток крови, вкДНК выделяти из образцов плазмы беременных, вкДНК-внеклеточная ДНК. вк мтДНК –митохондриальная ДНК в составе вкДНК. мтДНК – митохондриальная ДНК в составеклеточной ДНКИсследование количества митохондриальных копий в составе клеточнойДНК (выделена из клеток крови – лейкоцитов) не выявило статистическизначимых различий между группой пациенток с преэклампсией и группой снормально протекающей беременностью, свидетельствующие о целостностиклеточныхядер.Вгруппепациентокспреэклампсиейбылитакжезарегистрированы значительные изменения концентрации и состава вкДНК посравнению с группой условно здоровых.
При нормальной беременностиконцентрация вкДНК варьировала от 2,0 до 347 нг/мл (медиана 78,4 нг/мл). Упациенток с преэклампсией концентрация вкДНК варьировала от 67,0 до 11579,3нг/мл (медиана 589,3 нг/мл; р = 0,001). В соответствии с повышением общегоуровня вкДНК в кровотоке, у пациенток с преэклампсией было обнаруженостатистически значимое повышение активности ДНКазы I в образцах плазмы.При условно физиологической беременности (здоровые беременные) активностьДНКазы I варьировала от 0,8 до 14,8 ед./мл (медиана 4 ед./мл), а прибеременности, осложненной преэклампсией ‒ от 3,7 до 52,4 ед./мл (медиана 12,6ед./мл; р = 0,0301).63Кроме того, у пациенток с преэклампсией было выявлено повышенноесодержание мтДНК копий в составе вкДНК. Так, значения медиан количествакопий мтДНК в группе с преэклампсией составили, соответственно, 394,0 у.е.против 96,7 у.е.
в группе здоровых (оба р < 0,0001). При этом, чем вышеобнаруживалась концентрация вкДНК в крови пациенток, тем больше в нейрегистрировалось повторов вк мтДНК. Аналогичные данные были получены дляинтегративных показателей «вк мтДНК / клет. мтДНК», значения медиан которыху пациенток с преэклампсией составляли, соответственно, 2,41 против 0,38 вгруппе пациенток с не осложненной беременностью (оба р < 0,0001) исвидетельствовали, по крайней мере, о повреждении нейтрофильных лейкоцитов.У пациенток с тяжелой ПЭ количество повторов мтДНК в составе вкДНКвозрастало более чем 78% от 400 до 2182 копий.В Таблицах 13, 14 представлены результаты исследования корреляционнойзависимости между характеристиками вкДНК и клиническими параметрами.Таблица 13 – Корреляция Спирмена (Spearman Correlation) между клиническимипоказателями и концентрацией вкДНККонцентрация вкДНК в образцах плазмыВсе беременныеУсловно здоровыеПреэклампсияRRRВозраст-0,02-0,280,10САД0,320,110,12ДАД0,160,12-0,09Отеки степень0,390,100,30Белок в моче0,390,020,33Вес плода-0,400,19-0,56Ст.
гипотр.0,40–0,42Срок гестации-0,320,14-0,24Примечание: * – при p-значении менее 0,05Как видно из данных, приведенных в Таблице 13, в группе пациенток спреэклампсией была выявлена умеренно выраженная, но статистически значимая,положительная корреляционная связь между концентрацией вкДНК и уровнем64белка в моче (R = 0,33; p = 0,023), степенью отеков (R = 0,30; p = 0,034) и ЗРПR = 0,42; p = 0,002). Кроме того, у пациенток с преэклампсией была обнаруженавыраженная отрицательная корреляция между концентрацией вкДНК и весомплода (R = -0,56; p = 0,003).Статистически значимая корреляционная связь между уровнем вкДНК иклиническими параметрами была выявлена для всех обследованных пациенток.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
