Диссертация (1174248), страница 15
Текст из файла (страница 15)
A., Redman C.W., 1994] при эклампсии показало, что у 38% беременных приступы развились дотого, как появились и были диагностированы протеинурия и артериальнаягипертензия. К «атипической преэклампсии» относят наблюдения с отсутствиемодного или более симптомов [Sibai B. M., Stella C. L., 2009].82В последние годы, с целью диагностики хронических полиорганныхнарушений,сталииспользоватьвкачестведополнительныхпризнаковповреждения тканей исследование протеом, ДНК и других нуклеотидов.Обнаружено повышение вкДНК при аутоиммунных заболеваниях [Козлов В. А.,2013; Galeazzi M., Morozzi G., Piccini M. et al., 2003; Leon S.
A., Revach M., EhrlichG. E. et al., 1981], остром инфаркте миокарда [Destouni A., Vrettou C., Antonatos D.et al., 2009], у больных, перенесших острый инсульт [Rainer T. H., Wong L. K. S.,Lam W. et al., 2003; Lam N Y., Rainer T. H., Wong L. K. et al., 2006, N 68, p. 71–78],в онкологии [Васильева И. Н, Беспалов В. Г., 2013; Dorval P., Laurent, 2010].В акушерстве имеется небольшое количество работ, в которых показано,что вкДНК полезна в диагностике преэклампсии и плацентарной недостаточности[Логутова Л. С., и др., 2012; Баев О. Р., 2018]. В этом случае необходимоопределять не конкретный мутантный ген, а общую концентрацию вкДНК вматеринской крови. Основным источником вкДНК плода в крови матери считаютгибнущие в результате некроза или апоптоза клеток плаценты [Smid M., 2011].Обнаружена высокая корреляция между концентрацией в плазме материпоследовательностей материнского генома и вкДНК плода [Lo Y. M., 1999].
ВакушерскойпрактикерольвкДНК иеехарактеристиквдиагностикеполиорганных системных заболеваний, до настоящего времени мало изучена, арезультаты исследований противоречивы.Поэтому целью исследования явилось повышение качества диагностикитяжелых форм преэклапсии и плацентарной недостаточностиво времябеременности с помощью внеклеточной ДНК и ее характеристик.В соответствии с поставленной целью было обследовано 207 пациенток ввозрасте 22–40 лет, проживающих в г. Москве (РФ) в одинаковых социальныхусловиях.
Группа 1 – небеременные, здоровые (N = 40), представляла студенток иординаторов медицинского учреждения (волонтеров); группа 2 – пациентки снормально протекающей беременностью (срок гестации более 37 недель; N =70–здоровые), которые родили здоровых детей без признаков гипоксии и ЗРП и нестрадали преэклампсией; 3-ю группу составили (N = 57) беременные с83преэклампсией, у которых в 35 наблюдениях была умеренная и в 22 наблюденияхпреэклампсия тяжелой формы (в 6 наблюдениях – критическая форма). У пациентокс преэклампсией срок беременности при исследовании составлял до 36 недель у 23,больше 36 недель – у 34; группа 4 – пациентки с проблемной беременностью, склиническими диагнозами: плацентарная недостаточность, ЗРП, хроническаягипоксия плода, несостоятельный рубец на матке (срок гестации более 30 недель,N = 40).Проведенные исследования показали, что при нормальной беременности непроисходит заметных изменений в организме матери и плода в виде повышенногораспада клеток – апоптоза.
У небеременных концентрация вкДНК варьировала от11 до 113 нг/мл (медиана 79 нг/мл). При нормальной беременности перед родамиконцентрация вкДНК колеблется от 2 до 241 нг/мл (медиана 71 нг/мл) исвидетельствовала о невысоком уровне апоптоза. При дополнительном введенииданных 34 пациенток, обследованных в сроки 24-36 нед., физиологическийуровень вкДНК у беременных составил от 2 до 350 нг/мл. Согласно критериюМанна – Уитни выборки здоровых небеременных и беременных достоверно неотличаются между собой (p > 0,05). Активность вк ДНК-казы 1 не превышает 6,1U/мл.Исследованиятакжепоказали,чтоконцентрациявкДНКиеехарактеристики имеют отрицательную корреляционную связь со срокомбеременности. Учитывая то, что в последующих наших исследованиях из-затяжести преэклампсии и плацентарной недостаточности беременность прерывалираньше срока путем кесарева сечения, нам представлялось целесообразнымотдельно рассмотреть показатели пациенток, обследованных в разные сроки.Сравнениепациентоксразличнымисрокамигестациивыявилонезначительные в абсолютном выражении, но статистически значимые различияпо возрасту и показателям ДАД.
Кроме того, вес плода при УЗ исследовании упациентоксосрокомгестациименее37недельбылзначимонижесоответствующего показателя в группе пациенток со сроком гестации более 37недель.84В группе пациенток, обследованных при сроках гестации менее 37 недель,были зарегистрированы изменения концентрации и состава вкДНК по сравнениюс группой беременных с доношенной беременностью. У пациенток группы «менее37 недель» концентрация вкДНК варьировала от 34,0 до 503 нг/мл (медиана 143нг/мл; р = 0,0006).
У пациенток со сроком гестации более 37 недель уровеньвкДНК плазмы был существенно ниже. Значения данного показатели варьировалиот 34,0 до 270,0 нг/мл, значение медианы составило 53 нг/мл (р = 0,2016).Исследование активности ДНКазы I в образцах плазмы показало, что прибеременности менее 37 недель активность ДНКазы I варьировала от 0,8 до 14,8U/мл, а значение медианы составляло 3,4 U/мл. У пациенток со сроком гестацииболее 37 недель активность ДНКазы I колебалась между 0,8 и 14,3 U/мл, азначение медианы не превышало 2, 4 U/мл (р = 0,0845).Концентрация вкДНК в группе пациенток со сроком гестации менее 37недель достигали максимальных значений, активность ДНКазы I, основнойэндонуклеазы крови, не отличалась от соответствующего показателя в группездоровых.
У пациенток со сроком гестации более 37 недель уровень активностиДНКазы I был значимо выше, чем у пациенток с доношенной беременностью. Уэтих пациенток активность ДНКазы I варьировала от 3,4 до 14,3 ед./мл, а значениемедианы составляло 7,1 ед./мл (р = 0,0299).Полученные результаты показывают, что у пациенток со срокомбеременности менее 37 недель наблюдаются более выраженные измененияконцентрации вкДНК и ее характеристик (см. Рисунок 12).В наших исследованиях (см. Рисунок 12) не было зарегистрированосущественныхразличиймтДНКмеждупоказателямибеременныхсфизиологической беременностью и пациенток со сроком беременности менее 37 иболее 37 недель.
Следует отметить, что пациентки двух групп с различнымисроками гестации статистически значимо не отличались по количествумитохондриальных повторов в плазме, а также по значениям интегративныхпоказателей «вк мтДНК / клет. мтДНК».85Примечание: Клеточную ДНК выделяли из клеток крови, вкДНК выделяли из образцов плазмыбеременных, вк мтДНК – митохондриальная ДНК в составе вкДНК; мтДНК –митохондриальная ДНК в составе клеточной ДНКРисунок 12 – Характеристики клеточной и внеклеточной ДНК у пациенток сразличными сроками гестации у здоровых беременныхЧастотный анализ показал, что вкДНК в группе здоровых беременных в78,3% наблюдений не превышала 250 нг/мл, а ДНКза-1 – 7,1 ед./мл.
Количествоповторов мтДНК в составе вкДНК не превышало 250 копий в 87%, клет. мтДНК в74%, а отношение вк мтДНК / клет. мтДНК не превышало 1 в 13% исвидетельствовало о физиологическом состоянии пациенток.Таким образом, проведенные исследования показали, что у небеременныхконцентрация вкДНК варьировала от 11 до 123 нг/мл (медиана 76 нг/мл). Принормальной беременности концентрация вкДНК колеблется (за исключением 1наблюдения в 503 нг/мл) от 2 до 347 нг/мл (медиана 78 нг/мл) исвидетельствовала о невысоком уровне апоптоза.
Физиологический уровеньвкДНК у беременных составлял от 2 до 350 нг/мл. Согласно критерию Манна –Уитни концентрация вкДНК здоровых небеременных и беременных достоверноне отличаются между собой (p > 0,05). Физиологический уровень (более 70%наблюдений) активности ДНКзы-1 не превышает 7,1 ед./мл, количество повторовмтДНК в составе вкДНК не превышает 250 копий.86В соответствии с целью и задачами исследования среди обследованныхпациенток ретроспективно были отобраны беременные с ПЭ. Для исключенияслучайного характера появления общеизвестных признаков ПЭ у современныхбольных при развитии болезни была проведена статистическая обработкаклинических признаков с использованием непараметрического критерия UМанна – Уитни.Условно здоровые беременныеВес плода послерожденияБеременные с преэклампсиейВозраст100%90%80%70%60%50%40%30%20%10%0%Белок в мочеСАДДАДОтеки (степень)Примечание: САД – систолическое артериальное давление; ДАД – диастолическоеартериальное давлениеРисунок 13 – Характеристика обследованных беременныхКак видно из приведенных данных на Рисунке 13, клинические показателипациенток с преэклампсией существенно отличались от параметров в группепациенток с нормально протекающей беременностью.
Так, пациентки спреэклампсией демонстрировали повышенные показатели САД и ДАД, высокийуровень белка в моче, а также наличие выраженных отеков. Приблизительно уполовины пациенток с преэклампсией срок гестации не превышал 35 недель.87На Рисунке 14 представлены результаты исследования корреляционнойсвязи между клиническими параметрами всех беременных, свидетельствующие оналичии преэклампсии у части пациенток и хорошей зависимости междуразличными признаками болезни, исключающими случайные появления.
Каквидно из приведенных данных, была обнаружена выраженная статистическизначимая прямая корреляционная связь между показателями САД и ДАД,степенью отеков, концентрацией белка в моче и степенью ЗРП. Обращает на себявнимание наличие обратной корреляционной связи между сроком гестации ипоказателями САД, степенью отеков и концентрации белка в моче.САДСАДДАДОтекистепеньБелок вмочеВесплодаСт.гипотр.Срокгестации0,750,790,66-0,30,33-0,410,610,5-0,270,30,260,72-0,40,44-0,5-0,450,590,36-0,790,68ДАД0,75Отеки степень0,790,61Белок в моче0,660,50,72Вес плода-0,3-0,27-0,4-0,45Ст.
гипотр.0,330,30,440,59-0,79Срок гестации-0,410,26-0,5-0,360,680,45-0,45Рисунок 14 – Корреляционный анализ клинических параметров (всеобследованные беременные)Результаты исследования характеристик внеклеточной и клеточной ДНК упациентокснормальнопротекающейбеременностьюипациентокспреэклампсией выявили специфические изменения вкДНК, которые представленына Рисунке 16.У пациенток с преэклампсией независимо от срока гестации было выявленоповышенное содержание мтДНК в составе вкДНК. Аналогичные данные былиполучены для интегративных показателей «вк мтДНК / клет.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
