Диссертация (1174225), страница 20
Текст из файла (страница 20)
Вероятно, чем «старше» киста, тем более активен сточки зрения окислительных свойств продукт распада гемоглобина.0,8Iхл *10³ имп/с0,60,40,20Время, с50150250350450550Рис. 2.12. Хемилюминограммы содержимого эндометриодных кист различногоразмера в системе с фосфолипидами и кумарином С-334, концентрация гемовогожелеза во всех пробах равна 550 мкмоль/л. Кисты размером 2 см (нижняя кривая), 4 см (средняя кривая) и 7 см (верхняя кривая).108Таким образом, содержимое кисты является сильным прооксидантом (напорядок сильнее гемоглобина), способным окислять липиды и фосфолипиды,который может вызвать в псевдокапсуле свободно-радикальные повреждения иинициировать окислительный стресс.О высокой концентрации свободного железа в содержимом эндометриоидной кисты превышающем 100 нмоль/л сообщается и другими авторами [368].Кроме того, в содержимом кисты были обнаружены и другие специфические факторы, ассоциированные с окислительным стрессом: повышение уровня лактозодегидрогеназы (маркер повреждения тканей), АФК, продуктов ПОЛ и 8-OHdG [220,368].
Высокая прооксидантная активность содержимого эндометриомы подтверждает предположение о существенно более важной роли окислительного стрессав повреждении окружающей ткани яичника по сравнению с другими типами кист.Главным вопросом остается степень проницаемости стенки кисты для определенных элементов содержимого эндометриоидной кисты, способных оказыватьтоксическое действие на окружающие ткани и возможность продукции свободных радикалов эктопическим эндометрием, выстилающим эндометриодную кисту. Для решения этой задачи на следующем этапе была оценена радикалпродуцирующая способность стенки эндометриодной кисты. Было изучено 38 образцов ткани.
В течение первых нескольких минут эксперимента изучалась собственная радикал-продуцирующая способность (I0) стенки эндометриодной кисты, которая составила I0=0,17 (0,09-0,41) *103 имп/с. При добавлении донораэлектронов НАДН интенсивность хемилюминесценции IНАДН стенки эндометриодной кисты значительно возрастала и составляла IНАДН =2,8 (2,1-4,3) *103 имп/с .Ранее показано, что люцигенин-активированная хемилюминесценция тканей обусловлена супероксидным анион-радикалом, продуцируемым в митохондриях [52].Избыточная продукция супероксидного анион-радикала ведет к развитию окислительного стресса в клетке, повреждению митохондриальной ДНК и апоптозу. Вприсутствии НАДН люцигениновое свечение IНАДН обусловлено работой НАДНзависимой цитохром b5-редуктазы, локализованной на микросомальной дыхательной цепи № 2 и на внешней мембране митохондрий [101].
НАДН-зависимая109цитохром-b5-редуктаза или метгемоглобин-редуктаза - это флавопротеин, известный своей способностью переносить электроны из своего домена НАДН через небольшой гемовый белок цитохром-b5 в конечный акцептор электронов [305]. Этотфермент участвует во множестве метаболических процессов, в частности, поддерживает внутриклеточный антиоксидантный статус за счет восстановления коэнзима Q10 и формирования первичного антиоксидантного барьера [359]. Растворимая форма НАДН-зависимой цитохром b5-редуктазы может катализироватьвосстановление трехвалентного железа Fe 3+ до двухвалентного Fe 2+[175].
С другой стороны, работа НАДН-зависимой цитохром b5-редуктазы возможно образование супер-оксид-радикала, что может обуславливать и проокисдантные свойства этого фермента (уравнение1) [80].НАДH цитохром b5-редуктаза → цитохром b5 → цитохром с → цитохромоксидаза → О2 (1)Полученные нами данные говорят о повышенном «запасе» НАДНзависимой цитохром b5-редуктазы в стенке эндометриодной кисты. Следовательно, можно предположить, что наличие редуктазной системы в стенке эндометриодной кисты необходимо для устранения редокс-дисбаланса в эндометриальныхклетках, которые подвергаются атаке АФК [209].1,271,065п/I НАДН , им сп/I 0 , им с0,80,60,44320,210,0Стенка кистыменее 3 смСтенка кистыболее 3 см0Стенка кистыменее 3 смСтенка кистыболее 3 смабРис.
2.13. а - люцигенин-активированная хемилюминесценция стенки кисты менееи более 3 см (базовая хемилюминесценция = 120 мкл люцигенина).б – НАДН-активированная хемилюминесценция стенки кисты менее и более 3 см(активированная хемилюминесценция = 10 мкл НАДН).110Анализ продукции супероксид радикала в стенке эндометриодных кист различного размера показал, что стенка бóльшего размера (n=26) обладает более интенсивным люцигенин-активированным свечением по сравнению с кистами менее3 см (n=12) (I0=0,05 (0,04-0,09) *103 имп/с против , I0=0,31 (0,12-0,49) *103 имп/с ,p=0,004) (Рис.
2.13). Люцигенин-активированная хемилюминесценция показывает, что для кист бóльшего размера характерны более высокие концентрации АФК.Эти данные могут быть связаны с прооксидантными свойствами содержимого эндометриодной кисты и повреждением дыхательной цепи митохондрий, т.к. ранеебыло показано, что содержимое кист большего размера характеризуется большейпрооксидантной активностью, так и с собственно большей продукцией АФК митохондриями более длительно существующих эндометриодных кист.При добавлении НАДН интенсивность хемилюминесценции возрастала какв стенке эндометриодной кисты менее 3 см до – IНАДН=1,8 (0,8-2,2) *103 имп/с., таки более 3 см до - IНАДН=4,2 (2,8-6,2) *103 имп/с (Рис.
2.13). Различия в свечениимежду малыми и большими кистами также были достоверными (р=0,007). Ранеенами показано, что бóльшая прооксидантная активность содержимого бóльшихэндометриодных кист обусловлена более высокими концентрациями супероксида,вырабатываемого при окислении двухвалентного Fe2+ до Fe3+. Причем, метгемоглобин является наиболее распространенной формой гемоглобина в доброкачественных эндометриодных кистах [208].
Для снижения уровня АФК происходитактивации редуктазной системы, которая может катализировать восстановлениетрехвалентного железа Fe 3+ до двухвалентного Fe 2+. Очевидно, что для деактивации большего количества АФК эндометриальной клетке требуется большая концентрация редуктаз. Это подтверждается нашими данными: в кистах бóльшегоразмера отмечалось увеличение «запаса» НАДН-зависимой цитохром b5редуктазы.Однако если сравнить исходный и стимулированный уровень свеченияэндометриодной кисты, то оказывается, что в кистах менее 3 см после добавленияНАДН уровень активированной хемилюминесценции возрастает в 36 раз, тогдакак эндометриомах более 3 см только в 13 раз.
То есть несмотря, на казалось бы111больший абсолютный уровень IНАДН в эндометриодных кист более 3 см, относительно исходной продукции АФК активность НАДН-зависимой цитохром b5редуктазы оказывается меньше в сравнении с кистами меньшего размера. Этосвидетельствует о недостаточной активности НАДН-зависимой цитохром b5редуктазы в эндометриомах более 3 см. Антиоксидантная недостаточность в стенке эндометриодной кисты приводит к тому, что свободные радикалы проникаютчерез стенку эндометриодной кисты и могут атаковать здоровую ткань яичника,снижая в ней активность митохондрий.Сравнение собственного свечения ткани яичника (n=38) и стенки кистыпоказало, что собственная радикал-продуцирующая способность стенки эндометриодной кисты (I0=0,17 (0,09-0,41) *103 имп/с) несколько выше, чем ткани яичника (I0=0,12 (0,05-0,29) *103 имп/с).
Таким образом, в строме яичника, содержащейэндометриоидную кисту, не происходит избыточного образования радикаланионов, тогда как сама эндометриодная киста способна продуцировать АФК.При сопоставлении НАДН-индуцированной хемилюминесценции тканияичника и стенки кисты оказалось, что медиана средних значений IНАДН в стенке кисты была выше (IНАДН =2,9 (2,1-4,3) *103 имп/с), чем в ткани яичника(IНАДН =1,8 (1,1-2,7) *103 имп/с), р=0,01 (Рис. 2.13).
То есть, казалось бы, фолликулярный аппарат яичника должен быть защищен антиоксидантной защитой,которую обеспечивает стенка кисты. Но следует учитывать, что утечка АФК вмитохондриальной цепи в стенке кисты происходит в несколько раз в более значимом объеме по сравнению с тканью яичника.
То есть больший «запас» НАДНзависимой цитохром b5-редуктазы может быть вторичным ответом на избытокАФК в эндометриоме. В связи с этим нами был проведен индивидуальное сопоставление люцигенин-активированной хемилюминесценции (I0) каждого образцаткани яичника с соответствующим образцом кисты (Рис.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
