Диссертация (1174225), страница 16
Текст из файла (страница 16)
Было показано, что стенка эндометриомысостоит из распластанного столбчатого эпителия со стромой эндометриальноготипа, часто окруженной фиброреактивной тканью, с большим количеством макрофагов, содержащих гемосидерин. В некоторых случаях внутренняя оболочкаэндометриомы отсутствует, обнаруживается только грануляционная и фибрознаяткань, содержащая большое количество макрофагов [374].Эндометриоидные клетки, выстилающие внутреннюю поверхность кисты,долгое время остаются объектом пристального внимания, главным образом в контексте сравнения клеточного и молекулярного профиля эутопического и эктопического эндометрия. Предполагается, что содержимое кисты с высокой частотойвызывает соматические мутации в клетках, выстилающих внутреннюю часть кисты, потенциально онкогенных [368]. Одним из таких факторов служит образование АФК, которые могут индуцировать мутации ДНК, причем митохондриальнаяДНК в большей степени подвержена повреждениям, чем ядерная.
Недавние исследования обнаружили у пациенток с эндометриозом мутации митохондриальной ДНК, которые кодируют субъединицы комплекса I дыхательной цепи. Этимутации влияют на транспортную цепь электронов, что приводит к увеличениюутечки электронов и повышенной выработке АФК митохондриями. О повышенной выработке АФК митохондриями эктопических эндометриальных стромальных клеток, выстилающих эндометриодную кисту, сообщается и в исследованииChen et al. [153].
Кроме того, в этой же работе указывается и о повышенном гликолизе в эктопических эндометриальных стромальных клетках, развивающемся вусловиях тканевой гипоксии. Гликолиз сопровождается повышенной продукциейлактата, который способствует миграции и инвазии клеток эктопического эндометрия в яичник, постепенно образуя новые колонии эктопического эндометрия.Лактат также стимулирует местную воспалительную реакцию и фиброз, что в ещебольшей степени приводит к повреждению яичников. Повреждение яичниковойткани при эндометриозе происходит и за счет апоптоза.
Ключевым шагом в развитии апоптоза является увеличение проницаемости митохондриальной наружноймембраны путем открытия переходной поры проницаемости, что ведет к умень-85шению потенциала мембраны митохондрии и позволяет апоптотическим факторам, таким как цитохром с, высвобождаться из митохондрий в цитоплазму [153].Если предположить, что наличие эндометриомы определяет повреждениеяичников до хирургического вмешательства, корковая ткань яичника, окружающая кисту, должна иметь клеточные и молекулярные признаки такого повреждения.
В частности, Matsuzaki и Schubert было показано, что уровень окислительного стресса в ткани яичника, окружающей эндометриому, значительно выше, чем вдругих типах доброкачественных кист. Ткань яичника после лапароскопическойцистэктомии по поводу эндометриомы и по поводу других доброкачественныхкист яичника (тератом и серозных цистаденом), окрашивалась 8-OHdGчувствительным иммунологическим красителем [176]. При этом окрашиваниебыло в 10 раз интенсивнее в коре яичника пациентов с эндометриомой по сравнению с пациентами с другими кистами яичников. Это может объясняться какнарушением архитектоники коры яичника за счет объемного образования, приводящим к развитию локальной воспалительной реакции с продукцией АФК, так ивоздействием патологических факторов самой кисты, в частности высоких концентраций железа, которые диффундируют в окружающие ткани, приводя к образованию АФК.
Наконец, некоторые АФК свободно проникают через клеточныемембраны и могут непосредственно вызывать оксидативный стресс [132, 220]. Понекоторым данным, в отсутствие лечения АФК вызывают выраженное необратимое повреждение здоровой ткани яичника. Важно подчеркнуть, что АФК такжеучаствуют в развитии фиброза. АФК наряду с TGF-β1 являются основным фактором, ответственным за дифференциацию миофибробластов по профибротическому фенотипу, при этом TGF-β1 стимулирует образование АФК различными механизмами, которые, в свою очередь, вызывают активацию сигнальных каскадовпрофибротических генов, в частности PAI-1, который участвует в ремоделировании коллагенового матрикса [293]. Высокий уровень окислительного стресса вткани яичника, содержащего эндометриому, приводит к развитию выраженногофиброза в ответ на увеличение концентрации АФК.86Таким образом, причины снижения фертильности при наличии эндометриодных гетеротопий на тазовой брюшине, а также при формировании эндометриодных кист, до конца не ясны.
Известно, что плотность фолликулов в ткани яичника, окружающей эндометриоидную кисту, значительно ниже, чем в здоровомяичнике. Предполагается, что снижение овариального резерва при эндометриозепроисходит не только из-за механического растяжения окружающих тканей объемным образованием, но и содержимого эндометриодной кисты. Эндометриоидная киста содержит свободное железо, АФК, протеолитические ферменты и молекулы воспаления в концентрациях в 10-100 раз превышающих таковые в периферической крови или в других типах доброкачественных образований яичников.Уровень свободных радикалов повышен и в перитонеальной жидкости женщин,страдающих эндометриозом, что обуславливают ее спермато- и эмбриотоксичность. Локальные свободно-радикальные процессы, происходящие в перитонеальной жидкости больных с эндометриозом, в эндометриодной кисте, а такженормальной коре яичника, окружающей эндометриодные кисты, остаются предметом неуклонного интереса ученых.
В связи с этим на данном этапе исследования были изучены показатели свободно-радикального гомеостаза перитонеальнойжидкости, эндометриодной кисты и ее окружения.Существует множество способов оценки оксидантно-антиоксидантной активности, которые основаны на спектрофотометрическом, электрохимических,хроматографическом, электронном парамагнитном резонансе, флюоресцентном ихемилюминесцентном методах анализа. Одним из самых чувствительных методовоценки антиоксидантного потенциала является хемилюминесцентный метод.Изучение антиоксидантного профиля представляет собой процесс нейтрализациисвободных радикалов, которые генерируются при проведении опыта, испытуемыми соединениями. Методики измерения антиоксидантного потенциала являются реакциями ингибирования: некоторые соединения генерируют свободный радикал, а затем происходит взаимодействие с антиоксидантом.
Антиоксидантнаяактивность может быть описана с помощью различных единиц, наиболее распространенной из которых является моль эквивалент стандартного вещества на еди-87ницу массы образца. В качестве стандарта чаще всего используется тролокс (6гидрокси-2,5,7,8-тетраметилхромо-2-карбоновая кислота), водорастворимый аналог витамина Е, а также аскорбиновая кислота [243].Метод хемилюминесценции не связан с изменением хода процессов в клетках, растворах и тканях, в которых регистрируется свечение, а также достаточночувствителен при обнаружении высокореакционных радикалов, что дает ему преимущество над другими методами [19].
При определении антиоксидантной активности с помощью хемилюминесценции для генерации свободных радикаловиспользуют различные системы. Все методики можно условно разделить на системы, использующие липидсодержащие субстраты окисления (гомогенаты липидсодержащих тканей, суспензии ненасыщенных жирных кислот, гидропероксидов липидов, липопротеинов и липосом) и системы, использующие водорастворимые соединения в качестве субстратов окисления (белок фикоэритрин, люминол,2,2`-азиноди(3-этилбензотиазолин)6-сульфоновуюкислоту,-кето--метиобутировую кислоту. Инициация окисления в липидсодержащих системахосуществляется ионами Fe2+, введёнными извне.
Инициаторами окисления в водорастворимых системах служат, например, пероксидазные реагенты (смесь пероксидазы (пероксидаза из корней хрена, метмиоглобин, цитохром с) с Н2О2). Внастоящее время большое распространение получил способ инициирования водорастворимых пероксильных радикалов. В качестве водорастворимого субстратаокисления используется 2',2-азо-бис(2-амиди-нопропан) гидрохлорида (АБАП).
Воснове метода лежит способность азосоединений (так называемых азоинициаторов) подвергаться спонтанному термолизу с образованием алкильных радикалов.При разложении водорастворимого азоинициатора возникают газообразный азоти два алкильных радикала, которые быстро реагируют с кислородом с образованием пероксильных и алкоксильных радикалов RO2• и RO•. В качестве веществусилителей хемилюминесценции используются химические активаторы (ХЛзонды) – соединения, образующие продукты в возбужденном состоянии, послереакций со свободными радикалами. Свечение наблюдается при переходе этихсоединений в основное состояние.
Широкое распространение получило использо-88вание люминола (5-амино-2,3-дигидро-1,4-фталазиндион) и люцегенина (динитрат 10,10'¬ди¬ метил-9,9'¬биакридиния) в качестве химических активаторов хемилюминесценции. Люминол-зависимая хемилюминесценция реализуется за счетокисления люминола АФК и активными формами хлора, после чего окисленныеформы люминола взаимодействуют с супероксид-анион-радикал (САР) или пероксидом водорода [19].Аэробные организмы содержат несколько механизмов защиты для предотвращения и / или восстановления повреждений, связанных с окислительнымипроцессами.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
