Диссертация (1174225), страница 19
Текст из файла (страница 19)
Референтные значения для перитонеальнойжидкости ранее не вычислялись, но, учитывая схожесть кинетических кривых,можно предположить, что показатели для плазмы крови и перитонеальной жидкости должны быть близки. Также как и в плазме крови в перитонеальной жидкостипрактически у всех пациенток (вне зависимости от генеза бесплодия) выявлялисьизменения свободно-радикального гомеостаза как в сторону снижения антиокси-100дантов (окислительный стресс), так и повышения антиоксидантов (антиоксидантный стресс). Количество пациенток со сниженными показателями антиоксидантной защиты составило 33,3% при НГЭ, 45,4% при ТПБ и 44,4% при СПКЯ, повышение антиоксидантной емкости было выявлено в 41,7%, 27,3% и 33,3% соответственно.Суммирую представленные данные, можно сделать вывод об отсутствиидостоверных различий в показателях антиоксидантного профиля в плазме крови иперитонельной жидкости при различном генезе бесплодия.
Параметры антиоксидантной защиты, обусловленные действием сильных антиоксидантов - мочевойкислоты и аскорбата, были в пределах референтных значений, а у некоторых пациенток отмечалось некоторое повышение параметра S. Снижение показателя ∆I,свидетельствующее об увеличении уровня окислительной модификации альбумина и уменьшении антиоксидантного потенциала системы глутатиона, также выявлено не было ни в плазме крови, ни в перитонеальной жидкости.
Литературныеданные, характеризующие окислительный стресс в крови и перитонеальной жидкости женщин с эндометриозом, противоречивы. В исследовании Волгиной Н.Етакже как и в нашем исследовании не было выявлено различий в показателяхокислительного стресса (а именно в уровне АФК) в перитонеальной жидкости упациенток с НГЭ по сравнению с пациентками с миомой матки [20]. Polak et al.выявили более высокие концентрации 8-изопростана и 8-OHdG в перитонеальнойжидкости у пациенток с распространенными формами эндометриоза по сравнению с пациентками с простыми серозными цистаденомами и тератомами яичников [303].
По данным Santulli et al. маркеры окисления белков в перитонеальнойжидкости были значительно повышенными только у женщин с глубоким эндометриозом по сравнению с контролем, в то время как при поверхностных очагахэндометриоза тазовой брюшины и при эндометриодных кистах яичников различия были статистически незначимыми. В исследовании Ekarattanawong et al. былопоказано, что в плазме крови и перитонеальной жидкости пациенток с тяжелойстадией эндометриоза медиана активности СОД и глутатионпероксидазы быласамой низкой [174]. Montoya-Estrada et al.
не выявили значимых различий в пери-101тонеальной жидкости и плазме крови концентраций малонового диальдегидаи модифицированного ишемией альбумина [267]. Адамян Л.В. и др. в своем исследовании обнаружили выраженные изменения в системе антиоксидантной защиты в плазме крови пациенток с НГЭ [3].Так как ряд исследователей показали, что окислительный стресс чаще выявляется только при распространенных формах эндометриоза, то мы решили изучить показатели свободно-радикального гомеостаза в плазме и перитонеальнойжидкости при различной степени тяжести эндометриоза (Табл.
2.4).Табл. 2.4. Свободно-радикальный гомеостаз плазмы крови и перитонеальнойжидкости при различной распространённости НГЭПоказатели хемилюминограммыПричина бесплодияДостоверностьТПБ(n=11)НГЭ I-IIст.(n=24)НГЭ IIIIV ст.(n=12)*p междуТПБ и НГЭIII-IV ст.*p междуНГЭ I-II иIII-IV ст.SПЛАЗМА,×103имп/с, Ме (МР)339(270-418)370(342-406)374(356-395)p>0,05p>0,05∆IПЛАЗМА,×103имп/с, Ме (МР)0,7(0,5-1,5)1,3(0,6-1,7)1,6(1,3-2,0)p>0,05p>0,05SПЖ, ×103 имп/с,Ме (МР)372(348-426)353(320-393)456(430-576)p=0,006p=0,001∆IПЖ, ×103 имп/с,Ме (МР)0,9(0,7-1,4)1,0(0,8-1,27)1,5(1,3-1,7)p=0,03p=0,03SПЛАЗМА/SПЖ, Ме(МР)1,1(0,9-1,2)0,9(0,9-1,2)1,2(1,2-1,5)p=0,07p=0,02Оказалось, что параметры S и ∆I не различались в плазме крови у пациентокс НГЭ I-II и III-IV стадиями: Me SПЛАЗМА =370 (342-406) и 374 (356-395) соответственно; Me ∆IПЛАЗМА =1,3 (0,6-1,7) и 1,6 (1,3-2,0) соответственно.
Также различийвыявлено не было при сопоставлении этих параметров плазмы крови с пациентками с ТПБ.1024,5443,53IХЛ *10³ имп/сIХЛ *10³ имп/с3,52,532,521,521,5110,50,5000500Время, с1000150005001000Время, с15002000баРис. 2.6. Хемилюминограммы плазмы крови (а) и перитонеальной жидкости (б)пациенток с НГЭ I-II стадии (серая кривая) и НГЭ III-IV стадии (черная кривая)В перитонеальной жидкости показатели антиоксидантной активности былидостоверно повышены при НГЭ III-IV стадии (Me SПЖ =456 (430-576) и ∆IПЖ =1,5(1,3-1,7)) по сравнению с пациентками с НГЭ I-II стадии (Me SПЖ =353 (320-393) и∆IПЖ =1,0 (0,8-1,27)) и ТПБ (Me SПЖ =372 (348-426) и ∆IПЖ =10,9 (0,7-1,4)) (Рис.2.6, Рис.
2.8, Рис. 2.8).3,0**2,5п/I ПЖ , им с2,01,51,00,50,0ТПБСПКЯНГЭ_1_2_ст. НГЭ_3_4_стРис. 2.7. Показатели свободно-радикального гомеостаза перитонеальной жидкости (параметр ∆IПЖ) при бесплодии различного генеза (** - р<0,01).103800*700п/SПЖ , им с600500400300200ТПБСПКЯНГЭ_1_2_ст. НГЭ_3_4_стРис. 2.8. Показатели свободно-радикального гомеостаза (параметр SПЖ) перитонеальной жидкости при бесплодии различного генеза (* - р<0,05).Нами было рассчитано соотношение SПЛАЗМА/SПЖ, которое оказалось достоверно повышенным при НГЭ I-II стадии (Ме= 1,22 (1,19-1,48)) по сравнению сНГЭ III-IV стадии (Ме=0,96 (0,86-1,18)), что свидетельствует о повышение антиоксидантной активности в перитонеальной жидкости по сравнению с плазмойкрови при распространенных формах эндометриоза (Рис.
2.9).1,8SПЖ/SПЛАЗМА1,61,41,21,00,80,6ТПБСПКЯНГЭ_1_2_ст. НГЭ_3_4_стРис. 2.9. Соотношение антиоксидантной активности плазмы крови и перитонеальной жидкости.104Ретроградная менструация, а также «менструация» эндометриоидных гетеротопий приводит к скоплению в брюшной полости гема и железа, которые являются сильными прооксидантнами [163]. Окислительный стресс происходит в макрофагах и других воспалительных клетках перитонеальной жидкости, а продуктыжизнедеятельности клеток, полученные в результате этого процесса, попадают всистемный кровоток.
Это объясняет, почему перитонеальная жидкость можетбыть более подвержена воздействию окислительного стресса, чем плазма крови.Кроме того, биомаркеры окислительного стресса в плазме крови, могут отражатьокислительный статус, обусловленный другими причинами помимо эндометриоза, тогда как в перитонеальной жидкости уровень этих маркеров может более точно свидетельствовать об изменениях, характерных для эндометриоза. Антиоксидантная защита призвана защитить организм от избытка свободных радикалов.Мы считаем, что повышение параметра S, отражающее активацию сильных антиоксидантов - мочевой кислоты и аскорбата, носят компенсаторный характер в ответ на свойственное пациенткам с тяжелым эндометриозом увеличение активности прооксидантного фермента ксантиоксигеназы.
Повышение показателя ∆I,свидетельствует об уменьшении уровня окислительной модификации альбуминаи увеличении антиоксидантного потенциала системы глутатиона. Окисление глутатиона происходит посредством действия глутатионпероксидазы - основного антиоксидантного фермента для последовательного удаления супероксидного радикала и перекиси водорода, т.е.
глутатионпероксидаза предотвращает образованиечрезвычайно токсичного гидроксильного радикала. Следовательно, повышение∆I, по-видимому, тоже носит компенсаторный характер на свойственный тяжелым формам эндометриоза избыток супероксидного радикала и перекиси водорода.Повышение антиоксидантов в перитонеальной жидкости, казалось бы,должно способствовать преодолению бесплодия у пациенток с распространенными формами эндометриоза. Считается, что окислительный стресс может быть одной из причин развития бесплодия при эндометриозе.
АФК, содержащиеся в перитонеальной жидкости, оказывают непосредственное повреждающее действие на105ооциты, сперматозоиды, эмбриональные клетки, вызывая фрагментацию ядернойи митохондриальной ДНК, инициируя деструкцию белка и ПОЛ, что приводит кповышению проницаемости мембраны, инактивации ферментов и в конечномитоге к апоптозу клетки [360]. В то же время АФК в небольших концентрацияхвсегда находятся в перитонеальной и фолликулярной жидкостях и являются сигнальными модуляторами овуляции, развития эмбрионов и имплантации [258]. Вработе Шестаковой М.А и др. было показано, что в фолликулярной жидкостиуменьшение антиоксидантной активности (окислительный стресс) и ее увеличение (антиоксидантный стресс) сопровождается снижением качества эмбрионов,т.е.
для оптимального развития эмбрионов необходим баланс прооксидантов и антиоксидантов [100]. С другой стороны, как уже указывалось ранее, эндометриодные имплантаты, расположенные непосредственно на поверхности яичника, натазовой брюшине и маточных трубах являются источником повышенной продукции АФК, которые окислительно модифицируют геномную ДНК, вызывая ее повреждение, которое по-видимому, приводит к гибели эндометриальных клеток[209]. Эффективная антиоксидантная функция, в свою очередь, может замедлитьгибель клеток, вызванную АФК, и привести к формированию «порочного круга»:большее количество эндометриодных имплантов продуцирует большее количество АФК, что вызывает активацию антиоксидантной защиты и «выживаемость»клеток под действием сублетальных концентраций АФК (Рис.
2.10). В настоящеевремя в литературе увеличивается количество исследований, посвященных связимежду увеличенными концентрациями антиоксидантов и канцерогенезом яичников (вследствие приобретения онкогенных мутаций ДНК в клетках, подвергшихсяатаке АФК, но не приведших к их гибели) [209]. Наши исследования относительно роли антиоксидантного стресса в прогрессировании эндометриоза и возникновении глубокого инфильтративного эндометриоза являются пилотными. Мы считаем, что полученные нами данные, могут расширить понимание роли окислительно-антиоксидантного баланса в брюшной полости, и пагубности сдвигов какв сторону окислительного, так и сторону антиоксидантного стресса.106Эндометриодные гетеротопии↑проксидантов↑антиоксидантовПовреждениеЛипиды, белки, ДНКЗащитаЭндометриоидные клеткиРегрессПрогрессРис.
2.10. Роль антиоксидантного стресса в прогрессировании эндометриоза2.4. Редокс-статус в эндометриодной кисте и ее окруженииНавторомэтапеисследованияизучалсяредокс-статусяичника,содержащего эндометриодную кисту. Для этого было изучено содержимоеэндометриодных кист (n=12), которое представляет собой продукт превращениягемоглобинаиявляетсяосновнымисточникомсвободныхрадикалов.Исследования проводили на модельной системе: линолевая кислота + гемоглобинилисодержимоекистыхемилюминесцентнымвметодом.присутствииКинетикаактиватораокислениякумариналинолевойС-334кислотысодержимым эндометриоидной кисты была аналогична кинетике окислениялипидов гемоглобином и железом и представляла быструю вспышку сэкспоненциальным затуханием, характерную для перекисного окисления липидов(Рис. 2.11). По светосумме под кривыми показано, что прооксидантная активностьсодержимого кисты выше в 8–10 раз, чем прооксидантная активностьгемоглобина.107абРис.
2.11. Хемилюминограммы гемоглобина (слева) и содержимого кисты (справа) с линолевой кислотой в присутствии кумарина С-334. Система: окисленнаялинолевая кислота, кумарин С-334, (а) гемоглобин, (б) содержимое кисты.Болееприближеннойкреальнымусловиямявляетсямодельсфосфолипидами. Окисление фосфолипидов характеризовалось стационарнойкинетикой, характерной для ферментов пероксидаз/липопероксидаз, при этомамплитуда сигнала, характеризующая прооксидантную активность, коррелировалас размером кисты – меньший уровень активности соответствовал кистамменьшего размера (Рис. 2.12).
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
