Диссертация (1174217), страница 17
Текст из файла (страница 17)
Поэтому подтверждение генетических нарушенийу пациенток с идиопатическим вариантом центрального гипогонадизма являетсяважной задачей.Для подтверждения диагноза центрального гипогонадизма в нашемисследовании было проведено количественное измерение экспрессии некоторыхизвестных генов, ответственных за репродуктивную функцию, РНК которыхобнаруживается в лейкоцитах периферической крови.Для правильной эмбриональной дифференциации ГнРГ-продуцирующихнейронов необходима адекватная работа как минимум пяти генов, участвующих вконтроле над репродуктивной функцией, среди которых WDR11 [17].
Продукт генаWDR11 играет важную роль в развитии обонятельных нейронов, а такженепосредственно участвует в процессе развития нейронов ГнРГ [17, 214]. ГенDUSP6 контролирует активность FGF8-ассоциированных процессов [17, 257].FGF8 – фактор роста фибробластов 8 типа – непосредственно участвует вонтогенезе нейронов ГнРГ, и снижение экспрессии FGF8 снижает активностьдифференциации клеток-предшественников в ГнРГ-продуцирующие нейроны[106, 357].Гены PROK2/PROKR2 и CHD7, вместе с KAL1, FGFR1, контролируютмиграцию нейронов ГнРГ1 из места эмбриональной закладки до гипоталамуса[17].
Ген CHD7 кодирует АТФ-зависимый ремодулятор, влияющий на структурухроматина и экспрессию генов и играет важную роль в регуляции эмбрионального104развития, регулирует экспрессию различных генов, в том числе PROK2 и PROKR2[345]. Система прокинетицинов PROKR, которая состоит из 2х почти идентичных(>85%гомологичности)рецепторов,сходныхсG-протеин-связаннымирецепторами, также участвует в контроле репродукции [345].
Их дваполипептидных лиганда PROK1 и PROK2 менее гомологичны, широкопредставлены в различных анатомических структурах, и имеют различныефункции. PROK2 и его рецептор PROKR2 локализуются в аркуатном ядре,обонятельном тракте и супрахиазмальном ядре [345]. Эта система также отвечаетза формирование обонятельного тракта и правильную миграцию ГнРГпродуцирующих нейронов [363].Для исследования были определены гены:• WDR11 и DUSP6 (ответственны за нормальное развитие ГнРГ-нейронов),• PROK2 и CHD7 (контролируют миграцию ГнРГ-нейронов из места ихобразования в носовой плакоде к месту функционирования в гипоталамусе),• GNRHR и GNRH1 (необходимы для обеспечения нормального биологическогоэффекта ГнРГ).Исследование количественной экспрессии мРНК выбранных генов былопроведено у 15 женщин с идиопатическим центральным гипогонадизмом (возрастот 18 до 29 лет, длительность заболевания от 2 до 15 лет, 5 с первичной аменореей,10 – с вторичной аменореей) и 19 здоровых женщин из группы сравнения 1(возраст от 19 до 37 лет) (см.
Рисунок 24, стр. 105). Сравнение экспрессионныхпрофилей пациенток с идиопатическим центральным гипогонадизмом и женщинконтрольной группы представлено в Таблице 14 (стр. 105). Количественнаяэкспрессиявышеуказанныхгеновотличаласьотнормальныхпаттерновэкспрессии контрольной группы у каждой из пациенток. Наиболее частоотмечались изменения экспрессии генов GNRHR (у 13 из 15 пациенток), GNRH1(14/15), и DUSP6 (12/15) [51]. Интересно, что во всех представленных случаяхотмечались отклонения экспрессии не одного, а нескольких – от 2х до 5ти – генову каждой пациентки.0,080,070,060,05GNRHR0,04GNRH1PROK20,03CHD70,02WDR11DUSP60,01QКонтрольПациентыNMLKJIHGFEDCB0AЭкспрессия генов (усл.ед.,нормирована по праймеру бета-актин)105КонтрольнаягруппаРисунок 24 – Экспрессионные профили мРНК выбранных генов у пациентокс идиопатическим центральным гипогонадизмомТаблица 14 – Сравнение экспрессионных профилей пациенток с идиопатическимцентральным гипогонадизмом и контрольной группыГеныПациентыABCDEFGHIJKLMNQGNRHRGNRH1↓↑↑↑↑↑↓↓↓↑↑↑↑↑↑↑↑↑↑↑↑↑↑↑↑↑↓↓↑↓↓↓↓↓↓↓↓↓↓↓↑PROK2↑↑↑↑↑↑↑↑↑↑↑↑↑↑↑↑↑↑↓↓↓↓↓↓↓↓↓↓↓↓↑↑↑↑↑↑↑↑↓↓↓↓↓↓↓↑↑↑↑↑↑CHD7↑↑↑↑↑↑↑↑↑↑↓↓↓↓↓↓↓↓↓↓↑↑WDR11DUSP6↑↑↑↑↑↑↑↓↓↑↓↑↑↑↑↑↓↑↑↑↑↑↑↑↑↑↓↑↑↑↑↑↑↑↓↑↑↑↑↑↑↑↑↑106Для обнаружения мутаций гена GNRHR был проведен ПЦР-ПДРФ анализ 1и 3 экзонов гена GNRHR у 11 пациенток с изолированным центральнымгипогонадизмом на фоне интактного состояния гипоталамо-гипофизарнойобласти.
Мутаций ни в одном из образцов не обнаружено (см. приложение 3, стр.210). В двух образцах гена рецептора к ГнРГ обнаружен полиморфизм Ser(151)Ser(AGC-AGT), описанный в литературе [208], не приводящий к заменеаминокислоты, и не имеющий функционального значения. При исследовании генаFSHB ни в одном из образцов мутации не обнаружена. В одном образце былаобнаружена замена Т-С в гетерозиготном состоянии, которая является одним изописанных полиморфизмов, не приводящих к замене аминокислот Y76Y. Приисследовании 2, 7, 9, 14-15 экзонов гена FGFR1, в которых ранее были описаныприводящие к формированию гипогонадизма мутации, изменений также выявленоне было.
Возможно, что генетической основой заболевания у женщин сизолированным центральным гипогонадизмом являлись нарушения в гене ГнРГили гене рецептора к ГнРГ, которые мы не смогли выявить. Тем не менее, согласнополученным результатам, количественные отклонения экспрессии мРНК генов,ответственных за репродуктивную ось, были обнаружены у обследованныхженщин с изолированным идиопатическим центральным гипогонадизмом.ИзмерениемРНК-экспрессииопределенныхгеновможетстатьперспективным методом диагностики центрального уровня нарушений прирепродуктивных расстройствах у женщин с отсутствием органических измененийгипоталамо-гипофизарной области по данным МРТ [18, 51].
Отклонения вэкспрессии генов были разнонаправленными, и не было найдено сходныхизменений в зависимости от типа аменореи и анамнестических факторов. Снаибольшей вероятностью, для окончательных выводов о наличии или отсутствиитенденций необходимо проведение исследований с большим количествомучастниц. Исследование отклонения экспрессии репродуктивных генов можетбыть предварительным исследованием, на основе которого можно сделать выборгенов для дальнейшего секвенирования.1073.2.2 Органическое поражение гипоталамо-гипофизарной областиКлиническая симптоматика заболевания была более выражена у пациентокс органическим поражением гипоталамо-гипофизарной области по сравнению сидиопатическим вариантом заболевания (см.
Рисунок 25, стр. 108).ИМТ был статистически значимо выше при органическом поражениигипоталамо-гипофизарной области по сравнению с идиопатическим центральнымгипогонадизмом – 23,5 [21; 29] и 20,4 [19,3; 23,0] кг/м2, соответственно (р<0,001).Частота диспареунии не отличалась (57% и 54% соответственно, р=0,789),однако недержание мочи также встречалось гораздо чаще при органическомпоражении (74% и 10% соответственно, р<0,001).Выраженность инволюции органов репродуктивной системы не отличаласьу пациенток в сравниваемых подгруппах: у пациенток с идиопатическимцентральным гипогонадизмом и с органическим поражением гипоталамогипофизарной системы объем матки составил 15 [10; 19,6] см3 и 14,5 [8,4; 18,1] см3,соответственно (р=0,427), объем яичников – 3,6 [1,5; 6,3] см3 и 2,2 [1,5; 3,4] см3,соответственно (р=0,263).Биохимические и гормональные характеристики этих подгрупп пациентоксуммированы в Таблице 15 (стр.
109). Как видно из представленных данных, упациенток с органическим поражением гипоталамо-гипофизарной области посравнению с пациентками с идиопатическим вариантом заболевания отмечалосьболее выраженное снижение уровней андрогенов – как тестостерона, так и ДГЭАС,а также более значимые липидные нарушения – повышение уровней холестеринаи триглицеридов, снижение уровня ХС-ЛПВП.
При этом параметры минеральногообмена не имели принципиальных отличий. Показатели состояния костной ткани(Таблица 16, стр. 109) также не отличались в данных подгруппах.Количество баллов, характеризующих качество жизни, было статистическизначимо выше у пациенток с органическим поражением гипоталамо-гипофизарнойобласти по сравнению с идиопатическим центральным гипогонадизмом – 60 [49;65] и 32 [28; 36], соответственно (р<0,001), что является показателем более низкогокачества жизни пациенток с органическим вариантом заболевания.108Рисунок 25 – Клиническая симптоматика у пациентокс идиопатическим центральным гипогонадизмом иорганическим поражением гипоталамо-гипофизарной системы109Таблица 15 – Сравнительная характеристика гормонально-метаболическихнарушений у пациенток с идиопатическим центральным гипогонадизмом иорганическим поражением гипоталамо-гипофизарной системыИдиопатическийцентральныйгипогонадизмn=85Органическоепоражение гипоталамогипофизарной областиn=91р37 [33; 63]38 [30; 55]0,56Общий Т нмоль/л1,0 [0,7; 1,2]0,1 [0,1; 0,5]<0,001Свободный Т пмоль/л7,0 [4,7; 9,1]1,5 [0,6; 1,9]<0,0015224 [3028; 6600]265 [121; 1461]<0,001Холестерин ммоль/л5,25 [4,5; 6,1]6,15 [5,3; 6,6]0,013Триглицериды ммоль/л0,8 [0,6; 1,11]1,4 [1,05; 2,45]<0,001ХС-ЛПВП ммоль/л1,89 [1,32; 2,2]1,4 [1,11; 1,60]0,023ХС-ЛПНП ммоль/л2,7 [2,2; 3,4]3,2 [2,8; 4,47]0,085Кальций ион.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
