Диссертация (1174206), страница 16
Текст из файла (страница 16)
3) Сравнить и выбрать модификации моделей,которые имеют наиболее воспроизводимые и однородные характеристики ишемическогоповреждения.Исследование проводилось на крысах (n=97), для анестезии выбран хлоралгидрат - 550 мг/кг.На первом этапе исследования оценивали регионарную и магистральную перфузию в бассейнелевой СМА в покое, при перевязке ЛСМА, ЛОСА, ОООСА и при комбинированной окклюзииЛСМА и ОСА, ЛСМА и ОООСА.Для оценки зоны нарушения перфузии использовалось три экспериментальные группы напервом этапе исследования (соответственно трем вариантам окклюзии артерий на втором этапеисследования):Группа №1 - перевязка только ЛСМА и определение зоны нарушения перфузии.Группа №2 - перевязка ЛСМА и ЛОСА, и определение зоны нарушения перфузии.Группа №3 - перевязка ЛСМА и ОООСА, и определение зоны нарушения перфузии.На втором этапе исследования моделировали ишемию с применением всех пяти (трех безреперфузии и двух с реперфузией) модификаций модели (рисунок 5 – протокол эксперимента).Группа №1 - транзиторная окклюзия СМА выполнялась по методике Поляковой Е.А.
[82, 297].После трепанации черепа и выделения левой СМА, лигатура-держалка не затягивалась, на еёконцах формировались петли, которые растягивались за счёт конструкции равномернорастянутых нитей. За счёт поднятия ЛСМА над поверхностью мозга на лигатурах-держалках,происходило формирования перегиба, что приводило к временной окклюзии артерии иформированиюишемии.Дляреперфузиилигатура-держалкаопускалась,перегибликвидировался и кровоток восстанавливался (модель фокальной транзиторной ишемии среперфузией).Группа №2 - перевязка только левой СМА (модель фокальной ишемии без реперфузии) [170,297];Группа №3 - перевязка ЛСМА и ЛОСА (модель фокальной ишемии без реперфузии) [180];72Группа №4 - перевязка ООСА и ЛСМА (модель фокальной ишемии без реперфузии) [180];Группа №5 - перевязка ЛСМА и наложение клипс на обе ОСА на 40 минут по методике L.Zhao.
[216, 217] (модель фокальной транзиторной ишемии с реперфузи).Рисунок 5 - Протокол исследования по сравнению моделей инсульта на основе перевязкиЛСМАОписание операции. Доступ ЛСМА осуществлялся через трепанационное отверстие впроекции корковой ветви ЛСМА. U-образный разрез кожи выполнялся с основанием лоскута,обращённым вниз. После вскрытия фасции musculus temporalis, она удалялась. Три фрезевыхотверстия накладывали в верхнем каудальном углу операционного поля. Операционный доступрасширялся от трепанационных отверстий.
Под операционным микроскопом визуализироваласьЛСМА (увеличение 1:80): цвет артерии – красно-розовый, а вены – багряно-красный. Перевязкакорковой ветви ЛСМА осуществлялась полипропиленовой нитью (7-0). Многие авторыпредлагают использовать коагуляцию СМА [297]. Однако наш опыт показал, что техническивыполнить коагуляцию сложнее и менее безопасно, чем перевязку СМА. Для доступа к ОСАпроизводится разрез по белой линии шеи. Кожа разводится в стороны.
ОСА располагалась между73глубокими мышцами шеи в составе сосудисто-нервного пучка, и её можно было увидеть,отодвинув грудино-ключично-сосцевидную мышцу. ОСА отделялась от других элементовсосудисто-нервного пучка, а после этого под неё подводились лигатуры.Через двое суток после моделирования фокальной ишемии исследовали повреждениеголовного мозга, используя оценку размера инфаркта, выраженности цеербрального отёка иневрологического дефицита по шкале Гарсия (Таблица 7) [212].Оценка величины зоны ишемического повреждения мозга производилась с помощьюколичественного анализа срезов, гистохимически окрашенных трифенилтетразолия хлоридом(ТТХ) [164, 240]. Срезы мозга толщиной 3 мм инкубировали в 0,1% растворе ТТХ (MP Biomed.,США) при t=37,0 С в течение 15 минут.
Срезы фотографировались. Анализировали,произведенные во фронтальной плоскости, 5 срезов мозга толщиной 3 мм. Вычислялся среднийотносительный показатель площади ишемического некроза и коэффициент асимметрииполушарий головного мозга, отражающий выраженность отека мозга (процентное отношениеплощади пораженного полушария к площади всего среза).Оценка «зоны ишемического риска» или «зона ишемической гипоперфузии». «Зонаишемической гипоперфузии [316, 317] (некоторые авторы называют её зоной ишемическогориска [10]) включает в себя зоны «ишемической пенумбры» и «ядра ишемии».
Для определениязоны ишемии использовалось введение синего Эванса (Вектон, Россия) в левый желудочексердца. Через 5 секунд крыса выводилась из эксперимента и мозг извлекался для дальнейшегоисследования. Краситель - синий Эванса попадая в хорошо перфузируемые участки мозга,окрашивал ткани в синий свет. Оставшиеся неокрашенными участки мозга - составляли зонуишемии гипоперфузии. Анализировалось 5 срезов мозга толщиной 2 мм, произведенных вофронтальной плоскости. Вычисляли средний относительный показатель площади нарушениякровотока (как в целом, так и отдельно для подкорковых структур и коры).Магистральный кровоток оценивали в б.ЛСМА через трепанационное отверстие, для чегоиспользовали метод прямой высокочастотной УЗДГ при помощи прибора Минимакс-ДопплерК, датчик 20 мГц (производитель Минимакс).
Датчик располагали непосредственно надповерхностью мозга, таким образом, чтобы ось основной ветви ЛСМА и продольная ось датчикарасполагались по одной линии. Для улучшенного проведения звукового сигнала использовалиэхо-гель. В нашем исследовании использовали оценку систолической и диастолическойскоростей кровотока [24, 134, 135, 137, 139].742.6 ИССЛЕДОВАНИЕ ХАРАКТЕРИСТИК МОДЕЛИ ФОКАЛЬНОЙЦЕРЕБРАЛЬНОЙ ИШЕМИИ ПУТЕМ ФИЛАМЕНТНОЙ ОККЛЮЗИИ СРЕДНЕЙМОЗГОВОЙ АРТЕРИИ У КРЫС ПО МЕТОДИКЕ KOIZUMI J.Одной из часто используемых моделей фокальной ишемии мозга у крыс является –эндоваскулярная окклюзия ЛСМА крыс по методике Koizumi J.
(филаментная модель ишемии)[163, 245, 253]. В отдельном исследовании мы апробировали модель инсульта, чтобы определитьвоспроизводимость данной модели и пригодность ее для трансляционных исследований, чтопотребовало разработать технику контроля качества окклюзии во время ишемии. Этопотребовало использования УЗ допплерографии для контроля, а также адаптации методики длякрыс.Цель исследования: разработать технологию с использованием высокочастотной УЗДГ дляоценки качества проведения эксперимента по моделированию фокальной транзиторной ишемииголовного мозга по методике Koizumi J.Операции на животных проводились под анестезией хлоралгидратом (430 мг/кг),внутрибрюшинно. Протокол операции моделирования фокальной транзиторной ишемииголовного мозга крысы проводился по методу Koizumi J. [245] в модификациях [163, 253].Доступ к ЛСМА осуществлялся по тому же протоколу, как и в предыдущем исследовании.После оценки кровотока в ЛСМА, производился операционный доступ на передней поверхностишеи крысы.
Полипропиленовая нить (4–00, Ethicon) длиной 22 мм, обработанная силиконом иполи-L-лизином (далее – филамент), вводилась ретроградно в левую наружную сонную артерию,после чего проводилась через бифуркацию ЛОСА и ЛВСА к устью ЛСМА, перекрывая его. Через30 минут нить извлекалась, рана ушивалась [135, 139]. Продолжительность окклюзии ЛСМАсостовляла 30 минут.Магистральный кровоток в ЛСМА оценивали через трепанационное отверстие по методике,которая была описана ранее. Оценка перфузии проводилась с помощью прибора «МинимаксДопплер-К» также с использованием датчика 25 мГц. Изучение скорости кровотока производилина всех этапах эксперимента для оценки качества моделируемой ишемии (глубины ишемии): доишемии (после трепанации), во время ишемии (в начале ишемии и перед реперфузией), сразупосле восстановления кровотока (при транзиторной ишемии) и через 30 минут [135,139].Группы животных: Группа №1 – 30-ти минутная эндоваскулярная филаментная окклюзияЛСМА без использования ультразвукового контроля во время опыта (n=25).
Группа №2 – 30-тиминутная эндоваскулярная филаментная окклюзия ЛСМА с использованием УЗДГ контроля навсех этапах эксперимента (n=20).75Для описания причин неудачных попыток окклюзии ЛСМА и отсутствия реперфузии былпроанализирован опыт проведения экспериментов по моделированию фокальной филаментнойтранзиторной ишемии на 352 крысах, где линейную скорость кровотока по ЛСМА оцениваласьна всех этапах исследования и во всех опытах.Рисунок 6 - Схема расположения сосудов на шее при моделировании фокальной ишемии попротоколу Koizumi J. [245] с модификацией [163, 253].A – на фото выделена бифуркация ВСА; Б – на фото во ВСА введен филамент через НСА.АБ76Рисунок 7 - Схема введения филамента при моделировании окклюзии ЛСМА по протоколуKoizumi J.
[163, 245, 253]2.7 ОЦЕНКА ПРОЯВЛЕНИЙ ИНСУЛЬТА С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ ОЦЕНОЧНЫХ ШКАЛ,ТЕСТОВ И КФЖ НА РАННИХ И ПОЗДНИХ СРОКАХ ПОСТИШЕМИЧЕСКОГО ПЕРИОДАЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОГО ИНСУЛЬТА У КРЫСВ данной части работы нами проведен анализ известных и часто используемых оценочныхневрологических шкал и сравнение их с оценкой в КФЖ.
Одним из важных элементов оценкимодели инсульта является стойкость симптомов инсульта во времени. Для нас было важнымпоказать, что именно моделирует данная техника операции.Цель: изучить симптомы экспериментального инсульта с использованием оценочныхневрологических шкал, тестов и КФЖ на ранних и поздних сроках постишемического периодаэкспериментального инсульта у крыс.Задачи исследования:77Изучить особенности функциональных нарушений и степень вариабельностиневрологического дефицита при использовании модели 30-минтной окклюзии СМА попротоколу J.Koizumi [163, 245, 253];Оценитьвыраженностьхарактеривыраженностьсимптомовпослеэкспериментального церебрального инсульта с помощью выборки неврологическихоценочных шкал и тестов у крыс: шкала mNSS (Modified Neurological Severity Scores), тестустановки позы («Bracing test»), тест - хождение по балке («Ledged Tapered Beam»), тест свытягиванием лапы («Placing test»), угловой тест (Corner test), Бедерсон тест (Bederson test)и шкала Гарсия;Определить, к каким доменам КФЖ относится оценка по шкалам.Сравнить чувствительность и воспроизводимость оценочных неврологическихшкал и тестов при фокальной ишемии мозга у крыс.Из огромного спектра существующих методов оценки неврологического дефицита у крыс длянашего исследования мы отбирали неврологические тесты, удовлетворяющие следующим двумпараметрам: 1) простота воспроизведения и оценки; 2) отсутствие необходимости в сложномтехническом оснащении.Выбранные шкалы оценивают неврологический дефицит у крыс комплексно по несколькимпараметрам.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
