Диссертация (1174203), страница 13
Текст из файла (страница 13)
Последний этап реакциисводитсякдобавлениюкатализируетсяферментомхромогенногопероксидазысубстрата,хрена,разрушениевходящимкотороговсоставиммобилизованного на поверхности плашки комплекса. В результате образуетсяокрашенный в голубой цвет продукт окисленного субстрата. Через 15 мин реакциюостанавливают с помощью 0,12 М соляной кислоты, при этом цвет продуктастановитсяжелтым.Оптическуюплотностькаждогообразцаизмеряютфотометрически с использованием микропланшетного ридера с фильтрами 405 и620 нм.
Концентрацию антигена S100 в исследуемых образцах определяют спомощью калибровочной кривой, построенной по стандартам с известнымиконцентрациями S100.69Характеристики тест-системы: аналитическая чувствительность 10,0 нг/л,диапазонизмерения10,0–3500,0нг/л.Длительностьанализа4,5часа.Внутритестовый коэффициент вариации — 2,5%, межтестовый коэффициентвариации 3,5%.Уровни S100 определяют в сыворотке венозной крови пациента, взятойнатощак. Полученные образцы сыворотки центрифугируют при 1500 об/мин втечение 20 мин (центрифуга ЦЛ 1-3). Образцы с концентрацией S100,превышающей значения аналитического диапазона (>3500 нг/л), необходиморазбавить дополнительно и повторить анализ с учетом коэффициента добавочногоразведения [52].Для методики определения CD44 использован иммуноферментный набор дляколичественного определения человеческого sCD44std — Human sCD44stdPlatinum ELISA (производство Bender MedSystems, № BMS209/2)Принцип метода: антитела к человеческому sCD44std адсорбированы влунках микропланшета.
Человеческий sCD44std, присутствующий в образцах,стандартах и контролях, внесенных в лунки планшета, связывается с антителами,адсорбированными в лунках. Антитела к sCD44std, конъюгированные спероксидазой хрена (HRP-конъюгат), связывают молекулы человеческогоsCD44std, захваченные первыми антителами. После инкубации при промывке излунок удаляются не связавшийся HRP-конъюгат анти- sCD44std антител, и в лункидобавляется субстратный раствор, который взаимодействует с ферментнымкомплексом с образованием окрашенного раствора. Реакция останавливаетсядобавлением кислоты.
Интенсивность окраски, измеренная на длине волны 450 нм,прямо пропорциональна концентрации человеческого sCD44std, присутствующегов образцах. Концентрация человеческого sCD44std в образцах определяется покалибровочной кривой, построенной по 6 приготовленным разведениям стандартачеловеческого sCD44std (Bender MedSystems, 2010).Проведен ROC-анализ диагностической ценности белка s100 и sCD44std каконкомаркеров для выявления меланомы кожи702.12 Методы статистической обработки данныхПри нормальном распределении данные представлены через среднее (М) истандартное отклонение (СО). Данные, не имеющие нормального распределения,выражены через медиану (Ме), 25 и 75 процентили. Различия считалисьстатистически значимыми при величине p <0,05.Статистическая обработка проводилась с использованием параметрических(тест Стьюдента для несвязанных и связанных выборок) и непараметрических(тесты Вилкоксона, Манна — Уитни, точный критерий Фишера, χ2) критериев.При сравнении трех групп по количественному признаку использовалсяметод Краскела-Уоллиса, при выявлении различий этим методом проводилосьпопарное сравнение групп с использованием метода Манна-Уитни с поправкойБонферрони при оценке значений р.
Сравнение трех групп по качественномупризнаку проводилось в таблицах сопряженности с использованием критерия хиквадрат.При обработке данных использовалась модификация метода анализаintention-to-treat и проводился расчет показателя NNT (number need tested). В работеон нашел отражение в качестве «показателя гиподиагностики», когда исходыдиагностики диспластических невусов и меланомы рассматривались в группах сучетом клинического опыта работы дерматолога и используемого им способадиагностики меланоцитарных новообразований.Использовалась программа Statistica 8.0 (Statsoft Inc., США), MS Excel(Microsoft).Все дополнительные исследования по дифференциальной диагностикеисследования новообразований кожи проводились с информированного согласияпациентов.71Глава 3.АНАЛИЗ ЭПИДЕМИОЛОГИЧЕСКОЙ СИТУАЦИИ ПОМЕЛАНОМЕ КОЖИ В РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ,ВКЛЮЧАЯ УРАЛЬСКИЙ ФЕДЕРАЛЬНЫЙ ОКРУГМеланома кожи относится к разряду высокозлокачественных опухолей.
Запоследние 40 лет заболеваемость МК в мире возросла примерно в 3 раза. [13; 40;62; 84]. Меланома дает от 65 до 79% всех летальных исходов в группезлокачественных опухолей кожи. Это объясняется способностью данного видаопухоли не только к местному рецидивированию или проявлению регионарныхлимфогенных метастазов, но и, в большей степени, к развитию отдаленныхметастазов [15; 10].Информационнойосновойдляразработкицелевыхпрограммпопрофилактике и ранней диагностике ЗНО, включая МК, выявлению приоритетныхзадач, являются данные о современной онкоэпидемиологической ситуации поопухолям кожи.3.1 Современное состояние заболеваемости меланомой кожи населенияРоссийской Федерации и федеральных округовДля изучения современного состояния заболеваемости МК населения РФ иФедеральных округов проанализированы данные об абсолютных показателяхзаболеваемости меланомой (С43), грубых и стандартизованных показателейзаболеваемости населения, мужской и женской популяции за 2016 год.
Для оценкисостояния диагностики меланомы кожи проведён анализ удельного веса больныхмеланомой, выявленных активно, выявленных на различных стадиях опухолевогопроцесса, а также умерших в течение первого года с момента установлениядиагноза (первогодичная летальность) за период 2006-2016 гг. [56].72Анализ динамики показателей заболеваемости населения РФ меланомой запериод 2006-2016 гг. показал прогредиентный рост грубых показателей (прирост36,94%).
Среднегодовой темп прироста грубого показателя заболеваемостимеланомой за период 2006–2016 гг. составил 3,07% и является одним из самыхвысоких среди других локализаций ЗНО, уступая лишь раку кожи (3,54%) иопухолям головного мозга и другим органам ЦНС (3,38%), значительно превышаясреднегодовой показатель прироста заболеваемости всеми ЗНО (1,94%) (табл. 3.1).Более высокий среднегодовой темп и общий прирост заболеваемости МКрегистрируется у мужского населения РФ (3,54%), по сравнению с женским (2,8%),общий прирост составил 44,03% у мужчин и 33,04% у женщин.Таблица 3.1 — Динамика грубых и стандартизованных показателейзаболеваемости меланомой кожи населения Российской Федерации(мировой стандарт) за период с 2006 по 2016 годНаселениеРФВсенаселениеМужчиныЖенщиныПоказатель заболеваемостина 100 тыс.
населения20062016ГруГруСтанСтанбыйбыйдартдарт5,173,567,134,454,086,10Сравнение3,283,856,08,104,304,70среднегодовоготемпаСреднегодовойтемп прироста, %Общий прирост,%Грубый3,07Стандарт2,03Грубый36,94Стандарт22,833,542,802,411,8144,0333,0427,7520,11приростаиобщегоприростастандартизованных показателей заболеваемости всеми ЗНО и заболеваемости ЗНОкожи за 10 лет показывает, что среднегодовой темп прироста заболеваемостинаселения РФ меланомой (2,03%) в 2 раза превышает аналогичный показатель пообщей онкологической заболеваемости (0,93%).
Показатель общего приростастандартизованных показателей заболеваемости МК населения РФ за период 20062016 гг. меланомой (22,83%), также значительно превышает показатель общегоприроста (10,03%) по всей онкологической заболеваемости.73В общей структуре онкологической заболеваемости населения РФ в 2016 г.кожа (включая меланому — 14,2%) является одной из ведущих среди всехлокализаций и нозологических форм злокачественных новообразований (ЗНО).В структуре онкологической заболеваемости мужского населения РФ ЗНОкожи (включая меланому) занимают III ранговое место, составляя 11,6%, послеЗНО трахеи, бронхов и легких (17,6%) и предстательной железы (14,0%).
Вструктуре онкологической заболеваемости женского населения ЗНО кожи (смеланомой), занимают 2 место (16,4%) после рака молочной железы (21,0%).Средний возраст больных с впервые установленным диагнозом ЗНО - 64,2 года.Средний возраст больных МК составил 61,0 г., что на 4,2 года меньше (мужчин —60,5, женщин — 61,4).В 2016 году в РФ было выявлено 85175 новых случаев ЗНО кожи (С43, С44,С46.0), из них 10454 меланомы (С43). Удельный вес меланомы среди ЗНО кожисоставил 12,3%, среди всех впервые выявленных в 2016 г.
онкологическихзаболеваний населения России возрос до 1,74% (+8,8% относительно 2015 г.).Показатель распространенности меланомы в Российской Федерации(численность контингента больных на 100 тыс. населения) в 2006 — 2016 гг.варьировал в пределах 39,7 (2006 г.) до 59,3 (2016 г.) и за анализируемый периодвозрос на 49,4%. Индекс накопления контингента больных меланомой увеличилсяс 8,0 до 9,0 (+12,5%).Грубый показатель заболеваемости меланомой в России в 2016 г. составил7,13 случая на 100 тыс. населения, стандартизованный (мировой стандарт) — 4,45(табл. 3.2).Заболеваемость меланомой населения 8 федеральных округов России вгрубых показателях варьировала от 3,56 случаев на 100 тыс. населения в СевероКавказском ФО до 9,37 — в Северо-Западном ФО; в стандартизованныхпоказателях — от 2,82 в Северо-Кавказском ФО до 5,64 — в Северо-Западном ФО,коэффициент вариабельности стандартизованных показателей (max/min) — 2.74Таблица 3.2 — Заболеваемость меланомой кожи населения различныхфедеральных округов России в 2016 г.Федеральные округа РФРоссийская ФедерацияЦентральный ФОСеверо-Западный ФОЮжный ФОСеверо-Кавказкий ФОПриволжский ФОУральский ФОСибирский ФОДальневосточный ФОВсё населениеАбс.
числоПоказатели на 100 тыс.случаевГрубыйСтандартизованныйошибка104547,134,450,0532348,264,760,0913009,375,640,1712497,624,620,143473,562,820,1620416,884,360,107476,064,080,1611415,903,880,123956,384,250,22Самые высокие стандартизованные показатели заболеваемости меланомойвсего населения РФ, превышающие средний по РФ (4,45 на 100 тыс. населения) в1,5 раза, зарегистрированы в Кировской (6,85), Мурманской (6,80), Орловскойобластях (6,69).В гендерной структуре заболевших меланомой в 2016 г. в РФ преобладалиженщины — 61,01%, доля мужчин — 38,99%. Анализ гендерных особенностейзаболеваемости меланомой кожи показал, что уровень заболеваемости женщин вРоссии в грубых показателях составляет 8,10 на 100 тыс.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
