Диссертация (1174203), страница 9
Текст из файла (страница 9)
Поэтому применение КЛСМ способствует оптимизацииобъема резекции.При конфокальной микроскопии имеют значение даже такие факторы кактолщина элементов пигментной сети. В европейском исследовании [91] былопоказано, что тонкая пигментная сеть при меланоме характеризуется сотовымрисунком, дендритическими клетками, атипичными кольцевыми паттернами ибесструктурными зонами, а толстая пигментная сеть характеризуется кольцами,дендритическими клетками, атипичными смешанными участками.Конфокальнаямикроскопияэффективнапридифференциальнойдиагностике ранних стадий злокачественного лентиго, лентиго — меланомы вобласти пигментных пятен на лице (обычно возникающих после солнечных ожоговкожи). При ретроспективном исследовании 154 пигментных макул на лице [180]особое внимание было уделено волосяным фолликулам: меланоцитарные клетки,округлые педжетоидные клетки, инфильтрация фолликула, выбухание фолликула,инфильтрация волосяного фолликула (т.е.
фолликулотропизм) расценивались какмаркеры злокачественного лентиго и лентиго-меланомы в сравнении снемеланоцитарными новообразованиями кожи.46Конфокальнаямикроскопияхорошозарекомендоваласебявдифференциальной диагностике меланомы и меланоцитарных макул на губах[214]. Для меланомы были типичны следующие признаки: дезорганизация вэпидермальном слое, педжетоидная инфильтрация, нарушение архитектуры вобластидермо-эпидермальногосоединения,негомогенноераспределениесосочков, пролиферация клеток с заметной атипией в области дермоэпидермального соединения, большое число дендритических клеток (особенноокруглых). Было установлено, что диагностическая точность конфокальноймикроскопии для диагностики меланомы каймы губ и слизистой части губыдостигает 100%, специфичность — 88%.В литературе описаны методы автоматизированного анализа изображений,полученных при конфокальной микроскопии, что сближает этот метод с методомСИАскопии и позволяет еще больше повысить точность и объективность метода[128].
Было показано, что использование компьютерного алгоритма, которыйавтоматически анализирует глубину наиболее поверхностно расположенныхпигментных очагов, позволяет использовать КЛСМ для сверхранней диагностикиповерхностно распространяющейся меланомы — наиболее часто встречающейсяформы МК среди всех выявленных случаев [134; 104].1.6 Протеомный анализ в диагностике меланомыВ настоящее время требуется эффективный и неинвазивный методдиагностики меланомы, который бы позволял выявлять заболевание на раннихстадиях и при этом давал бы прогностическую информацию и о теченииопухолевого процесса.
В идеале данный метод должен быть применим в условияхмассового скрининга. Существующие неинвазивные методы, направленные навыявление циркулирующих меланоцитов [200] являются высокочувствительнымидля выявления пациентов с высоким риском метастазирования, но их клиническаяприменимость и чувствительность в плане скрининга на меланому ранних стадийявляется проблематичной и предметом многочисленных научных дискуссий [109].47В первую очередь это связано с тем, что в настоящее время не существует маркера,который бы однозначно определял меланому на всех стадиях процесса, и особенносложен выбор для скрининговых целей. Перспективным в этом планепредставляется выбор панели маркеров, которые бы позволяли в совокупности датьвысокочувствительный и высокоспецифичный метод ранней диагностики [170;171].Создание нового диагностического алгоритма представляется особенноважным в свете того, что текущая система диагностики и стадирования(использование показателя инвазии по Бреслоу, индекса митоза, наличияизъязвлений, метастазов), в целом, приводит к тому, что в одну группу попадаютпациенты с разным прогнозом и особенностями течения опухолевого процесса.
Всвою очередь, с точки зрения лечебной тактики это ведет к применению все болееагрессивного подхода в плане хирургического и адъювантного лечения впопуляции в целом, что «размывает» эффект лечения и подвергает большее числопациентов токсическим и побочным эффектам терапии [191].Дляонкологовидерматологов,сталкивающихсясмеланомой,диагностические и прогностические маркеры исключительно важны из-заособенностей опухоли (малый размер, высокая злокачественность, выраженнаяреакция на любое инвазивное диагностическое вмешательство). На протяжениидесятилетий эта проблема не находила практического решения по ряду причин. Длягеномного анализа требуется большой объем свежей опухолевой ткани, что длямеланомы абсолютно неприменимо, поэтому протеомный анализ представляетсяидеальным выбором для выявления новых диагностических и прогностическихмаркеров.Кроме того, следует отметить еще одно существенное преимуществопротеомного анализа перед геномным.
В опухолевых тканях особенно вероятноналичие посттранскипционных изменений мРНК, поэтому между геномом иитоговым «продуктом» не существует однозначной связи, что отягощается такженарушением процессов окончательной «сборки» белка в условиях измененногоклеточного обмена. Поэтому, в зависимости от типа опухоли и ее локализации,48один и тоже же ген может определять появление нескольких изоформ белка. Вусловиях метаболизма опухолевой клетки происходят сложные трансформации врезультате взаимодействия с другими белками и превращений в белковыхкомплексах.
Поскольку окончательная версия белка определяет поведениеопухолевой клетки, наличие скрининговых методов с высокой пропускнойспособностью, которые бы оперативно выявляли изменения в экспрессии белков,позволило бы применять протеомный анализ как в диагностике, так и впрогнозировании поведения опухоли [171; 191].Клинический потенциал биомаркеров меланомы включает в себя все стадииопухолевого процесса. Изменения белкового спектра при переходе от меланоцитак атипии/дисплазии и, в конечном итоге, к меланоме можно использовать длядиагностики либо для скрининга пациентов с факторами риска. Белки, которыесвязаны непосредственно с метаболизмом в опухолевой клетке, можноиспользовать для уточнения стадирования и типа меланомы, а также длястратификации риска рецидива и подбора оптимальной хирургической тактики ихимиотерапии.
Аналогично, экспрессия белков (как исходная, так и ее изменение входе лечения) может быть связана с ответом на определенные виды терапии,поэтому потенциально можно будет подобрать индивидуальный план лечения длякаждого пациента. Наконец, выявление в плазме минимальных концентрацийбелков, связанных с циркуляцией опухолевых клеток в кровотоке, позволитвыявить ранние признаки рецидива, либо контролировать эффективность лечения.Несмотря на вышеописанные теоретические возможности серологическихбиомаркеров в раннем выявлении, подборе терапии и контроле излечения, вклинической практике реально используется достаточно мало маркеров.Некоторые клеточные маркеры используются для дифференциальной диагностикимеланомы и других типов злокачественных новообразований (например, S100,MART-1 и gp100/HMB45) [190]. При этом в настоящее время нет тканевыхбиомаркеров, которые бы можно было использовать в рутинной клиническойпрактике для ранжирования рисков [171], и это несмотря на то, что в большомчисле исследований геномным или иммуногистохимическим методами были49выявлены разнообразные биомаркеры, повышенная экспрессия которых связана снеблагоприятным исходом [191].
Последние включают супрессоры, онкогены итрансдукторы (p16, PTEN, EGFR, c-KIT, c-myc, bcl-6, HER3), белки клеточногоцикла (Ki67, циклины A, B, D, E, p21, геминин, PCNA), регуляторы апоптоза (bcl2, bax, Bak, ING3, ING4), белки клеточной адгезии и подвижности (P, E и Nкадхерин, бета-катенин, бета1 и бета3 интегрины, матричные металлопротеиназыи другие белки (Hsp90, RGS1, NCOA3, MCM4, MCM6) [215; 111].Существует также несколько серологических маркеров, связанных снеблагоприятным прогнозом заболевания, включая антигены дифференцировки(S100B, MIA, тирозиназа), факторы ангиогенеза (эндотелиальный сосудистыйфактор роста (VEGF), основной фактор роста фибробластов (BFGF), ИЛ-8),молекулы клеточной адгезии и подвижности (sICAM1, sVCAM, MMP-1, MMP-9),цитокины (ИЛ-6, ИЛ-10, рецепторы к ИЛ-2 (sIL2-2R)) и прочие молекулы(иммунный комплекс TA90, YKL-40) [149; 111]. При этом из всего этогообширного перечня маркеров только несколько используется в клиническойпрактике.Как показали некоторые исследования, определенную роль в диагностикемеланомы играет суперсемейство иммуноглобулинов, относящееся к молекуламклеточной адгезии, из которых наиболее важным представляется CD44 (такжеизвестный как Pgp-1 или HCAM).
Это мембранный гликопротеин, имеющийклеточный рецептор к гиалуроновой кислоте. Он экспрессируется на поверхностилейкоцитов и эритроцитов и определяет возможность адгезии лимфоцитов кэндотелию, включаясь в процессы взаимодействий «клетка-клетка» и «клеткасубстрат». Экспрессия CD44 на поверхности опухолевой клетки можетпотенциально повлиять на адгезию лейкоцитов и соответственно изменитьиммунный ответ организма на опухоль. Кроме того, наличие CD44 на опухолевыхклетках позволяет им мигрировать сквозь стенку венул или лимфатическихкапилляров, то есть распространяться по организму [149].CD44 существует в стандартной форме (CD44std) и 10 изоформах [203].
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
