Диссертация (1174185), страница 24

Просмтор этого файла доступен только зарегистрированным пользователям. Но у нас супер быстрая регистрация: достаточно только электронной почты!

Текст из файла (страница 24)

Для разных типов атеросклеротических поражений интимы аорт,таких как начальное поражение, липофиброзная и фиброзная бляшка,характерен различный набор мутаций митохондриального генома,ассоциированных с атеросклерозом или связанных с отсутствиемподобныхпоражений.Липофиброзныебляшкииначальноеатеросклеротическое поражение интимы аорт связаны с мутациямиm.3256C>T, m.3336T>C, m.5178C>A, m.12315G>A, m.14459G>A иm.15059G>A.В то же время мутация m.1555A>G связана сотсутствиемначальногоисуммарногоатеросклеротическихпоражений, а мутация m.14846G>A – с отсутствием липофиброзныхбляшек. С фиброзными бляшками ассоциированы m.5178C>A иm.3256C>T.

Мутация m.12315G>A связана с отсутствием фиброзныхбляшек в интиме аорты [89].3.8 Анализ уровня гетероплазмии в клетках кровиВыявленные при анализе пораженных атеросклерозом участков аорт 11мутаций митохондриального генома было решено проанализировать в клеткахкрови 700 участников исследования из Московского региона, у которых быливыявлены атеросклеротические поражения сонных артерий при клиническом иультрасонографическом обследовании. Средний возраст участников составлял64,73 года [89, 99, 115, 501, 503, 504].1903.8.1 Принцип исследования атеросклеротических поражений интимысонных артерий3.8.1.1 Оценка размера атеросклеротических бляшекПри ультрасонографическом обследовании атеросклеротические бляшки(АСБ) оценивались, в зависимости от размера бляшки, согласно 4-бальнойшкале [53, 54, 89, 137, 342, 427, 504, 537, 561]:1) 0 баллов присваивалось в случае, если возвышенные атеросклеротическиепоражения в сонной артерии не были обнаружены;2) 1 балл присваивался в случае наличия стабильных атеросклеротическихбляшек и стеноза просвета сонной артерии до 20%;3) 2 балла присваивалось в случае наличия стабильных атеросклеротическихбляшек и стеноза просвета сонной артерии от 20 до 50%;4)3баллаприсваивалосьвслучаегемодинамическизначимыхатеросклеротических бляшек и стеноза просвета сонной артерии более 50%(таблица 33).Таблица 33.

Размер атеросклеротических бляшек в сонных артериях у700 участников исследования [89, 99, 115, 501, 503, 504]ВыборкаРазмер атеросклеротических бляшек в сонных артериях0 баллов1 балл2 балла3 баллаМужчины159 (44%)123 (34%)76 (21%)4 (1%)Женщины108 (32%)118 (35%)101 (30%)11 (3%)Общая267 (38%)241 (35%)177 (25%)15 (2%)3.8.1.2 Оценка толщины интимо-медиального слоя сонных артерийВ связи с тем, что абсолютная норма для значениятолщины интимо-медиального слоя сонных артерий у людей отсутствует. Поэтому в отдельных191популяциях, с помощью эпидемиологических исследований, оно выявляетсяпри анализе распределения ТИМС СА [53, 54, 137, 342, 427, 537, 561].

ВМосковском регионе, в выборке условно здоровых участников исследования(женщин и мужчин), у которых не наблюдалось клинических проявленийатеросклероза,былапроведенадетекцияраспределениясреднейимаксимальной ТИМС СА для разных возрастных групп [89, 504]. Выявленыпограничные(межквартильные)значенияТИМССАдляучастниковисследования из Москвы и Московской области (таблица 34).Таблица 34. Среднее значение ТИМС СА для участников исследованияиз Москвы и Московской области [89, 504]Толщина интимо-медиального слоя сонныхартерий, мкмЖенщины, медианаНе предрасположенныек атеросклерозуПредрасположенныек атеросклерозуМужчины, медианаНе предрасположенныек атеросклерозуПредрасположенныек атеросклерозу<50 лет51-60 лет61-70 лет>70 лет680740835910<610<670<775<845>740>820>930>1015750810900930<660<740<830<850>800>910>995>1070Абсолютные значения данных параметров были перекодированы вквартильные показатели ординарной шкалы (1, 2 или 3) в соответствии свеличинами межквартильных границ для квартилей 1/2 и 3/4.

При этомпринадлежность к 1-й квартили рассматривали как признак низкого уровня192атеросклеротической нагрузки (1), принадлежность к 4-й квартили – высокой(3) [89, 99, 115, 501, 503, 504]. Принадлежность ко 2-й и 3-й квартилямрассматривали как среднюю степень атеросклеротической нагрузки (2) [89, 99,115, 501, 503, 504]Можно было считать медиану границей между нормой и утолщением, ноэто очень условно. Поэтому специально были отобраны именно крайниехарактеристики (границы между 1-2 и 3-4 квартилями), чтобы участникиисследования явно различались по степени атеросклеротической нагрузки [89,99, 115, 501, 503, 504]. Соответственно, если человек попадал в первуюквартиль, то это расценивалось как абсолютная норма, со значением уровняатеросклеротической нагрузки равным 1. Если человек попадал в четвертуюквартиль, это расценивалось как явная предрасположенность к атеросклерозу.Такимучастникамисследованиябылоприсвоенозначениеуровняатеросклеротической нагрузки равное 3.

Прочим участникам исследованияприсваивали значение уровня атеросклеротической нагрузки равное 2 [89, 99,115, 501, 503, 504]Для исследуемой выборки средние значения ТИМС СА по выделеннымгруппам представлены в таблице 35 [89, 99, 115, 501, 503, 504].Таблица 35.

Величина ТИМС СА у участников исследования с различнойстепенью атеросклеротической нагрузки [89, 99, 115, 501, 503, 504]УровеньВеличина ТИМС СА, мматеросклеротическойнагрузки123Среднее значение ТИМС СА, мм0,70,851,01Максимальное значение ТИМС СА, мм0.841,001,26Минимальное значение ТИМС СА, мм0,180,660,771933.8.1.3 Демографические характеристики участников исследованияНа основании полученных данных былопроведено сравнениедемографических (клинико-антропометрических) характеристик пациентов сатеросклерозом и условно здоровых участников исследования [53, 54, 137, 342,427, 530, 537, 561].Таблица 36.

Демографические характеристики участников исследования[530]ПараметрУсловноПациенты сДостоверностьздоровыеатеросклерозомотличийучастникиисследованияСистолическое129 (15,7)141 (14,1)0,26артериальноедавление(мм.рт.ст.)Индекс массы тела25,6(7,3)29,3 (6,4)0,452(кг/мПол,159:180203:1580,002мужчины:женщины(количествочеловек)Курение (%20 (10,6)42 (9,5)0,10курящих к общемуколичествучеловек)Холестерин ЛНП4,03 (1,07)4,38 (1,09)0,001(ммоль/л)Диастолическое78 (16,7)89 (17,3)0,38артериальноедавление(мм.рт.ст.)Age, years53 (8,5)64 (8,9)0,003Общий холестерин6,39 (1,21)6,76 (1,09)0,001(ммоль/л)Триглицериды1,48 (0,61)1,51 (0,64)0,290194(ммоль/л)Холестерин ЛВП1,70 (0,48)1,53 (0,52)0,002(ммоль/л)Примечание: ** - высокодостоверные отличия между пациентами сатеросклерозом и условно здоровыми участниками исследования;* отличия между пациентами с атеросклерозом и условно здоровымиучастниками исследования значимы на уровне p≤0, 1.Данные в таблице 36 представлены в виде среднего значения состандартным отклонением (в скобках).

Как видно из таблицы 36, в группеусловно здоровых участников исследования преобладали женщины, тогда как вгруппе пациентов с доклиническим атеросклерозом преобладали мужчины.Обнаружены высокодостоверные отличия между пациентами с атеросклерозоми условно здоровыми участниками исследования по таким параметрам, каквозраст, уровень общего холестерина и холестерина ЛНП у мужчин (p≤0,01).Кроме того, у пациентов с доклиническим атеросклерозом была выявленатенденция к увеличению частоты курения (p≤ 0,1). Что же касается такихпараметров, как индекс массы тела, уровень артериального давления, уровеньтриглицеридов, то между исследованными группами значимых отличий необнаружено [530].Согласноустановленномуклиническомудиагнозуатеросклерозаисследованная выборка был разделена на 2 группы:1) условно здоровые участники исследования без ультрасонографическихпризнаков атеросклероза (339 человек, или 48,4% выборки) [89, 99, 115, 501,503, 504, 530];2) пациенты без клинических проявлений атеросклероза, которые имелиультрасонографические признаки доклинического атеросклероза, а именноналичие повреждений в просвете сонной артерии (более 10% просвета артерии)(361 человек, или 51,6% выборки) [89, 99, 115, 501, 503, 504, 530].В результате были получены рабочие данные в формате таблицы 10×700,где был приведен процент гетероплазмии каждой мутации для каждогопациента с установленным клиническим диагнозом атеросклероза и каждогоусловно здорового участника исследования [89, 99, 115, 501, 503, 504, 530].195Полученные, в ходе настоящего исследования, данные былиподвергнутыстатистической обработке.

Для этого были использованы программы пакетаSPSS версии 21.0 (SPSS Inc., США) [89, 99, 115, 501, 503, 504, 530]. Былиприменены U-тест для независимых выборок по Манну-Уитни и тест длязависимых выборок по Уилкоксону. Достоверными считали различия приp≤0,05. Коэффициент корреляции был определен на основе анализа таблицсопряженности по Спирмену и бутстрэп-анализа. Направление связи междууровнем гетероплазмии мутаций мтДНК и стадиями атеросклеротическихпоражений было определено с помощью линейного регрессионного анализа.

Спомощью факториальной регрессии анализировали степень ассоциации уровнягетероплазмиимутациймтДНКсатеросклеротическимипоражениями.Мутационный эксцесс был определен с целью количественной оценкимутационной нагрузки. Анализ частот был использован для определениямежквартильных границ в распределениях процента гетероплазмии поотдельным мутациям.

Итогом статистической обработки было определениестатистической мощности исследования [89, 99, 115, 501, 503, 504, 530]3.8.2 Ассоциация уровня гетероплазмии мутаций мтДНК с возрастомСогласно бутстрэп-анализу (таблица 37), обнаружена высокодостоверноположительная корреляция возраста участников исследования с уровнемгетероплазмии мутаций митохондриального генома m.12315G>A, m.14459G>Aи m.15059G>A (p≤0,05) [89, 501, 503]. Отрицательная корреляция с возрастомдля мутаций m.1555A>G и m.14846G>A была высокодостоверной (p≤0,05), адля m.652insG и m.13513G>A – значимой на уровне p≤0,1 [89, 501, 503].196Таблица 37. Корреляция возраста индивидов с уровнем гетероплазмиимитохондриальных мутаций в лейкоцитах крови [89, 501, 503].КоэффициентМутациякорреляцииАсимптоматическаязначимость(двухсторонняя)m.652delG0,1020,201m.652insG-0,1290,104*m.1555A>G-0,2740,046**m.3256C>T0,0620,439m.3336T>C0,1040,192m.5178C>A0,0150,863m.12315G>A0,2770,050**m.13513G>A-0,1280,103*m.14459G>A0,2610,048**m.14846G>A-0,2710,045**m.15059G>A0,2850,047**Примечание: высокодостоверная корреляция мутаций с возрастом(p≤0,05); корреляция мутаций с возрастом значима на уровне p≤0,1.3.8.3Ассоциациямутациймитохондриальногогеномасатеросклеротическими бляшками сонных артерий3.8.3.1 Анализ 11 мутацийСогласно статистическим данным (таблица 38), пороговый уровеньгетероплазмии в клетках крови ассоциирован с наличием атеросклеротическихбляшек в сонных артериях высокодостоверно  по мутациям m.652delG,197m.3336T>C, m.12315G>A, m.14459G>A (p≤0,01), и значимо на уровне p≤0,1 по m.3256C>T, m.5178C>A [89, 99, 115, 494, 504].В то же время с отсутствием АСБ СА связаны мутации m.14846G>A(p≤0,001) и m.652insG (p≤0,1) [89, 99, 115, 494, 504].Таблица 38.

Характеристики

Список файлов диссертации