Диссертация (1174185), страница 23

Просмтор этого файла доступен только зарегистрированным пользователям. Но у нас супер быстрая регистрация: достаточно только электронной почты!

Текст из файла (страница 23)

Демонстрация достоверности отличий уровня гетероплазмиимутации m.5178C>Aв нормальныхи пораженных атеросклерозомсуммарных гомогенатах интимы аорт на блочной диаграмме [89].177Рисунок 36. Демонстрация достоверности отличий уровня гетероплазмиимутации m.12315G>A в нормальных и пораженных атеросклерозомсуммарных гомогенатах интимы аорт на блочной диаграмме [89].Рисунок 37. Демонстрация достоверности отличий уровня гетероплазмиимутации m.14459G>A в нормальных и пораженных атеросклерозомсуммарных гомогенатах интимы аорт на блочной диаграмме [89].178Рисунок 38. Демонстрация достоверности отличий уровня гетероплазмиимутации m.14846G>A в нормальных и пораженных атеросклерозомсуммарных гомогенатах интимы аорт на блочной диаграмме [89].На основании проведенного морфологического анализа интимы аортбыли созданы морфологические карты.

На данных картах были отмеченыидентифицированные зоны (рисунки 3943) [89, 113, 116, 500, 502].Кроме того, использована возможность более грубой классификации зон:норма, ранние поражения (сочетание 2+3), поздние поражения (сочетания 4+5).Таблица 28. Степень атеросклеротического поражения морфологическикартированных аорт [89, 113, 116, 500, 502]Номер аортыСтепеньКоличествоучастковатеросклеротическогоинтимы аортыпоражения123Норма9Жировая инфильтрация17Жировая полоса6Липофиброзная бляшка5Фиброзная бляшка1Норма13Жировая инфильтрация10Жировая полоса7Липофиброзная бляшка12Фиброзная бляшка3Норма12Жировая инфильтрация617945Жировая полоса6Липофиброзная бляшка12Фиброзная бляшка7Норма15Жировая инфильтрация14Жировая полоса18Липофиброзная бляшка12Фиброзная бляшка9Норма25Жировая инфильтрация17Жировая полоса13Липофиброзная бляшка10Фиброзная бляшка53.6.2 Анализ 11 мутаций митохондриального генома в морфологическикартированных аортахПри анализе всех участков пораженной атеросклерозом и нормальнойинтимы пяти аорт с помощью бутстрэп-анализа обнаружено, что с суммарныматеросклеротическим поражением картированных аорт (суммой всех участковаорт, имеющих атеросклеротические поражения различной степени тяжести)связанымутациимитохондриальногогеномаm.3256C>T,m.3336T>C,m.5178C>A, m.12315G>A, m.14459G>A и m.15059G>A – высокодостоверно, амутация m.652delG – на уровне значимости 0,1 [89, 113, 116, 500, 502].

В то жевремя мутация m.13513G>A высокодостоверносвязана с отсутствиемсуммарного атеросклеротического поражения картированных аорт (таблица 29)[89, 113, 116, 500, 502].180Рисунок 39. Морфологическая карта первой аорты [89, 113, 116, 500, 502].Рисунок 40. Морфологическая карта второй аорты [89].181Рисунок 41. Морфологическая карта третьей аорты [89].Рисунок 42. Морфологическая карта четвертой аорты [89].182Рисунок 43. Морфологическая карта пятой аорты [89].Эти данные хорошо совпадают с результатами, полученными при анализесуммарных атеросклеротических гомогенатов [89, 113, 116, 500, 502].Согласно критерию сдвига Уилкоксона для зависимых выборок (наусредненных данных – для всех аорт одновременно) выявлено (таблица 30),что с суммарным начальным атеросклеротическим поражением (суммой всехучастков аорт, имеющих жировые точки и жировые полосы) и суммой всехучастковлипофиброзныхбляшекассоциированы,натомжеуровнезначимости, мутации митохондриального генома, характерные для суммарногоатеросклеротического поражения [89, 113,m.13513G>Aвысокодостоверносвязанас116, 500, 502].

Мутацияотсутствиемданныхтиповсуммарного поражения [89, 113, 116, 500, 502]. Кроме того, с отсутствиемсуммарного начального атеросклеротического поражения и отсутствием суммылипофиброзных бляшек высокодостоверно связана, на уровне значимостиp≤0,05, мутация m.1555A>G [89, 113, 116, 500, 502]. Также выявлено, что сотсутствием суммы липофиброзных бляшек высокодостоверно ассоциированамутация m.14846G>A [89, 113, 116, 500, 502].183В то же время для суммы участков как липофиброзных, так и фиброзныхбляшек выявлена положительная связь с мутацией митохондриального геномаm.652delG на уровне значимости p≤0,1 [89, 113,116, 500, 502].

При этомданная мутация отсутствует в суммарном начальном атеросклеротическомпоражении [89, 113, 116, 500, 502].Крометого,мутацииm.3256C>Tиm.5178C>Aоказалисьвысокодостоверно ассоциированы с суммой участков с фиброзными бляшками[89, 113,116, 500, 502]. Однонуклеотидная заменагуанина на аденин впозиции мтДНК 12315 связана с отсутствием суммы фиброзных бляшек ваортах [89, 113, 116, 500, 502].Таблица 29. Бутстрэп-анализ коэффициента корреляции между уровнемгетероплазмии и наличием суммарного атеросклеротического поражениякартированных аорт [89, 113, 116, 500, 502]АсимптотическаяЗначение коэффициентаМутациязначимостькорреляции(двусторонняя)m.652delG0,3410,088*m.652insG-0,2890,121m.1555A>G-0,3010,113m.3256C>T0,4620,050**m.3336T>C0,6390,023**m.5178C>A0,4760,047**m.12315G>A0,6030,032**m.13513G>A-0,4990,039**184m.14459G>A0,5860,036**m.14846G>A-0,2670,129m.15059G>A0,5310,037**Примечание:   высокодостоверная корреляция мутаций сатеросклеротическим поражением (p≤0,05); корреляция мутаций с атеросклеротическим поражением значима науровне p≤0,1.Таблица 30.

Преобладающие мутации мтДНК в различных типахсуммарного атеросклеротического поражения (АТП) морфологическикартированных аорт [89, 113, 116, 500, 502]НачальноеМутацияЛипофибрознаяФибрознаябляшкабляшкаатеросклеротическое поражениеКоэфи-Асимпто-Коэфи-Асимпто-Коэфи-Асимпто-циентматичес-циентматичес-циентматичес-корре-кая значи-корре-кая значи-корре-кая значи-ляциимостьляциимостьляциимостьm.652delG0,2030,1460,3440,091*0,3660,071*m.652insG- 0,1750,186- 0,2820,125- 0,1580,232m.1555A>G-0,4680,048**-0,4830,039**- 0,1840,195m.3256C>T0,4620,045**0,4690,045**0,4810,050**m.3336T>C0,5010,034**0,5420,025**0,2560,119m.5178C>A0,4810,046**0,5560,023**0,4940,048**m.12315G>A0,4550,050**0,5010,041**-0,4110,046**m.13513G>A-0,5190,035**-0,5880,021**0,2150,143185m.14459G>A0,4780,042**0,5790,026**0,1960,191m.14846G>A-0,2680,117-0,4670,050**0,1720,214m.15059G>A0,4970,043**0,6010,015**0,1680,203Примечание:   высокодостоверная корреляция мутаций сатеросклеротическим поражением (p≤0,05);корреляция мутаций с атеросклеротическим поражением значима науровне p≤0,1.3.6.3 Совокупная мутационная нагрузка 11 мутаций в морфологическикартированных аортахДля того, чтобы определить наличие взаимосвязи мутационной нагрузкисостепеньюатеросклеротическогорегрессионный анализ [89, 113,поражения,проведен116, 500, 502],линейныйВ силу большойиндивидуальной вариабельности признака данные показатели использованыкак нормированные значения, в виде квартилей.

Для каждой мутации в каждойаортепроведеноизучениераспределенияпоказателягетероплазмии,определены межквартильные границы. Индивидуальные скалярные показателигетероплазмии были трансформированы в ординарные величины 1, 2, 3 или 4,характеризующие принадлежность показателя к определенной квартили впределах данного аутопсийного образца [89, 113, 116, 500, 502]. Результатыпредставлены в таблицах 31 и 32.Таблица 31. Сводка модели линейной регрессии взаимосвязи мутационнойнагрузки со степенью атеросклероза в аортах [89, 113, 116, 500, 502]МодельRR210,9450,894СкорректированныйСтандартнаяR2ошибка оценки0,8860,278186Примечание:предикторамимоделиявлялиськонстанта,квартилиm.14846G>A, квартили m.625delG, квартили m.3336T>C, квартили m.5178C>A,квартилиm.1555A>G,квартилиm.14459G>A,квартилиm.15059G>A,квартили m.625insG, квартили m.12315G>A, квартили m.13513G>A, квартилиm.3256C>T.Таким образом, при оценке совокупной нагрузки по 11 мутациям модельлинейной регрессии достигла статистической значимости при p<0,001.Учитывая достаточное количество степеней свободы (11), можно утверждать,что степень атеросклеротического поражения ассоциирована с совокупнойнагрузкой по данным мутациям с вероятностью безошибочного прогноза 99,9%[89, 113, 116, 500, 502].Таблица32.Дисперсионныйанализмоделилинейнойрегрессиивзаимосвязи мутационной нагрузки со степенью атеросклероза [89, 113,116, 500, 502]Модель1СуммаСтепениСреднийквадратовсвободыквадратРегрессия93,8118,53Остаток11,21440,08Итого104,9155Примечание:предикторамимоделиявлялисьFЗначимость110,0<0,001константа,квартилиm.14846G>A, квартили m.625delG, квартили m.3336T>C, квартили m.5178C>A,квартилиm.1555A>G,квартилиm.14459G>A,квартилиm.15059G>A,квартили m.625insG, квартили m.12315G>A, квартили m.13513G>A, квартилиm.3256C>T.

Зависимой переменной была «степень поражения».187Изучены показатели чувствительности и специфичности для каждой измутаций, ассоциированной с атеросклерозом. Анализ проводили методомпостроения ROC-кривых с последующей оценкой площади под кривой, чтопозволило описать экспланаторные свойства генотипических маркеров (рис.44)[89, 113, 116, 500, 502].Рисунок 44. ROC-кривая для оценки чувствительности и специфичностипоказателя «мутационная нагрузка» в отношении атеросклероза [89, 113,116,500,502].Положительнымреальнымсостояниемявляетсяатеросклеротическая бляшка.Площадь под кривой составляет 0,975 (p<0.001) [89, 113, 116, 500, 502]Дляданногогетероплазмиибылианализаранговыепросуммированызначенияв(номеразависимостиотквартилей)знакабета188коэффициента, полученного в регрессионном анализе (при положительномзначении коэффициента – сложение, при отрицательном – вычитание).Полученный параметр получил название «мутационная нагрузка» [89, 113, 116,500, 502].При использовании данной модели показатель чувствительности составил88,2 (p≤0,05; т.к.

95% доверительный интервал лежит в пределах от 74,6 до95,3).Показательспецифичностисоставил77,1(p≤0,05;т.к.95%доверительный интервал лежит в пределах от 70,8 до 87,3) [89, 113, 116, 500,502].Таким образом, совокупная мутационная нагрузка по 11 исследованныммутацияммитохондриальногогеномаассоциированас88,2%случаеватеросклеротических поражений морфологически картированных аорт [89, 113,116, 500, 502].3.7 Преобладающие мутации в атеросклеротических поражениях аортОбобщив данные анализа уровня гетероплазмии в интиме отдельныхучастков, суммарных гомогенатов и участков морфологически картированныхаорт, как нормальных, так ипораженных атеросклерозом, можно сделатьследующие выводы [89]:1.

Внастоящейработевыявленамозаичностьраспределениямитохондриальных мутаций в интиме аорты человека: обнаруженыотличия в уровне гетероплазмии 11 мутаций для различных участковкак нормальной, так и пораженной атеросклерозом морфологическикартированной интимы аорт человека [89].2. Суммарноеатеросклеротическоепоражениеинтимыаортассоциировано с мутациями митохондриального генома m.3256C>T,m.3336T>C, m.5178C>A, m.12315G>A, m.14459G>A и m.15059G>A, амутация m.13513G>A достоверно чаще встречалась у условноздоровых участников исследования [89].1893.

Характеристики

Список файлов диссертации