Диссертация (1173332), страница 8

Просмтор этого файла доступен только зарегистрированным пользователям. Но у нас супер быстрая регистрация: достаточно только электронной почты!

Текст из файла (страница 8)

Лица в возрасте 25–45 лет обоих полов.2. Наличие диагноза: хронический апикальный периодонтит зубов, неподдающийся консервативному лечению.3. Пациенты с переломами, перфорациями, отломом эндодонтическогоинструмента верхушечной трети корня.4. Пациенты, которым требуется плановое удаление зуба.5. Отсутствие в анамнезе психогенных и психосоматических расстройств.6. Отсутствие в анамнезе онкологических заболеваний.Критерии не включения в исследование:1.

Мужчины и женщины младше 25 и старше 45 лет.2. Пациенты с болезнями пародонта.3. Пациенты с сопутствующей общесоматической патологией в стадиидекомпенсации.4. Наличие в анамнезе психогенных и психосоматических расстройств.5. Наличие в анамнезе онкологических заболеваний.Критерии исключения из исследования:1. Отказ пациента в процессе клинического исследования от дальнейшеголечения.2.

Развитие у пациентов в процессе лечения общесоматической патологии.3. Изменение социального статуса пациента в процессе проводимогоклиническогоисследования,повлекшегозасобойизменениепсихоэмоционального фона.На основании критериев включения, не включения и исключения изисследования, одобренных межвузовским комитетом по этике, былисформированы следующие клинические группы.его54Группа исследования: 12 человек, которым в процессе хирургическоговмешательства интраоперационный костный дефект восполняли разработаннойбиокомпозицией с аутологичными МСК десны.Вконтрольнуюгруппувошли12человек,которымвпроцессехирургического вмешательства интраоперационный костный дефект восполняликостезамещающим препаратом.Распределениебольныхповозрастномуигендерномупризнакупредставлено в таблице 3.Таблица 3 – Характеристика пациентов по гендерному и возрастному признаку24–30 лет31–35 лет36–40 лет41–44 летМужчины1321Женщины1122Общая характеристика методик проводимых операций.

Пациентам всехгрупппередоперативнымвмешательствомпроводилистандартнуюмедикаментозную подготовку:За двое суток до операции назначали следующую терапию: Амоксиклав 625 мг по 1 таблетке 2 раза в сутки; Линекс по 2 капсулы 2 раза в сутки; Траумель С сублингвально по 1 таблетке 3 раза в день за 15 минут до еды.За 30 минут до операции внутримышечно вводили дицинон – 2 мл (250 мг) сцелью профилактики кровотечения в послеоперационном периоде.Перед вмешательством лицо, губы и полость рта пациента обрабатывали0,06% раствором хлоргексидина.Методикаподготовкибиокомпозициисаутологичнымимезенхимальными стволовыми клетками десныПациентам под адекватной проводимому лечению анестезией проводитсяплановое удаление зуба.

Далее скальпелем производится иссечение фрагмента55десны лунки удаленного зуба размером 3×4мм (рис. 31). Края лунки сводятся, принеобходимости на лунку накладывается погружной шов, осуществляетсягемостаз.Рис. 31. Забор фрагмента десны для изготовления биокомпозициис аутологичными МСК.Транспортировкатермоконтейнере(Хладоэлементфрагмента(ТермоконтМХД-3)ТМ-5приосуществляетсявсумке-чехле)температуревмедицинскомсхладоэлементами20–23ºС(контролируетсятермологгером) (рис. 32).Рис. 32.

Материал для приготовления биокомпозиции в термоконтейнередля транспортировки.Все процедуры с выделенным фрагментом десны проводят в условияхчистых помещений с соблюдением правил асептики, используя стерильныематериалы и реактивы. Все манипуляции56с компонентами тканеинженерной конструкции проводятся в стерильныхусловияхзонычистыхпомещенийЦентраколлективногопользования«Регенеративная медицина».Доставленный в лабораторию биоматериал отмывают в течение 3 часов в 50мл фосфатно-солевого буфера с добавлением пенициллина 100 ЕД/мл,стрептомицина 100 мкг/мл и амфотерицина 0,25 мкг/мл.

После отмывкибиоматериал помещают в 10 мл 0,05% раствора коллагеназы 2-го типа иинкубируют при температуре 37°С в течение 1 часа. После инкубации фрагментыбиоматериала и клеток центрифугируют при 180 g в течение 5 минут и переносятв 5 мл фосфатно-солевого буфера. Клетки аккуратно суспендируют в буфере дополучения однородной суспензии. Полученную клеточную суспензию фильтруютчерез нейлоновое сито с диаметром отверстий 100 мкм для удаления крупныхчастиц биоматериала. После этого клетки осаждают центрифугированием при 180g в течение 7 минут. Клеточный осадок ресуспендируют в 5 мл полнойкультуральной среды и переносят в культуральный флакон с площадью 25 см2(Т25).Выделенные клеткикультивируют в полной культуральнойсреде,состоящей из бессывороточной среды StemPro; в увлажненной среде притемпературе 37°С в СО2-инкубаторе при содержании СО2 5%.

Смену средыпроводят каждые 3 дня. Перед использованием отбирают 105 клеток в суспензиидля проведения анализов на инфекционную безопасность: Полимеразная цепная реакция (HIV-1 и -2, HTLV-I и -II, HBV, HCV, CMV,Папилломавирус, Toxoplasma gondii, Mycoplasma, Ureaplasma, Chlamidia,Treponema pallidum); Бактериологическое исследование (Staphilococci, Streptococci, Enterococci,Neisseria gonorrheae, Candida species, Aspergillus species, Esherihia coli).Для транспортировки клеточный материал упаковывается в лаборатории встерильную одноразовую пластиковую пробирку, которая маркируется суказанием шифра исследования, Ф.

И. О. пациента, типа клеток, пассажа,количества клеток, даты и времени приготовления. Пробирка упаковывается встерильный пластиковый пакет с герметичной застежкой. После упаковкиклеточный продукт до момента использования должен храниться в холодильнике57для лекарственных средств при температуре от +4º до +8ºС или в медицинскомтермоконтейнере(ТермоконтТМ-5всумке-чехле)схладоэлементами(Хладоэлемент МХД-3). Длительность хранения от момента приготовленияпродукта до применения не должна превышать 6 часов.Клетки, которые не планируется использовать в ближайшее время, требуютзамораживания и криохранения в криососуде в жидком азоте при температуре196ºС в среде с криопротектором с концентрацией клеток 3 млн. в 1 мл.

Принеобходимости криопробирки размораживают и отмывают от криопротектора,проверяют жизнеспособность и продолжают культивировать.Транспортировку осуществляет только медицинский персонал, несущийответственность за соблюдение правил транспортировки.Клеточныйматериалтранспортируютвклиникувмедицинскомтермоконтейнере в стерильной емкости (первичная упаковка) в необходимомобъеме стерильного физиологического раствора для инъекций.До использования клеточный материал хранят при температуре +4ºС + 8ºСне более 6 часов.Ход операции.

Под аппликационной, проводниковой и инфильтрационнойанестезией проводится формирование слизисто-надкостничного лоскута в зависимости от групповой принадлежности оперируемого зуба, топографии иразмеров хронических очагов инфекции (рис. 33).58Рис. 33. Формирование и сепарация слизисто-надкостничного лоскута.Стоматологической фрезой проводится компактостеотомия в областидеструктивного костного очага, с последующим раскрытием трепанационногоокна и резекцей верхушки корня фиссурным бором (рис. 34).Рис.

34. Компактостеотомия с резекцией верхушки корня зуба.Далее производится внесение биокомпозиции с аутологичными МСК десны,фиксированной в остеокондуктивном препарате Bio-Oss (Швейцария) (рис. 35).59Рис. 35. Восполнение интраоперационного дефекта биокомпозициейс аутологичными МСК десны.Костный дефект заполнялся на 70% от собственного объема.

Далееобеспечивалась изоляция интраоперационного костного дефекта резорбируемойколлагеновой мембраной Bio-Guade (Швейцария), которой перекрывали краяинтраоперационного дефекта на 3 мм по периметру. Слизисто-надкостничныйлоскут укладывали на место и фиксировали узловыми швами атравматическимшовным материалом (рис. 36).Рис. 36. Фиксация слизисто-надкостничного лоскута узловыми швами.60Пациентамконтрольнойгруппыоперативныевмешательстваосуществлялись по аналогичной методики, за исключением того, что винтраоперационный дефект укладывали Bio-Oss, имбибированный капиллярнойкровью пациента.Пациентам всех групп после оперативного вмешательства были назначеныследующие препараты и даны соответствующие рекомендации на предстоящие 5суток послеоперационного периода: Амоксиклав 625 мг по 1 таблетке 2 раза в сутки; Линекс по 2 капсулы 2 раза в сутки; Траумель С сублингвально по 1 таблетке 3 раза в день за 15 минут до еды; Супрастин 10 мг по 1 таблетке на ночь; Хлоргексидин 0,05% раствор, ротовые ванночки после каждого приема пищи; Нурофен-форте по 1 таблетке при болях, не более 4-х раз в сутки; В 1-е сутки после операции воздержаться от физических нагрузок,употребления жесткой, острой и горячей пищи и напитков.Пациентамвсехгруппвпослеоперационномпериодепроводиликонтрольное стандартное и цифровое рентгенологическое исследование насроках 1, 3, 6 месяцев в соответствии с результатами, полученными вэкспериментальных и ла- бораторных исследованиях.Метод лазерной допплеровской флоуметрии.

Объективную оценку эффективности использования разработанной биокомпозиции с аутологичнымиМСК десны в формировании костной ткани интраоперационного дефектапроводили, изучая микроциркуляцию в указанном участке с помощью лазернойдопплеровскойфлоуметрии(ЛДФ)спомощьюлазерногоанализаторакапиллярного кровотока «ЛАКК-01», производство НПП «Лазма» (рис. 37).

Воснове метода ЛДФ лежит использование излучения гелий-неонового лазера (λ =632,8 нм) малой мощности, которое хорошо проникает в поверхностные слоитканей. При отражении излучения от движущихся эритроцитов в микрососудахизменяется частота сигнала.61Рис. 37. Лазерный анализатор капиллярного кровотока «ЛАКК-01»(производство НПП «Лазма»).Обработкадопплерограмм проводилась с применением программы,включающей вычисление параметров микроциркуляции.Осуществлялись измерения при отсутствии механической нагрузки воизбежание изменения теплового режима, что, в свою очередь, вызываетизменение капиллярного кровотока.Регистрация ЛДФ-граммы проводилась в проекции интраоперационныхкостных дефектов челюстей. Состояние микроциркуляции оценивали попоказателю микроциркуляции (ПМ), который складывается из средней скоростидвижения эритроцитов (Vэр), показателя капиллярного гематокрита (Ht) и числафункционирующих капилляров (Nк):ПМ = VэрHtNк (перф.

Характеристики

Список файлов диссертации