Диссертация (1173287), страница 11
Текст из файла (страница 11)
В экспоненциальной фазе, характеризуемой интенсивнымразмножением, прослеживается тенденция диауксийного развития напромежутке 30–39 час. Показатель α (пиковое значение оптической плотностив окончании логарифмического роста) – 6,78±0,3 mcf, после которого втечение 9 часов была достигнута М-концентрация. Средний показательоптической плотности в стационарной фазе – 7,2±0,3 mcf. Общее времякультивирования – 96 часов. Условия культивирования популяций –продленное периодическое культивирование.При культивировании исследуемого образца с добавлением 2 пластин«ЦМ-1» размером 1см2, отмечалась самая непродолжительная пролонгацияадаптивного периода (по сравнению с последующими образцами) – до 24 часаэксперимента. Скорость прироста бактериальных популяций существенноснижена по сравнению с контрольным образцом.
На промежутке с 48–54 часотмечается замедление бактериального прироста с максимальным общимпоказателем оптической плотности (М-концентрация) – 5,55±0,3 mcf, что на27% ниже, чем в контрольном образце.При культивировании исследуемых образцов с добавлением 7 пластин«ЦМ-1» размером 1см2 и раствора «Тонзинал», отмечается более длительнаязадержка интенсивного развития культуры, причем скорость генерации новыхпопуляций у образца TNZ гораздо ниже, чем у образца ЦМ_7. Однако,пиковые значения оптической плотности у данных образцов были на одномуровне, с незначительной разницей по времени достижения максимальнойбактериальной концентрации. Суммарный средний показатель оптическойплотности стационарной фазы для данных образцов – 2,91±0,3 mcf, что на 47%ниже, чем в образце ЦМ_2, и на 60% ниже, чем в контрольном образце.75P. intermedia8C_broth7C_P.intermdiaTNZОПТИЧЕСКАЯПЛОТНОСТЬ(MCF)6ЦМ_7ЦМ_25432100369121518212427303336394245485154576063666972757881ВРЕМЯ(ЧАС)Рисунок 24.
Автоматическое культивирование P. intermedia. Общий вид848790939676По результатам культивирования клинического изолята F. nucleatum(рис.25), адаптивная фаза продолжалась до 15 часа культивирования.Максимальный показатель оптической плотности на пике истинногологарифмического развития (показатель α) – 5,9±0,3 mcf (30 час). Далееотмечалось продолжительное отрицательное ускорение культуры, в результате которого была достигнута валовая (М-концентрация) концентрация споказателем оптической плотности – 7,1±0,3 mcf (показатель β).
Среднийпоказатель оптической плотности в стационарной фазе – 7,15±0,3 mcf.При культивировании бактериальных клеток с добавлением образца«Тонзинал», отмечалось удлинение адаптивной фазы до 21 часа. Максимальный пиковый показатель оптической плотности в окончании лог-роста, атакже при достижении клетками общей валовой концентрации – ниже, чем вконтрольном образце. Наблюдается переход в стационарное равновесие, сосредним показателем оптической плотности – 4,64±0,3 mcf, что на 35% ниже,чем в контрольном образце.При культивировании бактериальных клеток с добавлением пластин«ЦМ-1» отмечалось следующее:•при добавлении 2 пластин «ЦМ-1» размером 1см2, достоверных отличийотносительно контрольного образца не выявлено;•при добавлении 7 пластин «ЦМ-1» размером 1см2, задержки адаптивнойфазы не наблюдалось.
Клетки, относительно контрольного образца, почтисразуперешливпериодускоренногоростаиразвития,однакопродолжительность данного периода была пролонгирована. На промежутке24–35 час отмечается диауксийный тип кривой, с последующим быстрымпереходом в замедление генерации новых популяций. Пиковый показательоптической плотности в окончании истинного логарифмического роста(показатель α) – 4,2±0,3 mcf (36 час).
Наступление стационарной фазыотносительно контрольного образца было быстрее, а относительно образца«Тонзинал» – позже. Средний показатель оптической плотности в фазеравновесия – 4,28±0,3 mcf, что сопоставимо с образцом «Тонзинал».77F. nucleatum8C_broth7C_F.nucleatumTNZОПТИЧЕСКАЯПЛОТНОСТЬ(MCF)6ЦМ_7ЦМ_2543210036912151821242730333639424548515457606366697275ВРЕМЯ(ЧАС)Рисунок 25. Автоматическое культивирование F. nucleatum. Общий вид7881848790939678Порезультатамкультивированияклиническогоизолятамикроаэрофильного стрептококка S. constellatus (рис.26) в контрольнойпробирке, первые признаки начала бактериального прироста прослеживалисьуже на 4 час, и к окончанию фазы ускоренного роста оптическая плотностьсоставила 0,13±0,3 mcf (10 час).
Экспоненциальная фаза роста отмечалась с 10часа (0,13±0,3 mcf) до 14 часа (1,34±0,3 mcf). В данной фазе отмечается резкийбактериальный прирост и изменение оптической плотности в среднем на 0,6mcf. Фаза замедленного роста была незначительной по продолжительности, ик 18 часу культивирования был достигнут микробный «урожай» с переходомв стационарную фазу роста.
Средний показатель стационарной фазы составил1,55±0,3 mcf. Продолжительность стационарной фазы – 42 часа.В образцах с добавлением фитопластин «ЦМ-1» были полученыследующие результаты:1.с добавлением 2 и 3 пластин размером 1см2, отмечаласьнепродолжительная пролонгация адаптивной фазы и фазы ускоренного роста(до12часа),послекоторыхгенеративнаятенденцияувеличениябактериальных популяций в экспоненциальной фазе была сравнима сконтрольным образцом. Пиковый показатель экспоненциального роста былотмечен на 16 час культивирования и в среднем, для двух образцов, составил1,22±0,3 mcf. Фаза замедления была короткой и почти сразу перешла в стационарную стадию.
Средний показатель в стационарной фазе – 1,33±0,3 mcf.2.адаптациис добавлением 5 пластин размером 1см2, продолжительность фазыбылаувеличенав1,5раза.Максимальныйпоказательлогарифмической фазы роста – 1,00±0,3 mcf (контроль – 1,34). Стационарнаяфаза продолжительностью 40 часов, со средним показателем оптическойплотности 1,19±0,3 mcf.В исследуемом образце, с добавлением экстракта лекарственныхрастений «Тонзинал» достоверных отличий от контрольного образца ненаблюдалось.79S. constellatusC_broth1,8C_S.const1,6TNZЦМ_2ОПТИЧЕСКАЯПЛОТНОСТЬ(MCF)1,4ЦМ_31,2ЦМ_510,80,60,40,2002468101214161820222426283032343638404244464850ВРЕМЯ(ЧАС)Рисунок 26. Автоматическое культивирование S. constellatus.
Общий вид525456586080По результатам культивирования дрожжевых грибов C. albicans(рис.27), начало прироста биомассы отмечалось на 6 час культивирования, споследующим подъемом в фазе ускоренного роста (6 – 10час). Экспоненциальная фаза роста отмечалась с 11 часа (0,45±0,3 mcf) до 18 часа (3,4±0,3 mcf).Средний показатель изменение оптической плотности на данном промежуткесоставил – 0,73±0,3 mcf (каждые 2 часа).
Фаза замедленного роста (18–24 час)объединяет две фазы – фазу линейного роста (µ = const) и фазу отрицательногоускорения. Прироста биомассы в стационарной фазе не наблюдается, асредний показатель данного промежутка культивирования составил 3,6±0,3mcf.В исследуемом образце, с добавлением водорастворимого экстракта«Тонзинал», отмечалось увеличение продолжительности лаг-фазы до 8 часакультивирования. Максимальный показатель лог-фазы составил 2,54±0,3 mcf(18 час). Фаза замедления бактериального прироста была аналогична попродолжительности контрольному образцу, однако, ярко выраженный периодотрицательного ускорения имел более низкую скорость генерации популяцийкультуры, и выход в стационарную фазу отмечался на 28 час культивирования.Средний показатель стационарной фазы составил – 3,03±0,3 mcf.В образцах с добавлением фитопластин «ЦМ-1» были полученыследующие результаты:1.сдобавлением7пластинразмером1см2,отмечаласьпролонгирование фазы адаптации до 8 часа и фазы ускоренного роста до 12часа культивирования.
Экспоненциальная фаза отмечалась стабильнымприростом новых клеток и после непродолжительной фазы замедлениябактериального роста, на 24 час культивирования – вышла в стационарнуюфазу. Максимальный показатель оптической плотности в лог-фазе составил2,4 mcf, а средний показатель стационарной фазы – 2,8±0,3 mcf, что на 22%ниже по сравнению с контрольным образцом.2.с добавлением 2 пластин размером 1см2 статистически достовер-ных различий с контрольным образцом не наблюдалось.81С.
albicans4C_brothC_С.albicans3,5TNZОПТИЧЕСКАЯПЛОТНОСТЬ(MCF)3ЦМ_2ЦМ_72,521,510,5002468101214161820222426283032343638ВРЕМЯ(ЧАС)Рисунок 27. Автоматическое культивирование C. albicans. Общий вид404244464882Анализ выявления генетических маркеров приоритетных бактерийпародонтопатогенных видовДля подтверждения инфекционной природы воспалительного процесса впародонтевсемпациентамвыполнялимолекулярно-биологическоеисследование для выявления пародонтопатогенных видов 1 порядка (T.forsythia, P. gingivalis, A. actinomycetemcomitans) и 2 порядка (P. intermedia, T.denticola), котороедополнялосьбактериологическимисследованиемсиспользованием техники анаэробного культивирования, что позволяло выявитьдополнительно некоторые виды 2 порядка, которые достаточно хорошоидентифицируются при использовании анаэробной техники (P.micra, F.nucleatum).Втаблице14представленысуммарныерезультатывыделенияпредставителей пародонтопатогенных видов.По каждой группе сравнения определено число пациентов, у которых невыделено маркерной ДНК пародонтопатогенных видов и не получен посевпредставителей данной группы инфекционных агентов.Как видно из таблицы, это были единичные случаи, частота которых составлялаот 5,3 до 10,0 %.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
