Диссертация (1173287), страница 7
Текст из файла (страница 7)
Степень воспаления десны изучали в области зубов 1.6, 2.1, 2.4, 3.6, 4.1, 4.4при помощи пуговчатого зонда, кончик которого прижимали к стенке бороздки ипроводили от медиальной стороне зуба к дистальной.Проводили оценку интенсивности кровоточивости по следующей шкале:0 — если после зондирования кровоточивость отсутствует;1 — если кровоточивость появляется не ранее, чем через 30 секунд;2 —если кровоточивость возникает сразу после проведения зондирования илив пределах 30 секунд;3 — кровоточивость десны пациент отмечает при чистке зубов или приемепищи.Значение индекса рассчитывалось как частное, полученное от деления суммыпоказателей на число обследуемых зубов.Для интерпретации индекса кровоточивости использовались следующиекритерии оценки:0,1 – 1,0 —легкое воспаление;1,1 – 2,0 — средняя степень воспаления;2,1 – 3,0 — тяжелая степень воспаления.Глубину пародонтальных карманов определяли при помощи зондированияпуговчатым градуированным зондом от эмалево–цементного соединения до днакармана, при этом ориентируясь на ощущаемое сопротивление тканей пародонта.Зондирование пародонтальных карманов проводили в шести точках у каждого зубас вестибулярной, оральной, медиальной и дистальной контактных сторон.
Рабочуючасть зонда ориентировали параллельно продольной оси зуба в условиях39постоянного контакта с корнем.Среднюю глубину пародонтальных карманов определяли как сумму всехчисловых показаний, деленную на количество точек (рис.4).Рис.4 Методика определения глубины пародонтального карманаДля оценки степени подвижности зубов использовали шкалу Миллера вмодификации Фрезара (Miller M., Fleszar P., 1980):0 — зубы устойчивы, подвижность в пределах физиологической;I стeпeнь—смещение зуба относительно вертикальной оси не превышает1мм;II стeпeнь—смещение зуба на более чем 1 мм в вестибуло-оральномнаправлении, функция не нарушена;III стeпeнь—выражeнная подвижность в вeстибуло-оральном направлении, aтакже по вертикали, с нарушением функции.Значения изучаемых параметров определяли у каждого пациента на этапахдо лечения, через 1,5,3 и 9 месяцев после окончания лечения с цельюдинамического наблюдения за структурами пародонта на этапах активной иподдерживающейтерапии.Наданныхэтапахпациентампроводилосьстоматологическое обследование по традиционному алгоритму, осуществляласькоррекция индивидуальной гигиены полости рта, если в этом была необходимость.40Методы забора и транспортировки исследуемого материалаНа этапах до лечения, через 1,5 месяца и 9 месяцев после консервативноголечения, у пациентов был проведен забор содержимого пародонтальных кармановдля лабораторных микробиологических исследований.При взятии материала для выявления генетических маркеров (ПЦРдиагностика) использовали стандартный стерильный бумажный эндодонтическийштифт (файл №30), который помещали в пародонтальный карман на 30 секунд длясорбции жидкой части (рис.5), а затем переносили в пробирку типа Eppendorff с 0,5мл стерильного изотонического раствора хлорида натрия.рис.5 Методика взятия метериала для лабораторных исследованийПри взятии материала для бактериологического исследования использовалиаппликатор(стоматологическийбраш),споследующимпомещениемвполужидкую транспортную систему Эймса.Транспортировку материала в исследовательскую лабораторию проводили вспециальных термоконтейнерах при температуре не выше – 4 °С в течение 12 часов(как правило, 3–4 часа).412.3.
Рентгенологический метод исследованияС целью уточнения предварительного диагноза, a также для оценкисостояния костной ткани после лечения, проводилось рентгенологическоеобследование,включавшееортопантомограмму,атакжепроведениевнутриротовой прицельной рентгенограммы по показаниям.Цифровую ортопантомографию выполняли на аппарате STRATO 2000 Digital(Италия) (рис.6) и «Planmeca Proline ЕС» (Финляндия).рис.6 Ортопантомограф STRATO 2000 Digital, используемый в исследованииДлядиагностикианатомическиезаболеванийособенностизубныхпародонтарядов,обращалиналичиевниманиена:минерализованныхподдесневых зубных отложений, состояние и плотность костной ткани челюстей,наличие, степень и тип деструкции костной ткани, степень снижения высотымежальвеолярных перегородок, состояние фуркаций зубов и кортикальнойпластинки челюстей, a также на наличие нависающих краев пломб ирациональность искусственных коронок.422.4. Лабораторные методы исследованияВ соответствии с целью и задачами нашей диссертационной работы, быланеобходимостьэкспериментальнообосноватьвозможностьэффективногоклинического применения фитопрепаратов «Тонзинал» и «ЦМ-1» в базовомлечении пациентов с хроническим пародонтитом средней степени.Экспериментальную часть исследования проводили на базе лабораториимолекулярно-биологическихисследованийНИМСИинабазекафедрымикробиологии, вирусологии, иммунологии МГМСУ им.
А.И. Евдокимова.Автоматическое культивирование в режиме реального времениОсновой для проведения эксперимента являлась автоматическая системакультивирования микроорганизмов в режиме реального времени – биореактор«Реверс-Спиннер RTS-1» (BioSan, Латвия) (рис.7). Это термoстатирующееустрoйствo, где реализoван иннoвациoнный тип перемешивания, при кoтoрoмжидкoсть перемешивается за счет вращения прoбирки вoкруг свoей oси, благoдарячему прoисхoдит высoкoэффективнoе смешивание вихревoгo типа.
Данная системапредназначена для культивирoвания микрooрганизмoв и oценки их рoста в режимереальнoгo времени.Рис.7 Биореактор «Реверс-Спиннер RTS-1» (BioSan, Латвия), используемыйдля экспериментального исследования43Интерпретацию результатов проводили по изменению оптической плотности(OD) при длине волны λ=850 нм.Исследование динамики роста микроорганизмов проводили в несколькихпараллелях, что отражалось на графиках развития бактериальных популяций.Оценка контроля роста соответствующего вида бактерий отражалась в изменениипараметров оптической плотности, на основании которых была построена кривая.Все основные фазы роста микроорганизмов: адаптивная (лаг-фаза),экспоненциальная (лог-фаза), стационарная, отмирания, а также скорость приростабактериальныхпопуляцийбылииндивидуальныдлякаждоговидамикроорганизма. Перед проведением эксперимента (для чистой культуры)использовалась среда обогащения для микроорганизмов с целью подращиваниякультур для приготовления бактериальной взвеси.Для определения чувствительности выделенных штаммов применялисобственную модификацию метода серийных разведений, разработанную накафедремикробиологии,вирусологии,иммунологииМГМСУим.А.И.Евдокимова.Для культивирования микроорганизмов в биореакторе использовали жидкиепитательные среды и пробирки объемом 50 мл с мембранным фильтром и без него(TubeSpin, Швейцария).Для каждого эксперимента, отдельно, в стерильных пробирках объемом 15мл, готовили бактериальную взвесь в общем количестве 5 мл.
Оптическуюплотность полученной взвеси измеряли с помощью денситометра DEN-1B (BioSan,Латвия), которая для каждого эксперимента составила 0,5±0,3 mcf (1,5x108 КОЕ).Для экспериментального метода исследования, для оценки воздействияисследуемых образцов на микробную популяцию, были выбраны следующиеприоритетные пародонтопатогенные штаммы микробной биопленки, а такженаиболее часто встречающиеся представители резидентной флоры полости рта:44Пародонтопатогенные виды 1 порядка – «Красный комплекс» по Сокрански [204]:•A. actinomycetemcomitans•P. gingivalis•T.
forsythiaПародонтопатогенные виды 2 порядка – «Оранжевый комплекс» по Сокрански:•P. intermedia•F. nucleatumМикроаэрофильный стрептококк:S. constellatus•ДрожжеподобныегрибыродаCandidaspp.(кандида-ассоциированныйпародонтит): C. albicansВ каждом эксперименте проводили культивирование в нескольких разныхпараллелях (табл.1):Таблица 1.ПорядковыйномерпробиркиОписаниепробирки∑объем(мл)Бульон(мл)Взвесь Исследуемый(мл)образец20XX20201Х211712013 мл (в конц.210,018мг/1 мл)1x1 см221IVКонтрольотрицательныйКонтрольположительныйTNZ(Тонзинал)ЦM_1VЦM_2* **2012x1 см221VIЦM_3**2013x1 см221VIIЦM_5**2015x1 см221IIIIIIVIIIЦM_7*2017x1 см221*для культур: A. actinomycetemcomitans; P.
gingivalis, P. intermedia; F.nucleatum,C. albicans.** для культуры – S. Constellatus45Молекулярно-биологический методМолекулярно-биологический метод проводился с использованием техникиПЦР-диагностики для определения этиологически значимых приоритетныхпародонтопатогенных видов.Выделение ДНК бактерий пародонтопатогенной группы и постановкуполимеразнойцепнойреакцииосуществлялиметодомускореннойпробоподготовки с помощью реактива Реалекс. Амплификацию выделенногогенетического материала проводили в термоциклере «Терцик МС-2» (ДНКТехнология, Москва).
Клонированные образцы ДНК анализировали с помощьюэлектрофореза в 1,6% растворе агарозы после окрашивания бромистым этидием.Просмотр и фотографирование гелей проводили, используя трансиллюминаторТСР-25 М (Vilber Lourmat, Франция) при длине волны УФ-излучения 312 нм. Вслучае необходимости выделенную ДНК хранили при температуре –20°С.Качественную оценку частоты выявления маркерной ДНК пародонтопатогенов 1 ичастипародонтопатогенов2порядкапроводилиспомощьюсистемы«МультиДент-5» (ООО НПФ «Генлаб», Россия).
Использование данного наборапредполагает выявление 5 основных видов пародонтопатогенных бактерий:Аggregatibacter actinomycetemcommitans, Porphyromonas gingivalis, Prevotellaintermedia, Tannerella forsythia, Treponema denticola. Для выявления остальныхпародонтопатогенов использовали систему «Мicro-IDent®plus» (Hain Lifescience,Германия), использующую принцип обратной гибридизации.Бактериологический методБактериологическийметодисследованияпроводилсясцельюоценкиколичественной динамики определенных микробных видов (степени микробнойобсеменённости) в воспалительном очаге.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
