Диссертация (1173216), страница 9
Текст из файла (страница 9)
К таким особенностям можно отнести:- высокую инфекционную и воспалительную заболеваемость, наличиесопутствующих заболеваний, наследственную отягощенность;- нарушение менструальной, снижение генеративной и изменениеполовой функций;- длительный гинекологический анамнез, проявление в различнойстепени болевого синдрома, бесплодие;- длительное и неэффективное консервативное лечение.59ГЛАВА4ОЦЕНКАЛИМФОЦИТОВЦИТОТОКСИЧЕСКОГОПЕРИФЕРИЧЕСКОЙКРОВИПОТЕНЦИАЛАУБОЛЬНЫХСЭНДОМЕТРИОМАМИХарактернарушенийиммунныхмеханизмовприэндометриозенепосредственно связан с изменением антирепликативной функции иммуннойсистемы, проявляющейся в снижении цитотоксичности лимфоцитов и ихспособности элиминировать патологически измененные клетки.Мы проанализировали содержание основных субпопуляций лимфоцитовпериферической крови у пациенток с эндометриомами, обследованных нами дооперативного лечения (Таблица 4.1)Таблица 14 - Содержание основных субпопуляций лимфоцитов впериферической крови обследованных женщин (М±m)Группы сравненияПоказательКонтрольЭндометриомы(n = 30)(n = 118)CD3+(109/л)1,19 ± 0,011,10 ± 0,03CD4+(109/л)0,78 ± 0,040,69 ± 0,08CD8+(109/л)0,52 ± 0,050,41 ± 0,06*CD16+(109/л)0,28 ± 0,010,24 ± 0,04Примечание: *достоверность различий по отношению к контролю р<0,05Полученные результаты свидетельствуют о том, что у больных сэндометриомами наблюдаются определенные изменения популяционногосостава лимфоцитов периферической крови.Так, при сравнении особенностей структуры лимфоцитарного звенапериферическойкровиобследованныхбылаотмеченатенденциякуменьшению общего пула зрелых Т-клеток (CD3+) и установленонезначительное по отношению к контролю снижение уровня снижение60уровня CD4+ лимфоцитов.
В то же время было выявлено статистическизначимое уменьшение количества лимфоцитов с фенотипом CD8+ (p>0,05).Отмечена тенденция к снижению содержания CD16+ лимфоцитов.Полученные результаты позволяют предположить, что иммунныесдвиги у пациенток с эндометриомами связаны со снижением объемасупрессорно-цитотоксической субпопуляции циркулирующих клеток и,соответственно, уменьшением их цитотоксической активности.Величинаиммунорегуляторногоиндекса(Т-хелперы/Т-цитотоксические) у пациенток с эндометриомами составила 1,7±0,2, против1,5±0,3 у представительниц контрольной группы.Для проведения детальной качественной и количественной оценкицитотоксическогопотенциалалимфоцитовпериферическойкровиобследованных нами пациенток с эндометриомами использовали неинвазивнуютехнологию количественного фазового имиджинга.Анализ фазово-интерференционных портретов нативных лимфоцитовпериферической крови выявил характерные морфологические особенностиклеток с фенотипом CD4+ и CD8+.Напредставленныхтопограммахи3D-реконструкцияхживыхфункционирующих клеток четко определяются ядра лимфоцитов округлойформы с неоднородной структурой, участками большей или меньшейплотности внутриядерного хроматина (Рис.4).
Ширина ободка голубого цветавокругядраотражаетособенностицитоплазматическойзоныклетки,дифференцируя узко- или широко-плазменные лимфоциты.На основе изменения оптической плотности различных участков широкойцитоплазматической зоны можно выявить наличие зернистости.В таблице 14 представлены результаты морфоденситометрическогоанализа средних по популяции параметров CD4+ и CD8+ лимфоцитов.61Топограмма3D-реконструкцияРисунок 4 - Фазово-интерференционные портреты узкоплазменного иширокоплазменного Т-лимфоцита периферической крови (интерференционноеполе 20Х20 мкм).Как видно из данных, представленных в таблице, средние в популяцииморфоденситометрические показатели диаметра, периметра, площади, фазовойтолщины (высоты) и объема CD4+лимфоцитов по сравнению с CD8позитивными клетками в группе контроля имели тенденцию к снижению.При этом показатель FAN у CD4+ лимфоцитов оказался практически на5% ниже, чем у клеток с фенотипом CD8+ (1,88 против 1,98), что позволяетпредполагатьналичиеболеевысокойсубпопуляции цитотоксических лимфоцитов.функциональнойактивностив62Таблица 14 - Морфоденситометрические параметры лимфоцитов с фенотипомCD4+ и CD8+ (М±σ)Анализируемые параметры (M±σ)Группы сравнения Диаметр,Периметр,Высота,Площадь,Объем,мкммкммкм2мкм3мкмКонтрольCD4+ 6,42±0,49 18,35±1,41 1,81±0,2925,98±3,12 22,95±4,78CD8+ 6,74±0,85 18,93±3,12 1,73±0,3129,15±6,03 26,91±5,12CD4+ 6,73±0,92 18,95±2,28 1,64±0,23* 27,64±3,16 24,47±3,12ЭндометриомыCD8+ 6,25±0,98 19,42±2,46 1,77±0,15 30,72±4,69 27,11±5,34Примечание: * - p < 0,05 по сравнению с показателями контроляУпациентоксэндометриомами,напротив,основныеморфоденситометрические параметры CD4 позитивных лимфоцитов (диаметр,периметриплощадьклеток)незначительнопревышалирезультатыморфометрии лимфоцитов контрольной группы (p>0,05).
В то же время фазоваявысота этих клеток снижалась более чем на 9%.В популяции цитотоксических лимфоцитов такие морфометрическиепоказатели как диаметр, периметр и площадь оказались ниже контрольныхзначений (p>0,05). Тенденция к увеличению зарегистрирована для величинфазовой высоты и объема.ПоказательFANклетоквпопуляцииCD4+упациентоксэндометриомами составил 2,03 (против 1,88 в контрольной группе). СнижениевеличиныFANуCD8+лимфоцитовдо1,91(против1,98)можетсвидетельствовать о подавлении функциональной активности цитотоксическихклеток.Для исследования оптических свойств примембранной области клеточнойцитоплазмы CD4+ и CD8+ лимфоцитов использовали метод интегральныхфункций.
Анализировали показатели площади (Scyt) и фазовой толщины (Hcyt)примембранной зоны тонкой цитоплазмы, в которой предполагалось наличиегранул (Рис. 5 и 6).63АВРисунок 5 - Гистограммы распределения CD4+ (А) и CD8+ (В) лимфоцитовпериферической крови c по величинам площади (Scyt) примембранной зоныцитоплазмы. По оси абсцисс – величина площади примембранной зоныцитоплазмы (мкм2); по оси ординат – количество клеток.64АВРисунок 6 - Гистограммы распределения CD4+ (А) и CD8+ (В) лимфоцитовпериферической крови c по величинам фазовой толщины (Hcyt) примембраннойзоныцитоплазмы.Поосиабсцисс–величинафазовойтолщиныпримембранной зоны цитоплазмы (нм); по оси ординат – количество клеток.Является очевидным, что гистограмма распределения CD4+клеток по65величине Scyt подчиняется нормальному закону и имеет выраженнуюунимодальнуюсимметричнуюформу.УнимодальныйхарактеруCD4+лимфоцитов сохраняется и в гистограмме по величине Hcyt, однако приэтом наблюдается небольшая правосторонняя асимметричность.В гистограммах распределения популяции клеток с фенотипом CD8+ повеличинам Scyt и Hcyt распределение имеет четко выраженную бимодальность,отражаяразнородностьциркулирующейпопуляциицитотоксическихлимфоцитов и наличие в пуле 2 групп клеток, отличающихся как величинамиHcyt, так и значениями площади ScytВ таблице 15 приведены средние значения фазовой толщины Hcyt иплощади Scyt зоны тонкой цитоплазмы цитотоксических лимфоцитов уобследованных пациенток.Таблица 15 - Показатели фазовой толщины Hcyt и площади Scyt зонытонкой цитоплазмы цитотоксических лимфоцитовГруппы сравненияАнализируемые параметрыФазовая толщинаПлощадь(Hcyt), мкм(Scyt), мкм2Соматически здоровые женщины(контроль)0,63±0,0837,5±7,25Пациентки с эндометриомами0,52±0,09*34,9±6,83Примечание: * - p < 0,05 по сравнению с показателями контроляУстановлено, что процент цитотоксических CD8+ лимфоцитов сналичием гранул в примембранной зоне тонкой цитоплазмы в группе контролясоставил 37,1±5,15%, а у больных с эндометриомами 29,8±6,34% (p<0,005).Таким образом, применение неинвазивной и безреагентной технологииДанные опубликованы в статье Лифенко Р.А.
Возможности и перспективы применения диагностическойтехнологии QPI (количественный фазовый имиджинг) в акушерстве и гинекологии. / Р.А. Лифенко,О.С. Попова, А.Г. Топузов, В.Д. Звержховский /Альманах клинической медицины. - 2018. - Т.46, №8. –С.592-598.66QPI позволило установить, что в условиях физиологической нормы популяцияCD4+ лимфоцитов является достаточно однородной по анализируемымморфоденситометрическим параметрам, в цитоплазме клеток не выявленоналичиегранул.ПопуляцияCD8+лимфоцитов,напротив,являетсягетерогенной: практически 37% клеток являются перфорин-позитивными.
Длябольных с эндометриомами характерно снижение количества лимфоцитов,содержащихвцитоплазмеперфориновыегранулы.Данныйфактсвидетельствует о подавлении функциональной активности CD8 позитивныхклеток.67ГЛАВА 5. ОЦЕНКА ЭФФЕКТИВНОСТИ МЕДИКАМЕНТОЗНОЙТЕРАПИИ ДЛЯ ПРОФИЛАКТИКИ РЕЦИДИВА ЭНДОМЕТРИОМПри оценке эффективности лечения обследованных больных и выявлениириска рецидивирования патологического процесса наше основное вниманиебыло сосредоточено на характеристике общей популяции Т-лимфоцитов сфенотипом CD3+.При сравнительном анализе морфоденситометрических показателейCD3+лимфоцитов у здоровых женщин вне беременности, составившихконтрольную группу, и пациенток с эндометриомами, обследованных допроведения хирургического лечения, обнаружено увеличение средних ванализируемой популяции значений диаметра, периметра, площади и объемаCD3+клеток (Таблица 16).Как видно из представленных данных средний в популяции диаметрCD3+лимфоцитов у пациенток с эндометриомами до проведения оперативноголечения превышал аналогичный показатель контрольной группы на 23,5%.Средне популяционные значения периметра циркулирующих клеток посравнению с контролем были увеличены на 12,8%, а величины фазового объемаклеток – на 8,7%.Среднепопуляционные значения площади CD3+клеток у пациенток сэндометриомами имели тенденцию к снижению 38,14 мкм2 против 41,56 мкм2(p>0,05).
А величина средней в популяции фазовой толщина ядра (фазоваявысота) оказалась статистически значимо сниженной на 16,2% (2,03 мкмпротив 2,42 мкм, p<0,05).Расчетный показатель функционального состояния ядерных структурлимфоцитов (FAN - functional activity of the nucleus) был оценен дляхарактеристики ядерного полиморфизма CD3+клеток.Величина FAN CD3+Т лимфоцитов статистически значимо была выше убольных с эндометриомами (0,898 против 0,783, p<0,05).68Таблица 16 - Морфоденситометрические параметры Т-лимфоцитов (CD3+)периферической крови женщин в контрольной группе и пациенток сэндометриомами до проведения оперативного леченияМорфоденситометрические параметрыГруппадиаметрпериметр(Д, мкм)(P, мкм)max9,4336,253,5958,1359,24Соматическиmin5,2216,411,4327,4221,38здоровыеMean7,0224,152,4241,5639,96женщиныSD0,545,110,449,1210,15(контроль)Median6,8124,132,4635,1541,12FANБольные сэндометриомамивысотаплощадь(H, мкм) (A, мкм2)объем(V, мкм3)0,783max10,3538,023,1562,3465,88min6,9517,131,1219,8934,45Mean8,67*27,24*2,03*38,1443,44SD0,724,960,388,1512,38Median7,2625,622,0137,6641,65FAN0,898*Примечание: * - достоверность различий между группами пациенток ипоказателями практически здоровых людей (p<0,05)На рисунках 7 – 13 приведены гистограммы распределения CD3+лимфоцитов по величине их размерных морфоденситометрических показателейв процессе динамического наблюдения пациенток с эндометриомами,получавших или не получавших терапию гестагенами (диеногестом) впослеоперационном периоде.6970Histogram of D60605050404030302020101004,04,55,05,56,06,57,07,58,08,59,09,510,010,5011,0121416182022D242628303234PDP70706060505040403030202010100051,01,21,41,61,82,02,22,42,62,83,01015202530354045505560657075803,2AHHA807060504030201000102030405060708090VVРисунок 7 – Гистограммный анализ лимфоцитов периферической кровипациенток с эндометриомами, обследованных до проведения оперативноголечения (Группа 1) по величине морфоденситометрических показателей:диаметра (D), периметра (P), высоты (фазовой толщины) (H), площади (A) иобъема (V).
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
