Диссертация (1173216), страница 12
Текст из файла (страница 12)
Другие,87напротив, указывают на отсутствие каких-либо существенных различийиммунологических показателей у пациенток с ЭМ в отличие от практическиздоровых женщин [29]. Однако большинство исследователей и на системном,и на локальном уровнях, отмечают у больных эндометриозом нарушениефункции иммунного надзора, связанное с изменением цитотоксическойактивности клеток: снижаются количественные показатели и качественныйуровеньцитотоксичности,определяемыйсодержаниембиологическиактивных перфорина, гранзимов, гранулизинов и других компонентов влитических гранулах, способностью NK дегранулировать (т.е.
выбрасыватьперфорин и гранзимы на поверхность инфицированных или опухолевыхклеток-мишеней), а также киллингом мишеней с помощью механизмов, несвязанных с дегрануляцией [2, 62, 81, 122, 140, 150].Дляоценкицитотоксическойактивностилимфоцитовприэндометриомах мы применили инновационный подход – неинвазивную ибезреагентнуютехнологиюколичественногофазовогоимиджинга,основанную на принципах когерентной интерферометрии.Известно, что цитотоксичность клеток обеспечивают секреторныелизосомы лимфоцитов, содержащие перфорин и гранзимы, высвобождениекоторыхприводитсекретируемыймеханизмомкиндукцииапоптозагранул-опосредованныйцитотоксическихклеток-мишеней.путьявляетсялимфоцитами.
ПриТакойключевымконтактемеждуэффектором и мишенью образуется иммунологический синапс, которыйприводит к экзоцитарному переносу секреторных гранул и высвобождениюих содержимого: проапоптотических сериновых протеаз, гранзимов иперфорина. Всинапсеполимеризованныйперфорин образуеттрансмембранную пору, которая позволяет доставить гранзимы в цитозоль,где они инициируют различные пути апоптотической гибели.
Снижениеуровня перфорина в литических гранулах клеток в сочетании с нарушеннойподвижностью литических гранул приводит к неспособности доставлять88апоптоз-индуцирующий гранзим к клеткам-мишеням и к ингибированиюцитотоксичности лимфоцитов [62, 81, 108, 122, 140, 150].По нашему мнению, возможность оперативной и количественнойоценки цитотоксического потенциала лимфоцитов в рамках выявленияпроцента клеток, содержащих перфорировые гранулы, имеет важноедиагностическое и прогностическое значение.Так,полученныенамирезультатыпоказали,чтовусловияхфизиологической нормы популяция CD4+ лимфоцитов является достаточнооднородной по анализируемым морфоденситометрическим параметрам.Установлено отсутствие гранул в данной популяции клеток. При этом у 37%лимфоцитов с фенотипом CD8+ выявлены гранулы в примембраннойобласти,которыецитотоксическойсодержатперфоринактивностиклетки.иотвечаютПолученныезареализациюрезультатенепротиворечат данным других исследователей [81, 140, 150].Снижение у пациенток с эндометриомами количества лимфоцитов сфенотипом CD8+, обладающих перфориновым гранулярным аппаратом,можетсвидетельствоватьоподавлениицитотоксическойактивностилимфоцитов и являться возможным объяснением одной из причинпрогрессирования и рецидивирования эндометриом [62, 87, 103, 122, 149,150].Однимизинформативныхпоказателейморфофункциональногосостояния клетки является ее ядро.
Изменения в архитектонике ядра, такиекак размер, форма, выделение ядрышек, структура хроматина, элементыядерного матрикса, особенности топографии хромосомных территорий и др.,давно привлекают внимание исследователей, представляя собой важнуюобласть фундаментальных знаний [8, 10, 71, 91].Интерфазныйхроматинсчитаетсясвоеобразнымбиосенсором,физиологическим носителем генетической и эпигенетической информации,датчикомраннихизмененийфункциональногосостоянияклетки.Характеризуя те или иные структурные перестройки ядерного хроматина,89исследователь анализирует диагностическую информация в диапазоне ототдельных молекул до клетки, ткани и всего организма в целом, определяеттяжестьпатологическогопроцесса,прогнозируетвозможныйисходзаболевания.Количественный показатель содержания хроматина в клетки –величина постоянная и не зависит от внешних факторов.
Гетерохроматинрасполагается в ядре равномерно с эухроматином, или формирует крупныеконгломератыпопериферииивцентреядра.Сложнейшиеконформационные превращения ядерного хроматина, отражающие уровеньактивации ядросодержащей клетки, в силу своих физико-химическихособенностей, обладают эффектом анизотропии. Именно по величинеанизотропии,количественнооцениваемойметодомQPI,мыможемоценивать структурно-объемные изменения ядерного хроматина, которыйсодержит всю генетическую информацию клетки. В процессе активацииклеток трансформируются и конформационные свойства хроматина их ядер.Так, является установленным, что коэффициент преломления различныхсубклеточных элементов, в среднем, составляет 1,088.
Этот коэффициентможет меняться, отражая конформационные изменения молекул. Изменениеразмеров образующихся комплексов белков, РНК и ДНК находит отражениев изменении коэффициента преломления внутриклеточной среды.Известно, что степень конденсации хроматина объективно отражаетсостояние клеточного функционала.
Так, конденсированный хроматинассоциируют с низкой синтетической активностью клетки, а появление вструктуре ядра его диффузной формы – с ростом метаболизма в виде синтезаДНК. При этом оптическими показателями такого состояния клеткиявляются снижение показателя преломления и анизотропиии ядра, которыепозволяют количественно оценить особенности перехода в ядерной системегетерохроматина в эухроматин [12, 25, 51, 97, 105].Известно,чтовинтерфазномядреразвернутыехромосомырасполагаются не хаотично, а строго упорядоченно, эти компактные90образованияполучилиназвание«хромосомныетерритории».Такаяорганизация хромосомы в трехмерном пространстве ядра необходима нетолько для того, чтобы при митозе происходила сегрегация хромосом и ихобособление от соседей, но и для упорядочения процессов репликации итранскрипции хроматина.Текстурахроматинанеобычайнодинамичнаипредставленапространственно отличающимися областями с различными уровнямиуплотнения хроматина.
Флуктуации хроматиновой конденсации связаны сизменением генов внутри хромосомных территорий, изменением ихвзаимного расположения, а также позиционированием п отношению к центруядра.Дляосуществленияэтихпроцессовсуществуеткаркаснаявнутриядерная система, которая служит объединяющей основой для всехядерных компонентов: хроматина, ядрышек, ядерной оболочки.В этом контексте особое значение приобретает анализ взаимногопространственного расположения территорий интерфазного хроматина, вкоторых располагаются гены, что может оказаться достаточно важным иинформативным, как для оценки морфофункционального состояния клетки вцелом, так и для использования в диагностических целях для раннеговыявления разнообразных заболеваний [12, 25, 51, 97, 105].Оценкаособенностейконформационнойперестройкиядерногохроматина в процессе активации клетки, с учетом изменений его физическихи оптических свойств, требует привлечения новых исследовательскихподходов для изучения топографии и структуры хромосомных территорий.Количественныйфазовыйимиджинг(QPI)ипредставляетсобойинновационную технологию молекулярно-клеточного анализа [12, 25].Прижизненная визуализация дает информацию о форме и объемеклеток, изменения в которых отражают изменения в клеточном цикле иинициирование механизмов гибели клеток.
Микроскопия чувствительна квращательным и колебательным молекулярным переходам, а также к91межмолекулярным колебаниям, предоставляет дополнительную информациюо клетках, такую как содержание белка, липидов и нуклеиновых кислот, и, вчастности,спектральныесигнатуры,связанныесоструктурнымиизменениями в молекулах. В качестве основного критерия функциональногосостояния клетки мы использовали фазовую толщину (высоту) ядра, котораязависит напрямую от конформационного состояния ядерного хроматина ипозволяет косвенно судить об функциональной активности клетки. То естьможет быть использована для оценки уровня иммунных нарушений с учетомотдельныхклеточныхсубпопуляций,обеспечивающихподдержаниеиммунного гомеостаза в организме [12, 25].Мыиспользовалибезреагентнуютехнологиюморфоденситометрической сегментации для детальной оценки степенидекомпактизации ядерного хроматина по динамике следующих показателей:относительнойинтенсивностисегментовядра(∆I);относительногорасстояния (∆L) между центрами выделенных сегментов; количества (N)сегментов по площади ядра и периметра (P) ядер в пикселях (пикс).Установлено, что величина этих показателей существенно различается длясостояния физиологической нормы и при прогрессировании патологическогопроцесса, в данном случае, эндометриом.При анализе полученных в течение послеоперационного мониторингаморфоденситометрических показателей ядерного хроматина лимфоцитовпериферической крови женщин с эндометриомами установлено, чтопрогрессирование заболевания связано с конкретными изменениями ядерныхструктурТ-лимфоцитов.Показано,чтоколичественныекритерииконформационной перестройки хроматина можно рассматривать в качествеобъективных критериев ранней диагностики рецидива патологическогопроцесса и оценки адекватности и эффективности проводимого лечения.Основными задачами, стоящими перед специалистами, являютсяудаление эндометриоидных очагов с учетом возможного сохранениярепродуктивной функции женщины, уменьшение болевого синдрома,92терапия бесплодия, предотвращение прогрессирования и рецидивированияпатологического процесса.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
