Диссертация (1154691), страница 16
Текст из файла (страница 16)
Шутров и др., 2016]Для раскрытия механизмов действия АТПКЛ на микроциркуляциюпроводилиизучениееедистантныхэффектовнамикрокровоток,морфологических изменений аутотрансплантированного кожного лоскута уживотных без повреждения седалищного нерва, а также концентрацийпроангиогенных факторов в сыворотке крови при нейрорафии седалищного нервапод влиянием различных видов стимулирующего воздействия. Кроме того, сцелью исследования регенеративных эффектов АТПКЛ, которые описаны впредыдущих главах, исследовали динамику концентраций нейроспецифическихбелков в сыворотке крови - маркеров повреждения и регенерации нервной ткани.5.1 Дистантные эффекты аутотрансплантации полнослойного кожноголоскута на микроциркуляцию у животных без повреждения нервного ствола[А.Н.
Иванов и др., 2015с]С целью установления роли травматизации мягких тканей при выполнениинейрорафии на состояние микрокровотока было изучено влияние оперативноговмешательства соответствующего объема без повреждения седалищного нерва.Обнаружено, что на 7-е сутки после операции в объеме доступа к седалищномунерву перфузионный показатель не имеет достоверных отличий от контрольныхзначений (табл. 15). При анализе активных механизмов контроля состояниямикроциркуляторного русла было установлено, что нормированные амплитудыэндотелиальных, нейрогенных и миогенных колебаний значимых отличий присравнении с контрольными показателями не имеют (табл.
15).8990Таблица 15Микроциркуляторные показатели тыльной поверхности стопы оперированнойконечности у ложнооперированных животных на 7-е суткипосле оперативного вмешательстваГруппаКонтроль(n=15)11.6Ложнооперированныеживотные (n=12)12.8 (11.8; 14.8)(10.1;13.3)p1=0.202023.13.01(10.33;17.93)16.84 (11.27;19.3)Эндотелиальных10.04 (9.22;10.8)Нейрогенных11.3(10.52;12.62)7.20 (6.75;7.73)Миогенных6.55(5.00;7.88)ПоказателиНормированныеамплитуды колебаний,отн. ед.Показатель перфузии,перф. ед.p1=0.071424.p1=0.075892.p1=0.107698.Примечания: в каждом случае приведены медиана, верхний и нижний квартили;р1 – по сравнению с контролем.Такимобразом,микроциркуляторныхотсутствиепоказателейзначимыхна7-еизмененийсуткипослеисследуемыхосуществленияоперативного доступа к седалищному нерву без его пересечения свидетельствуето том, что возникающая при оперативном вмешательстве травматизация тканей невлияет на механизм реализации регенераторного эффекта АТПКЛ.Для оценки влияния аутотрансплантированного кожного лоскута намикроциркуляцию в условиях сохраненной иннервации были проведеныисследования состояния микроциркуляторного русла у животных после АТПКЛбез повреждения нерва.
При этом для выявления локальных и дистантныхсосудистыхреакцийуживотныхпроводилиоценкуЛДФ-грамм,зарегистрированных в предполагаемой зоне аутотрансплантации (межлопаточнаяобласть) и на коже тыльной поверхности стопы до аутотрансплантации и через 7и 21 сут. после операции.При осмотре области аутотрансплантации на 7-е сутки экспериментаотмечали небольшое округлое возвышение над остальной поверхностью кожи,9091соответствующее локализации кожного лоскута.
Края операционной раны былиадаптированы, послеоперационный шов не имел признаков воспаления.В результате проведенных исследований было установлено, что в областиаутотрансплантациина7-есуткипослеоперативноговмешательстваувеличивалась перфузия кожи. Одновременно с этим происходили изменения вработе активных механизмов контроля состояния микроциркуляторного русла, вчастности регистрировали достоверное увеличение нормированных амплитуднейрогенных и миогенных колебаний (табл. 16).
В тоже время на коже тыльнойповерхностистопырегистрировалистатистическизначимоеувеличениеперфузионного показателя на 11,6%. При этом нормированные амплитудыэндотелиальных и миогенных колебаний отличий от контрольных показателей неимели, однако значимо увеличивались нормированные амплитуды нейрогенныхколебаний (табл. 17).На 21-е сутки после аутотрансплантации у животных в межлопаточнойобласти регистрировали аналогичное 7-м суткам статистически значимоеповышение перфузионного показателя относительно контроля.
Нормированныеамплитуды эндотелиальных колебаний отличий от контроля и аналогичныхпоказателей на 7-е сутки не имели. При этом нормированные амплитудынейрогенныхимиогенныхосцилляцийхарактеризовалисьстатистическизначимым увеличением относительно контроля. Отличий от аналогичныхпараметров на 7-е сутки не отмечали (табл.16).9192Таблица 16Изменения микроциркуляторных параметров в области аутотрансплантацииу животных без повреждения седалищного нерваГруппаПоказателиНормированные амплитудыколебаний, отн. ед.Показатель перфузии,перф.
ед.Примечания:вКонтроль(n=15)10.25(9.4;11.1)После аутотрансплантации кожноголоскута (n=15)7 сутки21 сутки18.9 (16.4;21.1) 17.65 (16.2;18.55)p1=0.000028p1=0.000017p2=0.370845Эндотелиальных18.7(16.4;22.5)15.9 (12.5;17.9)p1=0.06047016.1 (14.69;17.3)p1=0.129188p2=0.506721Нейрогенных6.03(5.48;6.69)11.5 (7.96;12.7)p1=0,00010312.6 (10.28;18.17)p1=0.000017p2=0.2365856.19(5.89;6.88)7.79 (6.52;9.67)p1=0.0036617.57 (6.42;11.64)p1=0.042189p2=0.976970приведенымедиана,Миогенныхкаждомслучаеверхнийинижнийквартили;p1, p2 – по сравнению с контролем и 7 сутками после АТПКЛ соответственно.Накожетыльнойповерхностистопына21-есуткипослеаутотрансплантации перфузионный показатель сохранял лишь тенденцию кувеличению по сравнению с контролем, не достигающую статистическойзначимости.
Отличий перфузии по сравнению со значениями на 7-е сутки неотмечали. Нормированные амплитуды эндотелиальных и миогенных колебанийотличий при сравнении с контролем и значениями 7-х суток не имели.Нормированные амплитуды нейрогенных колебаний статистически значимоснижались относительно значений на 7-е сутки (табл.
17).9293Таблица 17Изменения микроциркуляторных параметров кожи тыльной поверхности стопыпосле аутотрансплантации животным без повреждения седалищного нерваГруппаПоказателиНормированные амплитудыколебаний, отн. ед.Показатель перфузии,перф. ед.ЭндотелиальныхНейрогенныхМиогенныхКонтроль(n=15)11.6(10.1;13.3)После аутотрансплантациикожного лоскута (n=15)7 сутки21 сутки12.95(12.2;15.5) 13.5 (11.1;14.45)p1=0.023271p1=0.118421p2=0.35561213.01(10.3;17.9)13.3 (12.2; 17.6)p1=0.47923913.76 (10.9;18.1)p1=0.574701p2=0.93098811.3(10.5;12.6)14.4(12.9;20.15)p1=0.01795510.8 (9.35;13.26)p1=0.778413p2=0.0530996.46(5.01;7.88)7.71 (5.47;8.15)p1=0.2319016.58 (5.78;8.73)p1=0.751117p2=0.750832Примечания: те же что и в табл.
16.Таким образом, в условиях сохраненной иннервации травматизация тканей,при оперативном вмешательстве, к 7-м суткам не оказывает влияния на состояниемикроциркуляторныхпоказателейвтканяхоперированнойконечности,а также не влияет на механизм реализации регенеративного эффекта АТПКЛ.ДистантноестимулирующееосуществляетсяпосредствомвлияниесниженияАТПКЛнанейрогенногомикроциркуляциютонусасосудов.Нивелирование эффекта происходит к 21-м суткам эксперимента. В тоже время,согласно данным, представленным в главе 3, АТПКЛ оказывает дистантноевлияние на микрокровоток и в условиях нарушенной иннервации, при этомстимулирующий эффект сохраняется до 21-х суток.93945.2 Морфологические изменения полнослойного кожного лоскутапри его подкожной трансплантации [А.Н. Иванов и др., 2016с]Для выявления особенностей клеточных реакций при АТПКЛ и ихпотенциальной роли в реализации регенеративных эффектов на нервную ткань,а также дистантного стимулирующего действия на микроциркуляцию былипроанализированыгистологическиепрепаратызоныаутотрансплантации,включающие имплантированный кожный лоскут и окружающие его ткани,произведен подсчет клеточных элементов трансплантата при увеличении х400.При морфологическом исследовании было установлено, что на 7-е суткипосле аутотрансплантации в тканях, прилежащих к кожному лоскуту отмечалосьполнокровие сосудов как артериального, так и венозного русла.
Обнаруживалисьмелкоочаговые кровоизлияния. Вокруг аутотрансплантата имелось большоеколичествофибробластов.Увсехживотныхструктураэпидермисааутотрансплантата претерпевала значительные дегенеративные изменения –отмечались участки некроза, кератоза, истончения до 1-2-х рядов клеток.Дерма аутотрансплантата частично сохраняла свое типичное гистологическоестроение - содержала неизмененные волосяные фолликулы, сальные и потовыежелезы.Вотдельныхучасткахдермыобнаруживалисьмелкоочаговыекровоизлияния. При анализе клеточных популяций дермы обнаруживалидостоверное увеличение по сравнению с контролем количества фибробластов(табл.
18). При этом количество фиброцитов не претерпевало значимыхизменений по сравнению с контролем. Вместе с тем, отмечалось увеличениесодержания в дерме лейкоцитов по сравнению с контрольными препаратами.Отличительной особенностью являлось увеличение количества эозинофилов всреднем до 6 клеток в поле зрения. Также обнаруживались единичныенейтрофилы. Среди агранулоцитов в дерме аутотрансплантата были выявленыклетки моноцитарно-макрофагального ряда – гистиоциты и макрофаги, а такжелимфоциты (табл. 18).9495В ходе морфологического анализа препаратов, полученных на 21-е суткипосле оперативного вмешательства, было обнаружено, что в перифокальной зонеаутотрансплантата имелось полнокровие сосудов артериального и венозногорусла.
В подкожной клетчатке в зоне аутотрансплантации отмечалось разрастаниебурой жировой ткани. Аутотрансплантат был окружен рыхлой соединительнойтканью с большим количеством фибробластических элементов, содержащеймножество тонкостенных полнокровных сосудов. Диффузно располагающиесяскопления лейкоцитов в перифокальной зоне трансплантата были представленыкак гранулоцитами (единичными нейтрофилами и эозинофилами в количестведо 5 штук в поле зрения), так и агранулоцитами (лимфоцитами, плазматическимклетками, единичными гистиоцитами и макрофагами).Таблица 18Динамика клеточных популяций дермы аутотрансплантата(количество клеток в одном поле зрения при увеличении х 400)АТПКЛ7 сутки (n=7)21 сутки (n=8)121 (108; 143)104 (60; 182)Фибробластыр1=0.000248р1=0.000077р2=0.31705918 (13; 23)25 (17; 32)21 (14; 32)Фиброцитыр1=0.417888р1=0.558185р2=0.7962520 (0; 0)2 (1; 5)1 (0; 4)Нейтрофилыр1=0.018617р1=0.005414р2=0.6282990 (0; 0)6 (4; 8)3 (2; 8)Эозинофилыр1=0.000248р1=0.000016р2=0.3329220 (0; 2)8 (5; 12)13 (5; 19)Лимфоцитыр1=0.00908р1=0.000034р2=0.2200320 (0; 0)3 (1; 7)1 (1; 3)Макрофагир1=0.012162р1=0.001393р2=0.401388Примечания: приведены медиана, верхний и нижний квартили; p1, p2 – по сравнениюПопуляции клетокКонтроль(n=12)42 (27; 52)с контролем и 7 сутками после АТПКЛ.9596К 21-м суткам эксперимента обнаружено, что аутотрансплантат истончался.У двух животных данной группы в нем отсутствовал эпидермис.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
