Диссертация (1154691), страница 17
Текст из файла (страница 17)
У 30% животныхаутотрансплантат имел участки с сохраненным, но резко истонченнымэпидермисомиучастки,гдеэпидермисотсутствовал.Вучасткахаутотрансплантата, не имеющих эпидермиса, обнаруживались единичныемногоядерные клетки или гранулемы, состоящие в основном из многоядерныхклеток, а также небольшого количества гистиоцитов, лимфоцитов, эозинофилов.У 60% животных в составе аутотрансплантата были различимы резкоистонченный эпидермис и дерма. При этом в отдельных участках эпидермисаотмечались дегенеративные изменения с присутствием гигантских многоядерныхклеток, гистиоцитов, эозинофилов.
Толщина дермы аутотрансплантата впрепаратах значительно варьировала. В дерме присутствовали полнокровныесосуды артериального и венозного русла. В некоторых сосудах отмечаласьактивация и пролиферация эндотелиальных клеток. В составе дермы иногдаобнаруживались дегенерирующие или неизмененные волосяные фолликулы.В некоторых дегенерирующих волосяных фолликулах присутствовали гигантскиемногоядерные клетки. Кроме того, в дерме формировались гранулемы,образованные гигантскими многоядерными клетками. При анализе клеточныхпопуляций дермы было выявлено, что количество фибробластов значительнопревышало контрольные значения (табл. 18). При этом количество фиброцитов неимелостатистическизначимыхразличийсконтролем(табл.18).Дерма аутотрансплантата была умерено инфильтрирована лейкоцитами, средикоторыхвстречалисьединичныенейтрофилы,сохранялосьповышенноесодержание эозинофилов – в среднем 3 в поле зрения (табл.
18). Также в составелейкоцитарной инфильтрации дермы присутствовали лимфоциты и единичныеклетки моноцитарно-макрофагального ряда. Следует отметить, что клеточныепопуляции дермы аутотрансплантата не претерпевали значимой динамикипо сравнению с 7-ми сутками эксперимента (табл. 18).9697Таким образом, при аутотрансплантации кожного лоскута отмечаютсяследующие морфологические реакции – истончение аутотрансплантата сдеградацией его эпидермиса и изменение состава клеточных популяций дермы.Истончение аутотрансплантата по времени совпадает с завершением дистантногостимулирующего действия АТПКЛ на микроциркуляцию, что позволяетпредполагать в качестве факторов, системно влияющих на микрокровоток,вещества кожного лоскута. Изменения состава клеточных популяций дермывключаютувеличениеДанные клеткичисласпособныфибробластов,эозинофилов,выделять целый рядлейкоцитов.биологическиактивныхсоединений, включая цитокины, биогенные амины и факторы роста, которые всвою очередь могут обусловливать дистантное стимулирующее действие намикроциркуляцию, регенеративный эффект, описанные в предыдущих главах.5.3 Влияние аутотрансплантации полнослойного кожного лоскута на системурегуляции ангиогенеза в условиях сохраненной и нарушенной иннервации[Шутров И.Е.
и др., 2016]Учитывая дистантный стимулирующий эффект АТПКЛ и ее комбинации сПЭС на микроциркуляцию и регенеративный эффект могут быть связаны сремоделированием сосудистого русла периферического нерва и зоны нарушеннойиннервации, в связи с чем были исследованы концентрации ключевогостимулятора ангиогенеза – фактора роста эндотелия сосудов (vascular endothelialgrowth factor, VEGF) при различных способах стимуляции на фоне нейрорафии, атакже у животных без повреждения седалищного нерва, которым выполняласьтолько АТПКЛ.Было установлено, что при нейрорафии седалищного нерва на 7-е суткипосле оперативного вмешательства происходит достоверное повышение VEGF всыворотке крови по сравнению с контролем. На 21-е сутки регистрировалиповышенный уровень данного показателя, однако относительно 7-х сутокотмечалосьзначимоеснижение(табл.9719).Следовательно,VEGF,как98регенеративный фактор, оказывает свое действие на микрокровоток на 7-е сутки,но его выделение при нейрорафии является непродолжительным и нивелируется к21 суткам (табл.
19).Таблица 19Содержание VEGF в крови исследуемых групп животныхПоказательГруппаVEGF7 суткиКонтроль (n=7)Группа сравнения(n=6 на 7-е сут.;21 сутки5.97 (3.32; 7.3)21.9 (16.6; 31.2)р1=0.00340513.28 (9.96; 15.27)р1=0.006642р2=0.03064023.23 (20.58; 50.58)р1=0.002165р3=0.52031725.22 (17.93; 28.51)р1=0.001460р2=1.000000р3=0.01692516.59 (9.96; 24.56)р1=0.002165р3=0.317311р4=0.11022429.87 (20.58; 31.2)р1=0.002165р2=0.096699р3=0.003405р4=0.4519147.3 (5.97; 8.6)р1=0.416793р3=0.008114р4=0.005766р5=0.00576624.56 (19.25; 37.31)р1=0.003405р2=0.008114р3=0.045328р4=1.000000р5=0.775097n=6 на 21-е сут.)АТПКЛ(n=7 на 7-е сут.;n=8 на 21-е сут.)АТПКЛ+ПЭС(n=7 на 7-е сут.;n=7 на 21-е сут.)Группа животных сАТПКЛ безповреждения нерва(n=5 на 7-е сут.;n=6 на 21-е сут.)Примечания: р1 - по сравнению с контролем, р2 - по сравнению показателем 7 суток внутри группы,р3 - по сравнению с аналогичным показателем группы сравнения, р4 - по сравнению с аналогичнымипоказателями группы животных с АТПКЛ, р5 - по сравнению с аналогичным показателем группыживотных при АТПКЛ+ПЭССодержание VEGF при АТПКЛ, выполненной на фоне нейрорафии,статистически значимо увеличивалось на 7-е сутки и сохраняло повышенныйуровень на 21-е сутки относительно контрольных значений.
Относительноаналогичных показателей группы сравнения, значимое увеличение отмечалосьтолько на 21-е сутки. Следовательно, АТПКЛ пролонгировала продукцию VEGFпри нейрорафии седалищного нерва (табл. 19).9899При комплексной стимуляции на 7-е и 21-е сутки после оперативноговмешательства в крови определяли достоверное повышение уровня VEGFотносительно контроля. При сравнении с аналогичными показателями группыживотных, которым выполнялась только нейрорафия, отмечали высокоесодержание данного маркера на 21-е сутки.
При сравнении концентраций VEGF вкрови с его уровнем в группе животных, которым выполнялась АТПКЛ на фоненейрорафии без последующей ПЭС, значимых отличий на 7-е и 21-е сутки неотмечалось. Следовательно, включение ПЭС в состав комплексного воздействияне вызывало значимых изменений уровня VEGF по сравнению с изолированнымиспользованием АТПКЛ (табл. 19).Так как увеличение синтеза VEGF при нейрорафии седалищного нерваможет быть обусловлено травматизацией тканей после операции, а оперативноевмешательство в объеме АТПКЛ сопровождается меньшим повреждениемокружающих тканей, было изучено изолированное ее влияние на продукциюданного проангиогенного фактора.На 7-е сутки после АТПКЛ у животных без повреждения седалищногонерва отличий от контрольных значений не отмечалось, уровень данногопоказателя был ниже, чем при нейрорафии и нейрорафии с различнымиспособами стимуляции, включающими АТПКЛ и ПЭС, что вероятно связано сменьшим объемом повреждения у данной группы (табл.
19). На 21-е сутки уживотных данной группы отмечалось значимое повышение уровня VEGFотносительно контрольных значений, что свидетельствует, о стимулирующемвлиянии АТПКЛ на продукцию VEGF не только в условиях нарушенной, но исохранной иннервации. В сравнении с аналогичными показателями группысравнения на 21-е сутки концентрация VEGF в крови у животных, которымпроводилась АТПКЛ без повреждения седалищного нерва статистически значимовыше. При сравнении с показателями животных, которым проводилась АТПКЛили комплексная стимуляция на фоне нейрорафии, на 21-е сутки у крыс даннойгруппы отличий уровня VEGF не было выявлено (табл. 19).
Следовательно,99100влияние АТПКЛ на продукцию VEGF осуществляется независимо от травмынерва.Таким образом, VEGF участвует в восстановительных процессах приповреждении нерва, но продолжительность его интенсивного выделенияневелика. АТПКЛ оказывает стимулирующее влияние на продукцию VEGF,нарастание концентраций которого происходит к 21-м суткам. Интенсивностьпродукции VEGF через 3 недели не зависит от объема повреждения.Увеличение продукции VEGF под влиянием АТПКЛ может рассматриваться вкачестве механизма реализации регенеративного эффекта, способствующегоулучшению трофики денервированных тканей и как следствие стимуляциирегенеративных процессов.
В свою очередь повышение продукции VEGF приАТПКЛможетбытьаутотрансплантации.полученныеданныеопосредованоСтимулирующееоклетками,влияниерегенеративныхпривлекаемымиАТПКЛэффектах,аможеттакжевзонуобъяснятьдистантномстимулирующем действии на микроциркуляторное русло.5.4 Влияние аутотрансплантации полнослойного кожного лоскута наконцентрации нейроспецифических белков при поврежденииседалищного нерва [Шутров И.Е.
и др., 2016]В предыдущих главах было показано, что АТПКЛ и ее комплексноевлияние в сочетании с ПЭС оказывают регенеративный эффект на седалищныйнерв после нейрорафии. В этой связи для оценки регуляции балансанейроспецифических белков в ходе ремоделирования нервной ткани былипроведеныисследованиясодержаниявсывороткекровиживотныхнейротрофина-3 (neurotrophin-3, NT-3), который согласно литературным даннымявляется стимулятором роста нервных волокон [M. Ramer et al., 2000; F. Barras etal., 2002; E.
Fine et al., 2002], и тяжелой цепи нейрофиламентов (neurofilamentheavy polypeptide, NEFH), концентрация которых характеризует выраженностьдегенеративных процессов в нервной ткани [J. Guy et al., 2008; K. Boylan et al.,1001012013],принейрорафииседалищногонерваиразличныхспособахстимулирующего воздействия, включающих АТПКЛ и ПЭС.
Так, как NT-3характеризует регенеративный компонент, а NEFH – дегенеративный –целесообразно исследовать их сочетание для оценки баланса регенеративных идегенеративных процессов.Таблица 20Содержание нейроспецифических белков на 7-е и 21-е сутки после нейрорафииседалищного нерва при применении различных видов стимуляцииПоказателиГруппаNEFH7 суткиКонтроль (n=11)Группа сравнения(n=9 на 7-е сут.;n=6 на 21-е сут.)АТПКЛ(n=9 на 7-е сут.;n=10 на 21-е сут.)АТПКЛ+ПЭС(n=8 на 7-е сут.;n=8 на 21-е сут.)NT-321 сутки72.0 (39.86; 88.94)7 сутки21 сутки0 (0; 0)166.27(130.13; 239.93)р1=0.000629219.12(189.43; 299.29)р1=0.001089р2=0.3457790.0025(0; 0.0040)р1=0.0135440(0; 0)р1=0.959922р2=0.01956163.97(62.66; 80.85)р1=0.704043р3=0.00057471.84(56.17; 81.99)р1=0.503515р2=0.806496р3=0.0028570.0046 (0;0.0596)р1=0.040239р3=0.5962420.092(0.059; 0.179)р1=0.002190р2=0.066193р3=0.01080648.02(42.85; 56.51)р1=0.302001р3=0.000636р4=0.01413867.23(48.43; 96.9)р1=0.772579р2=0.127809р3=0.002415р4=0.6892780.1(0.087;0.124)р1=0.001089р3=0.001790р4=0.0215570(0; 0)р1=0.967068р2=0.002415р3=0.948533р4=0.005129Примечания: р1- по сравнению с контролем, р2- внутригрупповые сравнения, р3- при сравнениис аналогичным показателем группы сравнения, р4- при сравнении с аналогичным показателемгруппы животных с АТПКЛ.При анализе сывороточных белков было установлено, что при нейрорафииседалищного нерва на 7-е сутки после оперативного вмешательства происходилостатистически значимое увеличение количества NT-3 и NEFH в крови.На 21-е сутки после нейрорафии содержание NEFH в крови сохраняло значимовысокий уровень относительно контроля, отмечалось увеличение среднего101102значения относительно 7-х суток эксперимента, которое, однако не достигалостатистической значимости.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
