Диссертация (1154691), страница 18
Текст из файла (страница 18)
Содержание NT-3 на 21-е сутки после нейрорафииснижалось до уровня контрольных показателей (табл. 20).Резкое увеличение содержания NEFH в крови на 7-е сутки после перерезкии нейрорафии седалищного нерва, а также тенденция к увеличению от 7-х к 21-мсуткам данного показателя, свидетельствует об активных процессах дегенерации,развивающихся в оперированном нерве, что подтверждается морфологическимиданными, представленными в главе 3. Повышение уровня NT-3 у животныхгруппы нейрорафии на 7-е сутки характеризует физиологическую компенсаторновосстановительную реакцию организма на повреждение нерва.Снижение доконтрольных значений на 21-е сутки – свидетельствует о кратковременнойрегенеративной активности восстановительных процессов (табл.
20).При АТПКЛ в межлопаточной области, выполненной на фоне нейрорафииседалищного нерва на 7-е сутки после оперативного вмешательства уровеньNEFH в крови не отличался от контроля. При этом уровень NT-3 имелстатистически значимое увеличение относительно контрольных значений,отличий от аналогичных показателей группы животных, которым выполняласьтолько нейрорафия не отмечалось. На 21-е сутки в крови у животных даннойгруппы обнаруживали не отличающийся от контроля и значений 7-х сутокуровеньNEFH.СодержаниеNT-3приэтомстатистическизначимоувеличивалось, как относительно контроля, так и относительно 7 суток (табл. 20).Отсутствие статистически значимых отличий уровня NEFH от контрольныхпоказателей, отражает снижение дегенеративных процессов в нервной ткании свидетельствует о регенеративном действии АТПКЛ, что подтверждаетсяморфологическими данными, изложенными в главе 3, согласно которым,в проксимальном отделе оперированного нерва при АТПКЛ увеличиваетсяколичество неизмененных волокон, а также снижается число дистрофированных.Достоверное увеличение уровня NT-3 на 7-е и 21-е сутки свидетельствуето пролонгации продукции данного нейроспецифического белка под влияниемАТПКЛ.
Пролонгация продукции NT-3 может рассматриваться как механизм102103стимулирующего влияния АТПКЛ на регенерацию нервных волокон, реализациюкоторогоподтверждаютизложенныевпредыдущихглавахрезультатыЭНМГ-исследования и морфологические данные, согласно которым происходитактивация процессов реиннервации мышц, а также увеличение количестварегенерирующихволоконвпроксимальномидистальномотделахоперированного нерва (табл. 20).При комплексной стимуляции на 7-е сутки после нейрорафии в кровиживотных обнаруживался не отличающийся от контроля уровень NEFH.При сравнении с аналогичным значением группы животных, которым АТПКЛпроводилась без ПЭС, отмечалось статистически значимое снижение данногопоказателя.
Содержание NT-3 у животных данной группы на 7-е суткиэксперимента было статистически значимо выше уровней контроля, а такжеаналогичных показателей группы сравнения и животных, которым одновременнос нейрорафией выполнялась АТПКЛ (табл. 20). На 21-е сутки после оперативноговмешательствауживотных,подвергнутыхкомплекснойстимуляции,регистрировали не отличающийся от контроля уровень NEFH. При этомсодержание NT-3 отличий от контроля на 21-е сутки также не имело. (табл. 20).Следовательно, низкий уровень NEFH в крови свидетельствует орегенеративном действии комплексной стимуляции, которое на 21-е суткиэксперимента выражено в той же степени, что и при изолированном примененииАТПКЛ.
Регенеративный эффект комплексной стимуляции, реализуемый за счетповышения уровня NT-3 в крови, хотя и превосходит таковой при изолированномприменении АТПКЛ на 7-е сутки эксперимента, к 21-м суткам нивелируетсяполностью, что может быть объяснено ингибированием выделения данногонейроспецифического белка по механизму отрицательной обратной связи приинтенсивном прорастании нервных волокон у животных данной группы иактивации реиннервации мышц, которые были описаны в главе 4.Таким образом, как изолированное использование АТПКЛ, так и еекомбинация с ПЭС, оказывают регенеративный эффект, выражающийсяснижениемчисладегенеративноизмененных103нервныхволокони104подтверждающийся биохимически обнаружением низкого уровня NEFH в крови,а также посредством усиления продукции NT-3.
При этом изолированноеприменение АТПКЛ одновременно с нейрорафией пролонгирует продукциюростовогофактора.Особенностьюреализациирегенеративногодействиякомплексной стимуляции, включающей АТПКЛ и ПЭС, является резкоеувеличение концентрации NT-3 в крови на 7-е сутки с последующимнивелированием данного эффекта к 21-м суткам.Полученныеданныепозволяютзаключить,чтодистантныйстимулирующий эффект на микроциркуляторное русло при АТПКЛ реализуетсякак при нарушенной, так и при сохраненной иннервации. Однако, выраженностьстимулирующего эффекта при сохраненной иннервации меньше, что может бытьобусловлено механизмами отрицательной обратной связи, препятствующимисдвигам перфузии, так как длительное поддержание повышенной перфузиимикроциркуляторного русла конечности у здоровых животных на фонеотсутствияфакторов,способствующихувеличениюпотребностивкровоснабжении, является метаболически нецелесообразным.
Клеточные реакциивзонеаутотрансплантациикожноголоскутапроявляютсядегенерациейэпидермиса, привлечением большого количества фибробластов, эозинофилов илейкоцитов,являющихсяпродуцентамиширокогоспектрабиологическиактивных веществ. Регенеративный эффект и дистантное стимулирующеедействие на микроциркуляцию реализуются при участии NT-3 и VEGF,увеличение продукции которых при стимуляции АТПКЛ и ее комплекса с ПЭС,может быть обусловлено клеточными реакциями в зоне аутотрансплантации.104105ОБСУЖДЕНИЕ ПОЛУЧЕННЫХ РЕЗУЛЬТАТОВВозникающие при повреждении периферических нервов дегенеративновоспалительные изменения представляют собой сложные многокомпонентныевзаимосвязанныеивзаимообусловленныепатофизиологическиепроцессы,которые в клинических условиях, создают сложности при реабилитации данногоконтингентабольных.Около60%пострадавшихпреимущественнотрудоспособного возраста становятся инвалидами [С.И.
Макарова, 2007;Ю.Б. Чайковский и др., 2010; И.Н. Шевелев, 2011; Д.Ш. Джамбулатов и др., 2013;О.Н. Древаль и др., 2015]. В этой связи нами было проведено исследованиекомплекса патофизиологических процессов, протекающих в экспериментальноймодели при нейрорафии периферического нерва после полного анатомическогоперерыва.В результате проведенных исследований было установлено, что припересеченииседалищногонерваиегопоследующейнейрорафиивденервированных тканях оперированной конечности развиваются трофическиенарушения, которые характеризуются отеками стоп, выпадением волос в нижнейтрети голени, изъязвлениями на коже.
При регистрации микроциркуляторныхпоказателей было выявлено снижение перфузии кожи, сопровождающеесяувеличением нейрогенного тонуса и снижением эндотелиальной вазодилатации,что в соответствии с трактовками данных лазерной допплеровской флоуметрии,изложеннымивлитературе,характеризуетденервационнуюгиперчувствительность сосудов [А.И. Крупаткин и др., 2005]. Согласносовременнымлитературнымисточникам,приденервацииувеличиваетсячувствительность гладких мышц к циркулирующим катехоламинам, что приводиткспазмуприносящихартериолиуменьшениюпритокакровивмикроциркуляторное русло, что в конечном итоге препятствует реализации еготранспортной функции и вызывает ограничение поступления метаболитовнеобходимых для регенерации, приводя к развитию трофических нарушений в105106окружающих тканях [Д.С. Макаров и др., 2010; А.Н.
Иванов и др., 2015a; Y. Zhanget al., 2007; H. Huang et al., 2010].При оценке динамики восстановления проводимости сшитого седалищногонерва методом ЭНМГ на 7-е и 14-е сутки получить четкие невральные ответыниже зоны нейрорафии не удалось.
Регистрируемые на 21-е сутки показателисвидетельствовали о частичном восстановлении проводимости малого числааксонов, не образующих к этому времени синаптических контактов на мышечныхволокнах, а также об активно текущей денервацией в мышцах голени, чтосоответствует литературным данным, согласно которым первые признакивосстановления двигательной активности у крыс при нейрорафии седалищногонерва наблюдались только через 1,5-2 месяца [Р.П. Горшков, 2009].Данныеанализагистологическихпрепаратовседалищногонерва.соответствуют результатам функциональных тестов и свидетельствуют, что воперированном нерве среднее количество нервных волокон снижается отпроксимального к дистальному отделу, при этом число дистрофическиизмененных нервных волокон как в проксимальном, так и в дистальном отделепревалирует над относительно малым числом регенерирующих.
В процентномотношении число регенерирующих нервных волокон относительно среднегоколичества всех подсчитанных в дистальном отделе составляет 27%, чтосоотносится с данными, согласно которым при нейрорафии седалищного нервачерез 1 месяц количество проросших аксонов составляет только 31%[Р.П. Горшков, 2009; В.Г. Нинель и др., 2012].Результаты исследований концентраций нейроспецифических белков всывороткекровиуэлектронейромиографииживотныхиснейрорафиейморфометрическихподтверждаютметодовданныеисследования.Наблюдаемое увеличение концентраций NEFH у животных данной группысвидетельствует о преобладании процессов дегенерации в нервной ткани[J.
Guy et al., 2008; K. Boylan et al., 2013]. В тоже время в сыворотке крови уживотных данной группы после увеличения концентрации NT-3 на 7-е суткиэксперимента, отмечалось ее снижение к 21-м суткам. Учитывая, что NT-3106107является одним из основных стимуляторов аксонального роста [M. Ramer et al.,2000; W. Daly et al., 2012], снижение его уровня к 21-м суткам свидетельствует ократковременной поддержке регенеративных процессов данным фактором.Непродолжительность периода стимуляции регенеративных процессовростовыми факторами также подтверждается снижением на 21-е суткиотносительно значений, зарегистрированных на 7-е сутки после нейрорафии,концентрации VEGF, который стимулирует васкуляризацию поврежденногонервного ствола, что согласно данным литературы улучшает его трофику испособствует ускорению аксонального роста [K.
Korybalska et al., 2011;Z. Taimeh et al., 2013; R. Voltan et al., 2014].Таким образом, трофические нарушения при нейрорафии седалищногонерва проявляются угнетением перфузии кожи, сопровождающимся повышениемнейрогенного тонуса и снижением эндотелиальной вазодилатации, что отражаетденервационную гиперчувствительность сосудов. Возникающие при этомдегенеративно-регенеративные процессы в седалищном нерве характеризуютсямедленной регенерацией нервных волокон, и протекают с преобладаниемдегенеративных изменений на фоне быстро возникающего дефицита ростовыхфакторов.Результатысобственных исследованийв совокупности с даннымилитературы свидетельствуют, что ключевыми факторами препятствующимифункциональномувосстановленияпосленейрорафииседалищногонерваявляются: медленный рост и дегенеративные изменения аксонов, нарушениякровоснабжения и атрофические изменения мышечных волокон, а также малаяпродолжительность периода поддержки репаративных процессов ростовымифакторами[Р.Ф.Масгутовидр.,2013;H.Komobuchietal.,2010;R.