Диссертация (1154329), страница 23
Текст из файла (страница 23)
Результаты статистической обработки данных представлены втаблице 47.Таблица 48. Сравнение показателей реакции дегрануляции тучных клетокв группах морских свинок под влиянием КаспазолаЭкспериментальныегруппыКонтроль150 мг/кг750 мг/кгПолИДТК,(M±m)t-критерийСтьюдентаВероятность (p)M0,12±0,01––F0,15±0,01––M0,14±0,010,79> 0,05F0,16±0,020,12> 0,05M0,13±0,020,53> 0,05F0,12±0,011,42> 0,05Итак, статистически значимых отличий в показателях дегрануляциитучных клеток между группами самцов и самок морских свинок, получавшихКаспазол в дозировках 150 и 750 мг/кг на протяжении месяца, не установлено.Следовательно, можно сделать вывод, что при Каспазол не обладаеталлергенными свойствами, которые можно было бы выявить в реакциидeгрануляции тучных клeток.Реакция иммунных комплексовСенсибилизацию морских свинок осуществляли путем в/ж введенияКаспазола в дозировках 150 мг/кг и 750 мг/кг на протяжении 5 дней.
Через 10дней после завершения введения внутрикожно вводили разрeшающую дoзупрепарата. Эту дозу определяли на здоровых животных и считали наибольшимразведением препарата, не вызывающим видимых изменений в коже через часпосле внутрикожной инъекции. В контроле животным вводили воду.135Интенсивность реакции учитывалась визуально, начиная с 30 мин послетого, как вводилась разрешающая доза. При этом никаких патологическихпроявлений на коже не выявлялось. Признаки реакции на коже такжеотсутствовали у всех животных и через 1 час, 4 часа и 24 часа после постановкиэксперимента. Учитывая отсутствие показателей реакции в опыте и контроле навсех сроках наблюдения, можно сделать вывод, что при пероральномприменении Каспазол не обладает свойствами аллергена, которые можно былобы установить в реакции иммунных комплексов.Конъюнктивальная пробаКонъюнктивальная проба проводилась на 10 день после окончанияпятидневного внутрижелудочного введения Каспазола в дозе 10 мг/кг и 1000мг/кг (животные контрольной группы получали воду).У всех животных опытных групп полностью отсутствовала реакция навведение препарата.
Следовательно, можно сделать вывод об отсутствии уКаспазола аллергенных свойств, которые можно выявить в кoнъюнктивальнойпробе.Таким образом, в результате изучения возможного аллергенного действияКаспазола у морских свинок обеих полов было продемонстрировано, что он невызывает реакции общей анафилаксии при применении в дозе, в 30 разпревышающей терапевтическую для человека. Кроме того, конъюнктивальныепробы, реакция дегрануляции тучных клеток и реакция иммунных комплексовбыли отрицательными. Полученные данные позволяют сделать заключение отом, что Каспазол не проявляет аллергизирующих свойств при пероральномприменении.3.3.
ЗаключениеТаким образом, DIM и субстанция эпигаллокатехин имеют достаточнонизкую токсичность в разработанных прототипах готовых лекарственных форм.Это подтверждается также имеющимися данными о низкой репродуктивной136токсичности DIM в лекарственной формуляции на основе плюроника [Киселев,2014]. Полученные данные позволяют перейти к дальнейшему проведениюисследований, поскольку обосновывают перспективность их применения вклинических исследованиях.137ГЛАВА 4.
ИССЛЕДОВАНИЕ ВЛИЯНИЯ СОЕДИНЕНИЙ-КАНДИДАТОВНА МЕХАНИЗМЫ РАННЕГО КАНЦЕРОГЕНЕЗА НА ЖИВОТНЫХМОДЕЛЯХИзучение специфической активности на животных моделях являетсянеобходимым с двух точек зрения. Во-первых, это даст возможностьподтвердить сохранение эффективности и установить особенности действиясоединений индольного ряда и катехинов при использовании в составеразработанных прототипов лекарственных форм. Во-вторых, эксперименты наживотных позволят обосновать предполагаемые дозировки для последующегоприменения в исследованиях на людях.4.1. Влияние соединений-кандидатов на эпигенетические механизмыраннего канцерогенеза4.1.1.
Эпигенетическая активность дииндолилметанаИсследование проводили на 40 крысах-самцах (по 20 в группе). Опытнаягруппа получала Инфемин в дозе 133 мг/кг в пересчете на дииндолилметан,контрольная – плацебо. У экспериментальных животных после 1 месяцавоздействия удаляли простату и гомогенизировали участок ткани.
Интегральнаяактивность HDAC изучалась колориметрическим методом, как описано в главе2.Есть данные о том, что DIM ингибирует гистондеацетилазу в клеткахлиний рака простаты. Однако, для процесса канцерогенеза важнее изучитьактивность HDAC и влияние на нее DIM в здоровой ткани простаты. Уэкспериментальных животных экспрессия HDAC была заметно снижена к концуэксперимента (таблица 49).138Таблица 49. Результаты исследования активности HDAC в тканипростаты крыс после леченияАктивность HDAC врасчете на общеесодержание белка(через 1 месяцотносительносреднего уровня вконтроле)ГруппыГруппа 1 (опыт)0,72±0,42Группа 2 (контроль)1,00±0,31Значимость отличий0,0215Таким образом, снижение активности гистондеацетилазы под влияниемDIM имеет место in vivo в ткани нормальной предстательной железы.К настоящему моменту у млекопитающих идентифицировано 18разновидностей HDAC, которые разделены на 4 группы: HDAC I-IV класса.Гиперэкспрессия HDAC I класса наблюдается при различных видах рака икоррелирует с плохим прогнозом заболевания [Weichert W., 2008].
В то же времяповышенная экспрессия HDAC II класса ассоциируется с хорошим прогнозом,особенно при немелкоклеточном раке легких и кожной Т-клеточной лимфоме[Balasubramanian S., 2009].Известно, что DIM проявляет ингибирующую активность по отношениюк гистон-деацитилазам I класса [Li Y., 2010; Busbee P.B., 2014].
DIM селективновызывал протеасомальное разрушение гистондеацетилаз I класса (HDAC 1,HDAC 2, HDAC 3 и HDAC 8), при этом не влияя на активность гистондеацетилазII класса. Этот эффект ослаблял опосредованное HDAC снижение уровняингибиторов CDK (р21 и р27), в результате приводя к значительному росту ихэкспрессии и аресту клеточного цикла (в фазе G2).
Помимо этого, истощениеактивностигистондеацетилазиндуцировалоповреждениеДНКикоммитировало опухолевые клетки к апоптозу. Следовательно, селективноеподавление HDAC I класса без влияния на гистондеацетилазы II класса считается139преимуществом DIM в сравнении с иными известными ингибиторами HDAC,илиодновременноподавляющимиактивностьHDACIиIIкласса[Balasubramanian S., 2009], или, в лучшем случае ингибирующими только одиниз изоферментов HDAC I класса (вальпроевая кислота, TNFα) [Kramer O.H.,2003; Vashisht Gopal Y.N., 2006].Поскольку известно, что ингибирующий эффект DIM связан в первуюочередь с HDAC класса I, можно ожидать, что данное действие Инфемина будетспособствовать профилактике развития рака простаты. Этот эффект наиболееважен в ситуации, когда происходит активация протоонкогенов, связанная счрезмерной активностью HDAC, что важно на ранних стадиях канцерогенеза впростате [Halkidou K., 2004; Abbas A., 2008].4.1.2.
Эпигенетическая активность эпигаллокатехиновИсследование проводили на 40 крысах-самках (по 20 в группе) синдуцированным гиперметилированием генов внутримышечной инъекциейсуспензии сульфида никеля Ni3S2 в дозе 10 мг.Опытная группа получала Каспазол в дозе 133 мг/кг, контрольная –плацебо начиная со дня инъекции сульфида никеля. У экспериментальныхживотных после 3 месяцев воздействия под анестезией кетамином (50 мг/кг) иксилазином (12 мг/кг) удаляли матку, и выполняли соскоб эндометрия иэпителия шейки матки, после чего ткань гомогенизировали и проводилиисследование методом метил-чувствительной ПЦР (см. главу 2).Таблица 50. Метилирование генов-супрессоров опухолевого роста в эпителиишейки матки крыс после терапииГенсупрессорRASSF1MLH1опытконтроль6,7%033,3%13,3%140значимостьотличий0,0350,091Таблица 51.
Метилирование генов-супрессоров опухолевого роста вэндометрии крыс после терапииГенопытконтрользначимостьсупрессоротличийRASSF16,7%26,7%0,089MLH1020,0%0,035Как видно из представленных в таблицах 50-51 данных, применениеэкспериментального препарата приводило к деметилированию генов RASSF1 иMLH1 in vivo после 3 месяцев примениния.Полученные данные подтверждают ранее известную способностькатехинов к снижению метилирования генов, в том числе генов-онкоспрессоров,продемонстрированную in vitro [Lee W.
J., 2005; Fang M., 2003]. Полученныенами данные продемонстрировали значимость данного механизма действияEGCG и на модели лабораторных животных in vivo.4.2.Влияние соединений индольного ряда на гормональные механизмыраннего канцерогенезаИсследование проведено на модели мышей линии Balb/c-nude(nu/nu) сперевитыми клетками линии рака эндометрия (50 животных) [Друх В. М., 2015].Инфемин вводился животным экспериментальной группы 1 раз в сутки в дозе133 мг/кг в пересчете на DIM на протяжении 30 дней.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
