Диссертация (1154329), страница 25
Текст из файла (страница 25)
Приэтом критерием значимости вклада конкретного механизма в канцерогенез былареверсия предраковых изменений в ткани при подавлении данного механизма(ростовые факторы в тканях предстательной железы, метилирование геновонкосупрессоров в эндометрии и шейке матки, канцерогенные метаболитыэстрогенов при дисплазии молочной железы).
Данные органы и ткани –предстательная железа, эндометрий, шейка матки, молочная железа –характеризуютсяотражающихналичиемхорошопоследовательноеизученныхпрогрессированиенозологическихпроцессовформ,раннегоканцерогенеза. Поэтому гиперпластические и неопластические процессы втканях данных органов могут служить оптимальной моделью для изученияраннего канцерогенеза у человека.5.1. Роль баланса факторов роста в канцерогенезе в предстательнойжелезеДля оценки влияния DIM на баланс фаторов роста был использованметаболический предшественник DIM – индол-3-карбинол (I3C).
По имеющимсяданным, при попадании в желудок он практически полностью метаболизируетсяв кислой среде до дииндолилметана [Reed G.A., 2006].Под наблюдением находилось 34 пациента с ПИН, которые былиразделены на две группы [Аполихин О.И., 2009]. Группа 1 (18 пациентов)принимала индол-3-карбинол (400 мг/сут) и эпигаллокатехин-3-галлат (160151мг/сут), группа 2 (16 пациентов) принимала плацебо. Длительность терапиисоставила 12 месяцев.
Иммуногистохимический анализ проводился отдельно вгруппе активной терапии и плацебо, у четырех человек из каждой группы.Оценивались такие показатели, как экспрессия факторов роста – IGF(инсулиноподобного фактора роста), EGF (эпидермального фактора роста), атакже регулирующего фактора TGF-b (трансформирующий ростовой факторбета), до и после назначения исследуемого препарата или плацебо. Уровеньэкспрессии изучаемых ростовых факторов определялся в процентах, ивычислялись его изменения между началом исследованием и окончаниемтерапии (рисунок 5).При практически однородных исходных значениях экспрессии IGF, EGFи TGF-b, в группе пациентов, принимавших активный препарат, былообнаружено статистически значимое снижение экспрессии фактора IGF на 5,7%(p=0,004 по критерию Фишера), EGF на 11,8% (p=0,002 по критерию Фишера), ирост уровня экспрессии TGF-b на 6,9% (p=0,047 по критерию Фишера).
При этому пациентов контрольной группы значимых изменений уровней экспрессииростовых факторов не обнаружено.Следовательно, терапия I3C и EGCG приводит к снижению экспрессииростовых факторов, стимулирующих пролиферацию в ткани предстательнойжелезы – IGF и EGF. Кроме того, вызывается стимуляция экспрессии TGF-b.Полученные данные значимых изменений экспрессии факторов роста IGF, EGFи TGF-b на фоне терапии I3C и EGCG свидетельствуют о наличии влиянияданных субстанций на значимые сигнальные механизмы регулировки клеточнойпролиферации. Выявленные изменения, по-видимому, являются существенныммеханизмом антинеопластического действия I3C и EGCG у больных с ПИН.152Изменение экспрессии после лечения,%15105I3C + EGCG0плацебо-5-10-15IGFEGFTGF-bРисунок 5. Данные изменения экспрессии факторов роста по даннымиммуногистохимического анализа после терапии у пациентов с ПИН.5.2.
Рольметилированиягенов-онкосупрессороввпредраковыхпроцессах в эндометрии и шейке матки5.2.1. Метилирование генов в эпителии шейки маткиИсследование включало в себя 102 пациентки с фоновыми ипредраковыми заболеваниями шейки матки (CIN I-II) в репродуктивном возрасте[Сидорова И.С., 2014]. Данные пациентки входили также в более крупноеисследование влияния метилирования генов на риск развития рака шейки матки[Евтина И.П., 2011; Сидорова И.С., 2011].Все участницы исследования были распределены на 3 группы всоответствии с конкретным видом патологии шейки матки (таблица 55). Впервую группу вошли женщины с доброкачественными изменениями (цервицит,лейкоплакия и т.п.), эта группа выполняла функцию контрольной.153Таблица 55.
Число пациенток в группахГруппаК-во пациентокГруппа 1 - Доброкачественные процессы42Группа 2 - CIN I33Группа 3 - CIN II27Все пациентки в процессе комплексной терапии, после применениядеструктивных методов лечения, принимали EGCG в дозировке 180 мг/сут напротяжении 6 месяцев.После проведения деструкции очагов дисплазии контрольные осмотры икольпоскопию осуществляли через полтора месяца, а дальнейшее наблюдениепроисходило один раз в 3 месяца в течение одного года.
На обследовании через3 месяца спустя у всех пациенток отмечалась нормализация цитологическихмазковикольпоскoпическихкартин.Уровеньметилированиягенов-онкосупрессоров определялся до начала лечения, а также через 6 месяцев послеокончания терапии EGCG.Частоты метилирования генов-онкосупрессоров роста после терапии сприменением EGCG у больных изучаемых групп через один год после леченияпредставлены в таблицах 56-58.Таблица 56. Частота выявления метилирования генов-онкосупрессоров убольных группы 1 (через 1 год после начала терапии).Ген-До леченияПосле леченияонкосупрессорn=42 [Евтина И.П., 2011]n=42MLH1102,4%HIC1317,1%2,4%154RASSF1А204,8%MGMT102,4%N 3300CDH100Значимых отличий в доле пациенток с метилированием геновонкосупрессоров при сравнении с величиной до лечения в первой группе невыявлено.
Данный факт представляется очевидным, учитывая низкий уровеньисходного метилирования.Таблица 57. Частота выявления метилирования генов-онкосупрессоров убольных группы 2 (через 1 год после начала терапии).Ген-До леченияПосле леченияонкосупрессорn=33 [Евтина И.П., 2011]n=33MLH1309,1%HIC1RASSF1АMGMT61*18,2%3,0%111*33,3%3,0%103,0%N 3300CDH100* - различие значимо при сравнении с величиной до лечения (p<0,05, критерий хи-квадрат).155Таблица 58. Частота метилирования генов-супрессоров опухолевогороста у больных группы 3 (через 1 год после лечения).Ген-До леченияПосле леченияонкосупрессорn=27 [Евтина И.П., 2011]n=27MLH192*33,3%6,1%162*59,3%6,1%122*44,4%6,1%20HIC1RASSF1АMGMT6,1%N 3340*14,8%CDH100* - различие значимо при сравнении с величиной до лечения (p<0,05, критерий хи-квадрат).В группах 2 и 3 выявлено значимое снижение уровня метилированиягенов MLH1, HIC1, RASSF1А и N33 после проведения лечения.
Важноподчеркнуть, что оно имело место спустя 6 месяцев после окончания терапииEGCG, что указывает на стабильный характер достигнутого эффекта.Данные о частоте метилирования говорят о значимом снижении частотыметилирования генов-онкосупрессоров после терапии с применением EGCG упациенток с CIN. Эти данные поддерживают использование данного препаратадляподавленияонкологическойтрансформацииубольныхсдоброкачественными и предраковыми процессами шейки матки.При этом спустя 12 месяцев после начала лечения с применением EGCGни у одной пациентки не наблюдалось рецидива CIN, что подтверждает высокуюзначимостьдеметилированиягенов-онкосупрессоров156длядостиженияустойчивого положительного эффекта лечения.
С другой стороны, полученныеданные обосновывают патогенетическую значимость метилирования геновонкосупрессоров в патогенезе раннего канцерогенеза в шейке матки.5.2.2. Метилирование генов в эндометрииВ исследование влияния EGCG на метилирование генов в эндометрии былавключена 21 пациентка с различной степенью неопластических измененийэндометрия, из числа больных, входивших в состав более крупного исследованияуровня метилирования генов при различных заболеваниях эндометрия [ВласовР.С., 2011; Сидорова И.С., 2011].
Они были разделены на три группы: группа 1(с простой гиперплазией эндометрия без атипии, 9 пациенток), группа 2 (скомплексной гиперплазией эндометрия без атипии, 5 пациенток), и группа 3 (скомплексной гиперплазией эндометрия с атипией, 7 пациенток).Стандартная консервативная терапия проводилось по рекомендациямНационального руководства по гинекологии [Гинекология, 2009]. В 1-й и 2-йгруппах все пациентки получали терапию гестагенами или агонистами ГнРГ,дополнительно они получали EGCG в дозировке 180 мг/сут в течение 6 месяцев.У всех пациенток, получавших EGCG, при контрольном обследовании через год(УЗИ с ЦДК и допплерометрией) патологии эндометрия обнаружено не было.При этом частота сохранения гиперплазии эндометрия среди пациенток, неполучавших EGCG, как было выявлено исследователями, проводившими ихнаблюдение, составила в первой группе 11,8% (4 пациентки из 43обследованный), а во второй группе – 14,6% (6 пациенток из 46 обследованных)[Власов Р.С., 2011; Сидорова И.С., 2011].
Отличия в частоте излечениястатистически не значимы (p>0,05, критерий хи-квадрат); тем не менее, даннаятенденция может быть подтверждена при проведении исследования на большемчисле пациенток.В 3-й группе у 7 пациенток была произведена абляция эндометрия споследующейгормонотерапиейгестагенами157илиагонистамиГнРГиназначением EGCG в дозировке 180 мг/сут в течение 6 месяцев. Приконтрольном обследовании через год (УЗИ с ЦДК и допплерометрией)патологии эндометрия у них обнаружено не было.Оценка уровня метилирования генов MLH1, RASSF1, p16, GSTP1, RAR-bи CDX1 до и после лечения представлена в табл.
59-61.Таблица 59. Частота метилирования генов-онкосупрессоров у больных 1группы.ГенДо лечения (n=43) После лечения[Власов Р.С., 2011]с применением EGCG (n=9)n%n%RASSF112,33--MLH112,33--p1624,65111,1RAR-b24,65--GSTP112,33--CDX112,33--Таблица 60. Частота метилирования генов-онкосупрессоров у больных 2группы.ГенДо лечения (n=46) После лечения[Власов Р.С., 2011]с применением EGCG (n=5)n%n%RASSF136,52--MLH148,70--p1612,17--RAR-b36,52--GSTP1715,22120,0CDX1510,87--158Таблица 61.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
