Диссертация (1150384)

Просмтор этого файла доступен только зарегистрированным пользователям. Но у нас супер быстрая регистрация: достаточно только электронной почты!

Текст из файла

САНКТ-ПЕТЕРБУРГСКИЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ УНИВЕРСИТЕТНа правах рукописиПОТОЛИЦЫНА ВЕРА ЕВГЕНЬЕВНАУДК 543.544544РАСШИРЕНИЕ АНАЛИТИЧЕСКИХ ВОЗМОЖНОСТЕЙКАПИЛЛЯРНОГО ЭЛЕКТРОФОРЕЗА И КАПИЛЛЯРНОЙЭЛЕКТРОХРОМАТОГРАФИИ ДЛЯ ОПРЕДЕЛЕНИЯМИКРОКОНЦЕНТРАЦИЙ БЕЛКОВ В БИОЛОГИЧЕСКИХЖИДКОСТЯХСпециальность 02.00.02 – АНАЛИТИЧЕСКАЯ ХИМИЯДиссертацияна соискание ученой степеникандидата химических наукНаучный руководитель:доктор химических наук, проф.Л.А. КАРЦОВАСанкт-Петербург20142ОГЛАВЛЕНИЕВВЕДЕНИЕ............................................................................................................. 5ГЛАВА 1. ЛИТЕРАТУРНЫЙ ОБЗОР ............................................................ 101.1.

Основы капиллярной электрохроматографии ......................................... 101.2. PLOT-колонки в капиллярной электрохроматографии........................... 201.3. Сверхразветвленные полимеры: физико-химические свойства и областиприменения ......................................................................................................... 321.3.1. Терминология, синтез и свойства сверхразветвленных полимеров 341.3.2. Синтез и структурные характеристики сверхразветвленныхполимеров (СРП) .............................................................................................

361.3.3. Дендритные полимеры как стационарные фазы в капиллярнойэлектрохроматографии (КЭХ) ....................................................................... 371.3.4. Использование покрытых капилляров при анализе смесейнейтральных аналитов .................................................................................... 401.4. Метод эллипсометрии для контроля сорбции белков ............................. 441.5. Методы on-line концентрирования в капиллярнойэлектрохроматографии ......................................................................................

501.5.1. Стэкинг................................................................................................... 511.5.2. Стэкинг нейтральных соединений в мицеллярнойэлектрокинетической хроматографии (МЭКХ) ........................................... 58I.5.3. Применение методов стэкинга для анализа ........................................

58ГЛАВА 2. ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА ОБЪЕКТОВ И МЕТОДОВИССЛЕДОВАНИЯ .............................................................................................. 602. 1. Оборудование ............................................................................................. 602.2. Реактивы....................................................................................................... 61232.3.

Пробоподготвка биологических жидкостей к анализу ........................... 622.3.1. Фильтрация пробы ................................................................................ 622.3.2. Пробоподготовка мочи к анализу альбумина .................................... 622.4. Методы исследования................................................................................. 642.4.1.

Капиллярная электрохроматография с использованием монолитныхи PLOT-колонок .............................................................................................. 642.4.2. Синтез динамически модифицированной дендритной капиллярнойколонки............................................................................................................. 672.4.3. Мицеллярная электрокинетическая хроматография ......................... 672.4.4. Капиллярный электрофорез смеси стандартов белков .....................

682.4.5. Эллипсометрический анализ ............................................................... 682.5. Приготовление рабочих растворов ........................................................... 702.5.1.Приготовление буферных растворов ................................................... 702.5.4. Приготовление стандартных растворов белков................................. 712.6.

Обработка полученных данных ................................................................. 712.6.1. Определение эффективности в капиллярном зонном электрофорезе(КЗЭ) и капиллярной электрохроматографии (КЭХ) .................................. 712.6.2.Оценка пористости монолитного сорбента.................................... 722.6.3.Оценка воспроизводимости процедуры синтеза монолитныхкапиллярных колонок .....................................................................................

73ГЛАВА 3. РАЗДЕЛЕНИЕ БЕЛКОВ НА МОНОЛИТНЫХ И PLOTМЕТАКРИЛАТНЫХ КОЛОНКАХ МЕТОДОМ КАПИЛЛЯРНОЙЭЛЕКТРОХРОМАТОГРАФИИ ....................................................................... 743.1. Синтез полиметакрилатного полимера in situ.......................................... 763.1.1. Капиллярные полиметакрилатные монолитные колонки ................ 77343.1.2. Капиллярные PLOT-метакрилатные колонки.................................... 793.2. Электрохроматографическое разделение белков. ................................

81ГЛАВА 4. ОПРЕДЕЛЕНИЕ БЕЛКОВ МЕТОДОМЭЛЕКТРОКИНЕТИЧЕСКОЙ ХРОМАТОГРАФИИ (ЭКХ) ...................... 85ГЛАВА 5. РАЗДЕЛЕНИЕ БЕЛКОВ НА PLOT-ДЕНДРИТНЫХКОЛОНКАХ МЕТОДОМ КАПИЛЛЯРНОЙЭЛЕКТРОХРОМАТОГРАФИИ ..................................................................... 103ГЛАВА 6. ЭЛЛИПСОМЕТРИЯ .....................................................................

109ГЛАВА 7. ON-LINE КОНЦЕНТРИРОВАНИЕ БЕЛКОВ В УСЛОВИЯХКАПИЛЛЯРНОЙ ЭЛЕКТРОХРОМАТОГРАФИИ НА PLOT-PEI-MALКОЛОНКАХ ....................................................................................................... 1187.1. Стэкинг с большим объемом образца (LVSS –largevolumesamplestacking).............................................................................. 1197.2. Стэкинг с большим объемом образца с водной пробкой .....................

1227.3. Стэкинг с большим объемом образца с электростэкингом .................. 1247.4. Анализ реальных объектов ...................................................................... 126ЗАКЛЮЧЕНИЕ ................................................................................................. 130СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ И ТЕРМИНОВ ................................................ 132СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ ............................................................................... 136ПРИЛОЖЕНИЕ 1..............................................................................................

145ПРИЛОЖЕНИЕ 2.............................................................................................. 147ПРИЛОЖЕНИЕ 3.............................................................................................. 155ПРИЛОЖЕНИЕ 4.............................................................................................. 15645ВВЕДЕНИЕАнализбелковбиохимическихвсегдабылиисследований.являетсяосновнойБиодиагностика,поискчастьюлюбыхбиомаркеров,онкомаркеров, а также маркеров различных заболеваний связаны с исследованиемпротеомной картины человека.

Количественное определение целевых белков ибелковыхкомплексоввбиологическихжидкостяхявляетсяоднойизперспективных областей исследования в современной биоаналитической химии.Среди разработанных методов определения индивидуальных маркерныхбелков широко используются иммуноферментные методы (ELISA), Вестернблоттинг, различные хроматографические методы.

Однако применение их требуетбольшогообъемаручноготруда,значительныхфинансовыхзатратнаоборудование или наборов для анализа (ELISA).В настоящее время наряду с упомянутыми выше все большее вниманиеуделяетсяэлектрофоретическимметодам(традиционныйэлектрофорез,электрокинетическая хроматография, капиллярная электрохроматография,капиллярныйгель-электрофорез)определениябелковипептидов,чтообусловлено, в первую очередь, их высокой эффективностью, экспрессностью иэкономичностью.Тем не менее, и при использовании методов капиллярного электрофореза(КЭ) возникает ряд проблем вследствие необратимой адсорбции белков ипептидовнавнутреннейэлектростатическогоповерхностивзаимодействиякварцевогозаряженныхкапиллярафункциональныхигруппаналитов с заряженными группами сорбента. Все это приводит к недостаточнойвоспроизводимости параметров миграции, невысокой чувствительности из-занестабильности базовой линии и снижению продолжительности «жизни»кварцевого капилляра.6Использование покрытых капилляров или введение в состав рабочегобуфера веществ, способных модифицировать стенки кварцевого капилляра,является одним из решений обозначенной проблемы.Перспективнымиматериаламивкачествестационарныхипсевдостационарных фаз в условиях капиллярной электрохроматографии (КЭХ) иэлектрокинетическойхроматографии(ЭКХ)являютсяметакрилатныеидендритные полимеры.

Характеристики

Тип файла PDF

PDF-формат наиболее широко используется для просмотра любого типа файлов на любом устройстве. В него можно сохранить документ, таблицы, презентацию, текст, чертежи, вычисления, графики и всё остальное, что можно показать на экране любого устройства. Именно его лучше всего использовать для печати.

Например, если Вам нужно распечатать чертёж из автокада, Вы сохраните чертёж на флешку, но будет ли автокад в пункте печати? А если будет, то нужная версия с нужными библиотеками? Именно для этого и нужен формат PDF - в нём точно будет показано верно вне зависимости от того, в какой программе создали PDF-файл и есть ли нужная программа для его просмотра.

Список файлов диссертации