Автореферат (1150383)
Текст из файла
На правах рукописиПОТОЛИЦЫНА ВЕРА ЕВГЕНЬЕВНАРАСШИРЕНИЕЭЛЕКТРОФОРЕЗАОПРЕДЕЛЕНИЯАНАЛИТИЧЕСКИХИКАПИЛЛЯРНОЙВОЗМОЖНОСТЕЙКАПИЛЛЯРНОГОЭЛЕКТРОХРОМАТОГРАФИИМИКРОКОНЦЕНТРАЦИЙБЕЛКОВВБИОЛОГИЧЕСКИХЖИДКОСТЯХСпециальность 02.00.02 – АНАЛИТИЧЕСКАЯ ХИМИЯАвторефератдиссертации на соискание ученой степеникандидата химических наукСанкт-Петербург – 2014ДЛЯ2Работа выполнена на кафедре органической химии ФГОУ ВПО «Санкт-Петербургскийгосударственный университет»Научный руководительОфициальные оппонентыВедущая организацияДоктор химических наук, профессорКарцова Людмила АлексеевнаЯшин Яков Ивановичдоктор химических наук, профессор,руководитель отдела исследований иразработок Департамента инжинирингаООО «Интерлаб»Сидорова Алла Анатольевнакандидат химических наук, ООО "ЦКП"Аналитическая спектрометрия"заведующая лабораториейФедеральное государственное бюджетноеучреждение науки институт физическойхимии и электрохимии имени А.
Н. ФрумкинаРАН (ИФХЭ РАН), г.МоскваЗащита состоится «30» октября 2014 г в 17.00 часов.На заседании диссертационного совета Д 212.232.37 по защите докторских и кандидатскихдиссертаций при Санкт-Петербургском государственном университете по адресу: 199034,Санкт-Петербург, Средний проспект В.О., д.
41/43.Большая химическая аудитория.С диссертацией можно ознакомиться в Научной библиотеке Санкт-Петербургскогогосударственного университета.Автореферат разослан __________________ 2014 г.Ученый секретарьДиссертационного совета/В.В. Панчук/3ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА ДИССЕРТАЦИИАктуальность. Известно, что многие белковые молекулы являются диагностическимимаркерами различных заболеваний.Необратимая адсорбция белков на стенках кварцевогокапилляра в процессе их электрофоретического разделения может искажать результаты анализа,приводить к невоспроизводимости параметров их миграции.В связи с этим перспективным является поиск и использование новых материалов вкачествестационарныхипсевдостационарныхфаз,позволяющихконтролироватьселективность разделения, модифицировать стенки кварцевого капилляра, способствоватьповышению эффективности и снижению пределов обнаружения аналитов за счет различныхвариантов on-line концентрирования.Даннаяработапосвященарасширениюаналитическихвозможностейметодовкапиллярного электрофореза и капиллярной электрохроматографии с применением в качествестационарныхиполиэтилениминовпсевдостационарныхсмальтознойфазводорастворимыхоболочкойипоискуновыхсверхразветвленныхвариантовon-lineконцентрирования для определения микроконцентраций белков в биологических жидкостях.Работа выполнена при поддержке грантов РФФИ 11-03-91331-НИИО-а и РФФИ 14-0300735-а.Цель работы.
Оценить аналитические возможности дендритных полимеров типа «ядрооболочка» на основе полиэтиленимина с мальтозной оболочкой в качестве стационарных ипсевдостационарныхфазвкапиллярномэлектрофорезеипредложитьвариантывнутрикапиллярного концентрирования для определения белков в биологических жидкостях.В связи с поставленной целью необходимо было решить задачи:1.Оценить воспроизводимость и аналитические характеристики синтезированныхкапиллярных монолитных и PLOT-колонок на основе метакрилатов и сверхразветвленныхполимеров при различных значениях pH рабочего электролита на примере разделениямодельной смеси белков.2.Получитьэкспериментальноеподтверждениеролисверхразветвленныхполиэтилениминов, функционализированных мальтозой в различной степени, в качествестационарных и псевдостационарных фаз в условиях мицеллярной электрокинетическойхроматографии (МЭКХ) и капиллярной электрохроматографии (КЭХ).3.Выявить возможности различных вариантов on-line концентрирования с участиемдендритных полимеров в составе электрохроматографических систем и предложить новыйвариант с пределами обнаружения, позволяющими определять белки на уровне их содержания вбиологических жидкостях.44.Методом эллипсометрии оценить возможность адсорбции белков на внутреннейповерхности PLOT-колонки, модифицированной дендритным полимером.5.Апробировать установленные закономерности на реальных объектах (сывороткакрови, моча).Научнаяновизна.Методомустановлен факт динамическойкапиллярнойэлектрокинетическойхроматографиимодификации стенок кварцевого капилляра при введениисверхразветвленных полиэтилениминов с мальтозной оболочкой в состав рабочего буфера, чтопозволяет увеличить воспроизводимость параметров миграции и обеспечить эффективность до4×105 т.т./м при групповом анализе белков.Показано, что в качестве оценочного контроля сорбции белков на внутреннейповерхности PLOT-колонок, модифицированных дендритным полимером, может бытьиспользован метод эллипсометрии.Выявлены возможностиразличных вариантов on-line концентрирования альбумина,лизоцима, инсулина и миоглобина на PLOT-колонках, модифицированных олигосахариднымипроизводными сверхразветвленного полиэтиленимина и установлено, чтоэлектростэкингаистэкингасбольшимобъемомвводимогообразцасочетаниеобеспечиваетконцентрирование белков с факторами концентрирования 900 – 1320.Практическая значимость работы.
Предложена технологияподготовкиPLOT-колонок на основе метакрилатных полимеров и мальтозилированных сверхразветвленныхполиэтилениминов,характеризующихсявысокойвоспроизводимостьюпокрытияипараметрами миграции аналитов (для метакрилатных и дендритных полимеров RSD = 0,8 и0,5%, соответственно).Методом эллипсометриипредложен оценочный контроль сорбции белков навнутренней поверхности PLOT-колонок, модифицированных дендритным полимером.Установлено, что использование PLOT-колонок на основе полиэтилениминовогосверхразветвленного полимера с мальтозной оболочкой обеспечивает снижение пределаобнаружения белков до 0,1 мкг/мл (фактор концентрирования >1000).Предложенвариант электрофоретического определения альбумина в биологическихжидкостях (сыворотка крови, моча) с электрокинетическим вводом (ввод пробы: 90 с×15 кВ)на уровне диагностически значимых концентраций.Степень достоверности и апробация результатов настоящей работы подтверждаетсяхорошей воспроизводимостью всех полученных результатов, их согласованностью прииспользовании независимых методов исследования.5Положения, выносимые на защиту.1.Увеличениевоспроизводимостипараметровмиграциииселективностиразделения белков за счет использования в качестве стационарной и псевдостационарной фазсверхразветвленных полиэтилениминов с различной массой ядра и степенью модификациимальтозой при разделении белков методом мицеллярной электрокинетической хроматографии(МЭКХ).2.Комбинированный электрофоретический вариант on-line концентрирования,основанный на сочетании электростэкинга со стэкингом с большим объемом образца безпереключения полярности и реализованный на PLOT-колонках, содержащихдендритныеполимеры в качестве стационарных фаз.
Снижение пределов обнаружения белков на уровнеих содержания в биологических жидкостях.3.Оценочный контроль сорбции белков на внутренней поверхности PLOT-колонки,модифицированной дендритным полимером методом эллипсометрии.4.Схема электрофоретического определения альбумина в биологических жидкостях(моча, сыворотка крови) с применением стационарных фаз на основе мальтозилированногосверхразветвленного полиэтиленимина.Публикации и апробация работы. Материалы диссертации опубликованы в 5 статьях и24 тезисах докладов.
Результаты исследований докладывались на Всероссийской конференциипо анализу объектов окружающей среды «Экоаналитика-2009» (2009 г. Йошкар-Ола, Россия);III Всероссийской конференции с международнымучастием "Аналитика России" (2009,Краснодар, Россия); Международная конференция по химии «Основные тенденции развитияхимии в начале XXI века» (2009, Санкт-Петербург, Россия); Всероссийской конференции«Хроматография – народному хозяйству» (2010, Дзержинск, Россия); Всероссийскойконференции «Аналитическая хроматография и капиллярный электрофорез» (2010, Краснодар,Россия); IV Научной конференции студентов и аспирантов химического факультета СПбГУ(2010, Санкт-Петербург, Россия); XIX Менделеевском съезде по общей и прикладной химии (2011,Волгоград, Россия); XIII Международной научной конференции “Физико-химические основыионообменных процессов-ИОНИТЫ-2011» (2011, Воронеж, Россия); Научной конференции«Аналитика как инструмент клинической химии» (2011, Санкт-Петербург, Россия); VВсероссийской конференции студентов и аспирантов с международным участием «Химия всовременном мире» (2011, Санкт-Петербург, Россия); 12th European Meeting on environmentalchemistry (2011, Clermont-Ferrand, France); 13th European Meeting on Environmental Chemistry(2012, г.
Моscow, Russia); IV Всероссийская конференция «Аналитические приборы» (2012,Санкт-Петербург, Россия); Всероссийской научной молодежной школе-конференции «Химия6под знаком СИГМА: исследования, инновации, технологии» (2012, Омск, Россия);Всероссийской конференции молодых ученых, аспирантов и студентов с международнымучастием «Менделеев-2012» (2012, Санкт-Петербург, Россия); II Всероссийской конференциистудентов и молодых ученых с международным участием «Молодежная наука в развитиирегионов» (2012, Пермь.
Березники, Россия); Всероссийском симпозиуме с участиеминостранных ученых “Кинетика и динамика обменных процессов» (2012, с. Дивноморское,Краснодарский край, Россия); 1-й Зимней молодежной школе-конференции с международнымучастием «Новые методы аналитической химии» (2013, Санкт-Петербург, Россия); VIIВсероссийской конференции молодых учёных, аспирантов и студентов с международнымучастием по химии и наноматериалам «Менделеев-2013» (2013, Санкт-Петербург, Россия); 2-йВсероссийской конференции «Аналитическая хроматография и капиллярный электрофорез»(2013, Краснодар, Россия); Втором съезде аналитиков России (2013, Москва, Россия).Структура и объем работы.
Характеристики
Тип файла PDF
PDF-формат наиболее широко используется для просмотра любого типа файлов на любом устройстве. В него можно сохранить документ, таблицы, презентацию, текст, чертежи, вычисления, графики и всё остальное, что можно показать на экране любого устройства. Именно его лучше всего использовать для печати.
Например, если Вам нужно распечатать чертёж из автокада, Вы сохраните чертёж на флешку, но будет ли автокад в пункте печати? А если будет, то нужная версия с нужными библиотеками? Именно для этого и нужен формат PDF - в нём точно будет показано верно вне зависимости от того, в какой программе создали PDF-файл и есть ли нужная программа для его просмотра.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
