Автореферат (1150383), страница 4
Текст из файла (страница 4)
14. Пробоподготовка мочи (больной с синдромомИценко-Кушинга)для анализа на PLOT-колонке спокрытием сверхразветвленным полимером PEI-MalА25. Разделение на самопроточном гель-фильтре собъемом слоя 7 мл (Sephadex G-50, Mw = 10000) Объемпробы 2,5 мл; слив: 2,5 мл; сбор белковой фракции 3,5мл; общее время: 10 мин; степень извлечения белка 95%.
разбавление пробы: х 1,4.мочи представлена на рисунок 15.Рис. 15. Электрофореграмма обессоленной мочи (больной с синдромом ИценкоКушинга) на PLOT-колонке с покрытием сверхразветвленным полимером PEI-Mal А25.Объем пробы 2,5 мл. Ввод пробы: 90 с×15 кВ.УФ: 214 нм. Условия анализа: -20кВ, -8295мкА; рабочий электролит: 0,1 М фосфатный буфер (рН 2,2).1-альбумин.19ВЫВОДЫ1.Методомэлектрокинетическойхроматографииустановлено,чтосверхразветвленные полиэтиленимины с различной массой ядра и степенью функционализациимальтозой, введенные в состав рабочего буфера, модифицируют стенки кварцевого капилляра ивыполняют роль псевдостационарной фазы, что повышает воспроизводимость параметровмиграции и селективность разделения белков (альбумина, миоглобина, инсулина, лизоцима).2.Выявленэффектon-lineконцентрированиябелков,сопровождаемыйобращением электроосмотического потока и увеличением эффективности до 4×105 т.т./м, прииспользовании в составе рабочего буфера (рН 2,2)дендритного полимера с наименьшейфункционализацией мальтозой (PEI-Mal С).3.ПредложенатехнологияизготовленияPLOT-колонокдлякапиллярнойэлектрохроматографии с использованием в качестве стационарных фаз метакрилатных идендритных полимеров на основе полиэтиленимина с мальтозной оболочкой, обеспечившихвысокую селективность разделения и воспроизводимость параметров миграции белков (RSD%:0,5-1,8)4.Показано, что в качестве оценочного контроля сорбции белков на внутреннейповерхности PLOT-колонок, модифицированных дендритным полимером, может бытьиспользован метод эллипсометрии.
Установлено, что количество адсорбированного белка непревышает 1 мг/м2, что соответствует < 0,1% (pH=2,2) и 4 мг/м2, или 0,4% (pH=8,5) от общегосодержания белка в растворе.5. Выявлены возможности различных вариантов on-line концентрирования альбумина,лизоцима, инсулина и миоглобина на PLOT-колонках, модифицированных олигосахариднымипроизводными сверхразветвленного полиэтиленимина и установлено, чтоэлектростэкингаистэкингасбольшимобъемомвводимогообразцасочетаниеобеспечиваетконцентрирование белков с факторами концентрирования 900 – 1320.6.Предложен электрофоретический способ определения альбумина в моче исыворотке крови (предел обнаружения 0,1 мкг/мл,N = 80000т.т./м).Основные материалы работы опубликованы в следующих работах:1.Е.А. Бессонова, Л.А.
Карцова, Н.А. Поликарпов, В.Е. Потолицына. Исследованиевозможностей новых сверхразветвленных полимеров в качестве псевдостационарных фаз вэлектрокинетической хроматографии при определении белков. // Вестник СПбГУ. 2011.Сер.11.Вып.1. С.100-106.20В.Е. Потолицына, Л.А.Карцова, Е.А.Бессонова. Синтез и изучение свойств2.PLOTколонок на основе новых дендритных полимеров для разделения белков методомкапиллярной электрохроматографии. // Журнал аналитической химии. 2013. Т.68. № 11. С. 1096— 1100.В.Е.
Потолицына, Л.А. Карцова, Е.А. Бессонова. Эллипсометрический контроль3.сорбции белков при использовании PLOT-колонок с дендритной стационарной фазой.// Аналитика и контроль. 2014. Т. 18. № 1. С. 82-90.Потолицына4.В.Е.,КарцоваЛ.А.PLOT-колонкивкапиллярнойэлектрохроматографии (обзор). // Сорбционные и хроматографические процессы. 2014. Т. 14.Вып. 1. С. 31-41.Е.А. Бессонова, Л.А. Карцова, В.Ю. Королева, В.Е.
Потолицына. On-line5.концентрирование белков в условиях капиллярной электрохроматографии с использованиемPLOT-колонокнаосновесверхразветвленныхполимеров.//Сорбционныеихроматографические процессы. 2014. Т. 14. Вып. 2. С. 275-285.Л.А. Карцова, Н.А. Поликарпов, В.Е.
Потолицына. Проблемы и решения6.определения белков методом капиллярной электрохроматографии на монолитных сорбентах. //ТезисыVIIВсероссийскойконференциипоанализу объектовокружающейсреды«Экоаналитика-2009». 21–27 июня 2009 г. Йошкар-Ола. С.38.7.Карцова Л.А. Бессонова Е.А., Поликарпов Н.А., Потолицына В.Е. Изучениевозможностей электрофоретических методов при анализе белков в биологических объектах. //Тезисы III Всероссийской съезда с международным участием. Краснодар. 2009. С. 56.8.Карцова Л.А., Бессонова Е.А., Поликарпов Н.А., Потолицына В.Е. Достоинства иограничения электрофоретических методов определения белков в биологических объектах.Международная конференция по химии «Основные тенденции развития химии в начале XXIвека».
С.-Петербург. 21-24 апреля 2009. С.209.9.Н.А. Поликарпов, Л.А. Карцова, Е.А. Бессонова, В.Е. Потолицына. Получение ииспользование монолитный и дендримерных PLOT-колонок для анализа белков методомкапиллярной электрохроматографии. // Всероссийская конференция «Хроматография –народному хозяйству». Тезисы докладов. 19-23 апреля 2010. Дзержинск. С. 155.10.Л.А.Карцова, Е.А. Бессонова, Н.А.Поликарпов, В.Е. Потолицына, Ю.Н.
Мартыч.Перспективы использования сверхразветвленных полимеров для электрофоретического ихроматографического определения биологически активных веществ. // Тезисы докладов.Краснодар. 25-30 сентября 2010 г. С. 235.2111.Н.А.Поликарпов,ЭлектрокинетическаяЛ.А.Карцова,хроматографиясЕ.А.Бессонова,использованиемВ.Е.Потолицына.сверхразветвленныхмальтозилированных полиэтилениминов. // Всероссийская конференция «Аналитическаяхроматография и капиллярный электрофорез». Тезисы докладов. Краснодар. 25-30 сентября2010 г. С. 234.12.Потолицына В. Е. Анализ белков методом капиллярной электрохроматографии сиспользованиемполиметакрилатныхидендримерныхPLOT-колонок.//IVНаучнаяконференция студентов и аспирантов химического факультета СПбГУ.
20–23 апреля, 2010г.Россия, СПб,тезисы докладов С. 33.13.Потолицына В.Е., Бессонова Е.А., Карцова Л.А. Сверхразветвленные полимерыкак компоненты электрофоретических систем при определении белков. V-ая Всероссийскаяконференция студентов и аспирантов «Химия в современном мире». Тезисы докладов. 2011.
С.Петербург. 18-22 апреля. С.42-43.14.Бессонова Е.А., Карцова Л.А., Поликарпов Н.А., Потолицына В.Е. Капиллярнаяэлектрохроматография белков с использованием полиметакрилатных и дендримерных колонок.Тезисы докладов XIX менделеевского съезда по общей и прикладной химии. Волгоград.
25-30сентября 2011 г. Т. 4. С. 322.15.Бессонова Е.А., Карцова Л.А., Потолицына В.Е., Поликарпов Н.А. Влияниесверхразветвленныхмальтозилированныхполиэтилениминов на миграционные характеристикибелков при их электрофоретическом определении. Тезисы докладов XIX менделеевского съездапо общей и прикладной химии. Волгоград. 25-30 сентября 2011 г.
Т. 4. С.323.16.Bessonova E.A., Kartsova L.A., Potolicina V.E., Polykarpov N.A. The possibilities ofhyperbranched polymer PEI-Mal as an additives in mobile and stationary phases in electrophoreticdetermination of bioactive organic compounds. 12th European Meeting on environmental chemistry.France. Clermont-Ferrand. 7-10 декабря. 2011г.
С.17.Бессонова Е.А., Потолицына В.Е., Карцова Л.А., Королева В.Ю. «Полыекапиллярные колонки на основе полиметакрилатов и сверхразветвленныхполиэтилениминовдля КЭХ биополимеров». IV Всероссийская конференция «Аналитические приборы». 25-30июня 2012 г. Санкт-Петербург. С. 37.18.Потолицына В.Е., Бессонова Е.А., Карцова Л.А., Поликарпов Н.А. «Синтезкапиллярных PLOT-колонок на основе полиметакрилатных и дендритных полимеров длясистемы высокоэффективного капиллярного электрофореза «Нанофор 01». IV Всероссийскаяконференция «Аналитические приборы». 25-30 июня 2012 г. Санкт-Петербург. С. 35.2219.Потолицына В.Е., Бессонова Е.А., Карцова Л.А., Поликарпов Н.А.
PLOT-колонкина основе новых дендритных полимеров для анализа белков методом капиллярнойэлектрохроматографии. // Всероссийская научная молодежная школа конференция «Химия подзнаком ∑ : исследования, инновации, технологии». Омск. 14-22 мая 2012 г.С.363.20.Потолицына В.Е., Карцова Л.А., Бессонова Е.А. Изучение возможностейиспользования новых дендритных и полиметакрилатных полимеров в качестве компонентовэлектрофоретических и электрохроматографических систем для анализа белков.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
