Диссертация (1144749), страница 27
Текст из файла (страница 27)
Можно предположить, что отсутствие при этом достоверныхизмененийобусловленозначительнымразбросомданныхвпериодформированияпреовуляторного пика секреции ГнРГ (9:30 ч ЦВ).Полученные нами результаты о содержании ГнРГ в гипоталамусе согласуютсяс данными исследования, проведенного в нашей лаборатории ранее. В предварительныхэкспериментах, посвященных изучению нейропротекторных эффектов экзогенного мелатонина[Керкешко Г. О., 2002], было показано отсутствие достоверных различий между показателямисодержания ГнРГ как в МПО, так и в СВ-Арк гипоталамуса самок крыс в контрольной группев зависимости от времени суток (3 ч и 9:30 ч ЦВ).
Недостатком этого исследования явилось то,что в процессе работы в день декапитации у экспериментальных животных не определялисьстадии эстрального цикла; таким образом, предварительные данные представляли усредненнуюкартину возможных суточных изменений в содержании нейрогормона. В более раннихисследованиях, также проведенных в нашей лаборатории [Степанов М. Г., 1994], былопоказано, что в МПО гипоталамуса, из которой был изъят СОКП, на стадии проэструсаотмечалась лишь тенденция к повышению содержания ГнРГ в дневное время (9-10 ч ЦВ)по сравнению с утренним (3-4 ч ЦВ) значением. В то же время в СОКП величины утреннегои дневного содержания ГнРГ различались на порядок (p<0,001; t-тест), что позволило авторувышеупомянутого исследования сделать предположение о том, что отмеченная в классическойработе С. Карла [Kalra S.
P., 1976] циркадианная ритмика содержания ГнРГ в МПОгипоталамуса самок крыс на стадии проэструса, с относительно более низким значениемданного показателя в утренние часы в сравнении с таковым в послеполуденное время, былаобусловлена именно включением в нее СОКП. Дополнительно, в исследованиях, проведенных109в нашей лаборатории [Степанов М.
Г., 1994], не было обнаружено достоверных суточныхколебаний содержания ГнРГ в СВ-Арк гипоталамуса на стадии проэструса.Отдельные различия в данных, представленных в этом исследовании и полученныхв нашей лаборатории ранее, а также приведенных в литературе, могут быть обусловлены рядомфакторов.
В данном исследовании изучали содержание нейрогормона в целой МПОгипоталамуса (с находящимся в ней СОКП) и только на стадии проэструса и выражалиполученные результаты в пересчете на содержание в ткани общего белка, а не на объемсупернатанта [Керкешко Г. О., 2002] или на фрагмент [Степанов М.
Г., 1994]. Отличие жеот данных литературы [Kalra S. P., 1976] могут быть обусловлены различным способомвыделения гипоталамических структур, а также сезонными и иными факторами. Выявленнаяв результате проведенных исследований неоднозначность в отношении самого фактациркадианной природы изменений уровня ГнРГ в гипоталамусе, а также различиев методологических подходах к исследованию этого явления побудили нас к изучениюрегуляции содержания ГнРГ со стороны нейромедиаторных систем на различных стадияхэстрального цикла.Несмотря на то, что на всех этапах данного исследования стадия эстрального циклаэкспериментальных животных определялась по влагалищному мазку и после декапитациипо состоянию маточных труб, нами также проводилась оценка фона половых гормонов в крови.Полученныеданные,подтверждаярезультатыдругихисследований,указываютна достоверно (U=13,5; p<0,01) повышенный фон эстрадиола на стадии проэструсас максимальным пиком в 9:30 ч ЦВ.
Так, на стадии проэструса уровень гормона составил:0,27±0,01 нМ –в 5 ч ЦВ; 0,41±0,03 нМ – в 9:30 ч ЦВ и 0,35±0,04 нМ – в 11 ч ЦВ. На стадиидиэструса концентрация эстрадиола достоверно отличалась от таковой на стадии проэструсав дневной (U=4; p<0,001) и вечерней (U=35,5; p<0,05) временных точках и составила:0,20±0,03 нМ – в 5 ч ЦВ; 0,16±0,03 нМ – в 9:30 ч ЦВ и 0,24±0,02 нМ – в 11 ч ЦВ.
На стадиидиэструса к вечеру уровень эстрадиола в крови повышался и становился сходным с таковымв 5 ч ЦВ на стадии проэструса (рисунок 3.1).Уровень же прогестерона на обеих стадиях эстрального цикла, по нашим данным,достоверно не отличался в 5 ч ЦВ (21,2±3,0 нМ – на стадии проэструса; 30,5±5,6 нМ –на стадии диэструса) и не изменялся на протяжении всего дня на стадии диэструса (23,7±3,1 нМ– в 9:30 ч ЦВ; 29,5±3,3 нМ – в 11 ч ЦВ), но начинал достаточно резко возрастать и достигалсвоего максимума к 11 ч ЦВ на стадии проэструса (53,2±5,0 нМ – в 9:30 ч ЦВ; 82,9±14,8 нМ –в 11 ч ЦВ) (рисунок 3.2).1100,50,450,40,35нМ0,3Проэструс0,25Диэструс0,2*0,15**0,10,05059:3011циркадианное время, ч#– различие с показателем в 5 ч циркадианного времени на той же стадии эстральногоцикла достоверно (p<0,01; U-тест); *, ** – различия с показателем на стадиипроэструса в то же время достоверно (*р<0,05; **р<0,001; U-тест)Рисунок 3.1 – Содержание эстрадиола в сыворотке крови самок крысна различных стадиях эстрального цикла (M±m, n=9-13)12 0#10 0нМ80#Проэструс60Ди эстр ус4020**059:3011циркадианное время, ч#– различия с показателем в 5 ч циркадианного времени на той же стадии эстральногоцикла достоверны (p<0,001; U-тест); * – различия с показателем на стадии проэструсав то же время достоверны (р<0,001; U-тест)Рисунок 3.2 – Содержание прогестерона в сыворотке крови самок крысна различных стадиях эстрального цикла (M±m, n=7-12)111Таким образом, у животных, использованных в настоящем исследовании, наблюдаласьхарактерная для стадий диэструса и проэструса картина изменений уровня половых стероидовв крови.3.2.
Суточная динамика и среднесуточное содержание биогенных аминов в медиальнойпреоптической области и срединном возвышении с аркуатными ядрами гипоталамусана различных стадиях эстрального циклаДанные литературы о роли биогенных аминов в процессах синтеза и секреции ГнРГ былии остаются до сих пор достаточно противоречивыми [Kalra S. P., Kalra P. S., 1983;Бабичев В. Н., 1995, 2005; Chappel P.
E., 2005]. Предполагается, что для осуществленияпреовуляторного пика секреции ГнРГ необходимо взаимодействие двух сигналов –гормонального, заключающегося в повышении уровня в крови синтезируемых яичникамиполовых стероидов в период, предшествующий овуляции, и циркадианного сигнала, ежедневнопоступающего из СХЯ гипоталамуса к нейрональным структурам, ответственным за синтези секрецию этого нейрогормона. Несмотря на наличие отдельных исследований in vivoи in vitro, доказывающих прямое действие эстрадиола на гонадолиберинергические нейроны[Roy D., Angelini N.
L., Belsham D. D., 1999; Herbison A. E., Pape J. R., 2001; Navarro C. E. et al.,2003; Petersen S. L., Ottem E. N., Carpenter C. D., 2003; Temple J. L. et al., 2004], в настоящеевремя считается, что эстрадиол и прогестерон преимущественно опосредуют свое влияниена синтез и секрецию ГнРГ через эстрогенчувствительные нейроны, входящие в составразличных нейромедиаторных систем [Mahesh V. B., Brann D. W., 1998; Warembourg M.
et al.,1998; Herbison A. E., 1998; Chappell P. E., Levine J. E., 2000; Kelly M. J., Rønnekleiv O. K., 2008].Нейромедиаторы, и особенно биогенные амины, принимают активное участие в осуществленииконтроля над регуляцией овариального цикла [Бабичев В. Н., 1995]. По этой причине оценитьзависимость изменений в содержании различных нейромедиаторов в структурах гипоталамуса,ответственных за синтез и секрецию ГнРГ, от овариального и циркадианного сигналов,специфически действующих на моноаминергические системы гипоталамуса, оказываетсядля исследователей довольно непростой задачей. Ранее в нашей лаборатории уже проводилисьисследования по изучению суточных ритмов содержания биогенных аминов в различныхгипоталамических структурах, однако в них не всегда учитывалась стадия эстрального цикла.Междутемдляболееполногопониманияпроцессоввзаимодействияразличныхмоноаминергических систем гипоталамуса и их участия в центральной регуляции овариальных112циклов необходимо учитывать влияние на эти механизмы уровня половых гормонов в крови.Изменениечерезэтогоуровняспецифическиенарецепторыразличныхстадияхактивациюилиэстральноготорможениецикларазличныхвызываеттормозныхи стимулирующих нейромедиаторных систем, которые в результате осуществляют контрольнад синтезом ГнРГ, его продвижение по аксонам и выделение в кровь в нейрогемальныхобластях [Kalra S.
P. et al., 1997].В проведенном нами исследовании суточной динамики содержания биогенных аминовв структурах гипоталамуса, в которых происходят синтез и секреция ГнРГ, было обнаружено,что на стадии проэструса содержание НА в МПО гипоталамуса в период времени с 9 чдо 11 ч ЦВ имеет место достоверное (U=11; р<0,05) снижение содержания этогонейромедиатора, а к 14 ч ЦВ уже отмечается тенденция к его повышению (рисунок 3.3).Содержание же ДА в той же гипоталамической структуре в указанном временном интервалеизменялось без достоверно значимых различий, что носило характер тенденций: к снижениюв период с 9 ч до 11 ч ЦВ и к повышению в период с 11 ч до 14 ч ЦВ (рисунок 3.4).
В СВ-Аркгипоталамуса достоверной суточной динамики содержания НА выявлено не было (рисунок 3.5).Однако уровень ДА в этой структуре достоверно (U=2; р<0,05) повышался в период временис 9 ч до 11 ч ЦВ и имел тенденцию к снижению в следующем временном интервале, с 11 чдо 14 ч ЦВ (рисунок 3.6).Выяснениеприродысуточныхизмененийсодержаниябиогенныхаминовв гипоталамических областях, участвующих в синтезе и секреции ГнРГ, может стать ключомк пониманию роли этих нейромедиаторов в регуляции эстральных циклов в норме,что в дальнейшем поможет установить причины нарушений центральной регуляциирепродуктивнойфункцииприразличных патологических состояниях ивоздействиинеблагоприятных факторов внешней среды, а также в процессе старения.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
