Диссертация (1141409), страница 15
Текст из файла (страница 15)
связано с недостаточнойизученностью аминокислотного состава растительных объектов, в том числеяблони лесной. Нами исследовался аминокислотный состав плодов и литьевяблонилеснойпослепробоподготовки,опробованнойнамиранееприисследовании жомов плодов яблони домашней поздних сроков созревания [67,69].Результаты анализа исследуемого сырья представлены в таблице 28.Как видно из данных таблицы, аминокислотный состав исследуемыхобъектов до и после гидролиза не изменяется и представлен 18 аминокислотами,причем соотношение индивидуальных аминокислот в образцах соответствуетсоотношению, определенному ранее для сортовой образцова яблони домашнейплодов, высушенных [67].Таблица 28.
Аминокислотный состав плодов и лиcтьев яблониКоличественное содержаниеаминокислот,Выявлено при аминокислотном анализеПлодов яблониЛистьев яблонилесной%Яблони домашней сортаПепин Шафранныйлеснойплодов [ 67 ]ДоПослеДoПoслеДоПослегидролгидрoлизагидролизагидрoлизагидрoлизагидрoлизаизаАsp (D)0,180,310,230,360,200,31Thr (T)0,050,070,060,090,090,12Ser (S)0,070,110,060,100,080,15Glu (E)0,260,340,290,350,280,35Pro (P)0,110,150,130,170,140,18112Gly (G)0,070,090,050,070,050,08Аla (A)0,090,140,120,160,060,10Cys (C)следыследыследыследыследыследыVal (Val)0,020,040,010,030,020,03Мet (M)0,060,080,040,050,060,08Ile (I)следыследыследыследыследыследыLeu (L)0,0340,0380,0360,0410,0310,034Тyr (Y)0,0120,0170,0130,0190,0110,011Phe (F)0,020,080,030,060,040,08Lys (K)0,0280,0360,0260,0380,0220,031His (H)0,0060,0080,0060,0120,0040,008Trp (W)следыследыследыследыследыследыАrg (R)0,0800,1200,0600,1100,1010,130Как видно из данных таблицы, аминокислотный состав исследуемых объектов дои после гидролиза не изменяется и представлен 18 аминокислотами, включаяаспарагиновую кислоту, треонин, серин, глутаминовую кислоту, пролин, глицин,аланин, цистеин, валин, метионин, изолейцин, лейцин, тирозин, фенилаланин,лизин, гистидин, триптофан, аргинин, среди которых доминантными явлются до ипосле гидролиза в плодах – глутаминовая и аспарагиновая кислоты, до и послегидролиза в листьях – аспарагиновая, глутоминовая кислоты, аланин и пролин, вследовых количества для всех видов сырья наблюдается триптофан, изолейцин,цистеин, причем соотношение индивидуальных аминокислот в образцахсоответствует соотношению, определенному ранее для сортовой образцоваяблони домашней поздних сроков созревания.4.6.
Результаты оценки содержания полисахаридов, включая пектиновуюфракциюКак известно, плоды яблони домашней являются одним из промышленныхисточников получения пищевого пектина, который выделяют из жома плодовпосле предварительного механического выжимания из сырья яблочного сока.113Основной массив научной литературы, охватывающий проблему содержания вяблоне полисахаридного комплекса, посвящен анализу плодов яблони домашней.[24,49,61] Мы сочли целесообразным провести оценку общего содержанияполисахаридов в плодах и листьях яблони лесной, а также определить выходпектиновых веществ.Количественное определение суммарного содержания полисахаридов всырье определяли в соответствии с требованиями ГФ ХIII (ФС.2.5.0032.15).Результаты гравиметрического определения полисахаридов представлены втаблице 29.Таблица 29.
Результаты определения содержания полисахаридов в листьях иплодах яблони лесной.114Содержания полисахаридов в листьях, плодах яблонилесной14121086420ЛистьяПлодыСвежиеЗамороженныеВысушенныеРис.29. Содержание полисахаридов в листьях, плодах яблони леснойАнализ данных, приведенных в таблице показывает наличие процессов,способствующихснижениюсуммарногосодержанияполисахаридоввисследуемом сырье как при его высушивании, так и при замораживании, однако,потери данной группы веществ не являются критическими.Количественноегравиметрическимопределениеметодом,пектиновыхосуществляявеществпробоподготовку,проводиливключающуюдробное экстрагирование водой (1:50) в трижды в течение получаса на кипящейводяной бане. Собранные водные извлечения объединяли, с последующейфильтрацией через бумажный фильтр, упаривали на роторном испарителе дополовины исходного объема, после чего проводили осаждение фракцииводорастворимых пектинов двухкратным объемом 96% этилового спирта.Полученный осадок отделяли центрифугированием с частотой вращения 5000об/мин.втечение10минут,послечегопоследовательнопромывалидиметилкетоном и этиловым эфиром кислоты этановой, просушивали ивзвешивали.
Оставшийся после выделения водорастворимой фракции остатокзаливали 1% водным раствором хлороводорода и проводили гидролиз в течение 3часов. Полученное извлечение затем снова упаривали до половинного объема,115добавляли96%этиловыйспиртдляосажденияпектиновыхвеществ.Образовавшийся остаток отделяли центрифугированием, осуществляли егоочистку последовательным промыванием диметилкетоном и этиловым эфиромкислоты этановой, после чего сушили и взвешивали. Расчет проводили наобъединенный остаток пектинов. Суммарное содержание пектинов составило4,6% для листьев и 8,9% для плодов яблони лесной.Анализируя полученные результаты, следует отметить незначительноеснижение содержания полисахаридов в сырье при высушивании, что не можетпрепятствоватьиспользованиюданногосырьявкачествеисточникаполисахаридов, а также позволяет рассматривать все виды плодов яблони леснойв качестве источника получения пектинов, допуская выбор метода консервациидля производителя.4.7.
Идентификация и количественная оценка содержания арбутина висследуемом сырьеКак известно, официнальным растительным сырьем, содержащим арбутин,являются листья брусники и листья толокнянки, включенные в ГФ ХIII. Брусникаобыкновенная (Vaccinium vitis-idea L.) и толокнянка обыкновенная (Arctostaphylosuva-ursi L.) представляют собой многолетние кустарнички, для сохраненияпопуляции которых, в соответствии с требованиями «Инструкции по сбору исушке» повторная заготовка на том же участке допустима через 5-10 лет (длясырья листья брусники) и через 5 лет (для сырья листья толокнянки).
При этом,следует отметить. что постановлением ПравительстваРоссийской Федерации№168 от 26.02.1996 «Об утверждении Положения о лицензировании отдельныхвидов деятельности в области охраны окружающей среды» деятельность по сборуи реализации сырья из дикорастущих лекарственных растений передана подлицензирование местным органам, т.е. регулирование заготовительного процессасырья для общефедерального использования передано на рассмотрение местныхтерриториальных органов управления, что часто приводит к хищнической116эксплуатации промышленных зарослей и, как следствие, перебоям в поставкеданных видов сырья и истощении ресурсов. Высокая потребность в сырье,содержащем арбутин, обуславливает актуальность поиска альтернативных видовлекарственного растительного сырья, введение которых в официнальнуюпрактикуневозможнобезразработкивысокочувствительныхметодовидентификации и количественного определения действующего вещества ипоследующей разработки современной нормативной документации.Арбутин, представляющий собой в D –глюкопиранозид гидрохинона(рисунок 30)., впервые был выделен Кавалье из листьев толокнянки в 1853 г.Рис.30 Структура арбутинаПозже он был обнаружен в растениях родов Calluna, Ledum, Epigaea,Gaultheria.
В «Комментариях к четвёртому изданию Российской Фармакопеи» [42]содержится частная статья «Arbutinum», включающая описание методикиизвлечения арбутина из растительного сырья, свойства, испытания на подлинностьи чистоту вещества, условия хранения и применения. Впервые синтез природногогликозида – арбутина в виде ацетата был осуществлен А. Михаэлем в 1879 г. сиспользованиемацилированныхгликозилгалогенидов.Схемасинтезап-гидроксифенил-2,3,4,6-тетра-О-ацетил-в-Д-глюкопиранозида (ацетата арбутина)представлена на рисунке 31.Рис.31 Схема синтеза природного гликозида арбутин в виде ацетата117Однако в чистом виде арбутин в медицинской практике находитограниченное применение, в основном в косметологии.Как и другие фенольные гликозиды, арбутин из растительного сырьяизвлекают этиловым (96, 70 и 40 %) или метиловым спиртом, с последующейочисткойспиртовыхизвлечений.Выделениеиндивидуальногоарбутинаосуществляют, как правило, методом адсорбционной хроматографии.
Дляидентификацииарбутинавлекарственномрастительномсырьеширокоприменяют метод хроматографии в тонком слое сорбента или на бумаге. Припроведениихроматографическогоанализавтонкомслоесорбентаисследователями используются системы растворителей: С4Н9ОН-СН3СООН-Н2О(4:1:5) [57], н-С4Н9ОН – СН3СООН – Н2О– С6Н4(СН3)2 (6:2:3:4), СНСl3- 96%C2H5OH (6:4) [52] CH3COOH 60%, CH3COOC2H5- HCOOH – H2O (3:1:1) [4]. Прихроматографировании на бумаге чаще применяют растворы кислоты уксуснойразнойконцентрации.Так,приизучениииндивидуальноговещества,выделенного из листьев груши обыкновенной [57] сортов «Бэре» и «Леснаякрасавица» использовалась ТСХ в системе БУВ (4:1:5) с свидетелем арбутиномстандартом, позволившая идентифицировать данное вещество как арбутин.
[52] Висследованиях,направленныхнаразработкуэффективныхметодикидентификации арбутина подземных и надземных вегетативных органов Bergeniacrassifolia [121] используется хроматография на бумаге и в тонком слое сорбента.Автор отмечает наличие фиолетовой флуоресценции пятен в УФ-свете, а такжеразвитиекраснойокраскизонадсорбциихроматограмм реактивом Паули.арбутинапослепроявленияПо результатам исследований арбутинидентифицирован в зеленых, красных и бурых листьях и корневищах бадана сиспользованием различных систем растворителей.
[121]. В случае выделения сиспользованиемхроматографическихметодоварбутина-индивидуальноговещества для подтверждения подлинности определяют температуру плавления,УФ- и ИК спектры [39]. В связи с присутствием в молекуле арбутинаароматических С=С-связей максимум поглощения в УФ спектре ожидается при118270-300 нм. Для арбутина максимум поглощения находится при 282 нм и можетбытьиспользованкакдлякачественнойхарактеристики,такидляколичественного определения арбутина в растительном сырье.В инфракрасном спектре арбутина присутствуют характерные полосы при3200 - 3400 см, наличие которых обусловлено присутствием спиртовых ифенольных гидроксильных групп; полосы 1515, 1460, 1440 см типичны дляароматических С=С-связей.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
