Диссертация (1141404), страница 20
Текст из файла (страница 20)
5.3.1. ВЭЖХ-хроматограммы флавоноидов НГМ G. woronowii (1), G. nivalis(2) в режиме PS.В режиме PS МИ m/z = 303 наблюдается у 2-х пиков с RT=7,1 и RT=13.5мин (рис. 5.3.1). Предположительно, компоненты – производные кверцетина.1311: Scan ES+4872.39e7%I10014.26 18.0522.01 25.4810.002.067.183.43e610.00%4.102.0e-1120014000.00.001007.138.02e6317.07100III17.3510.0020.00Time1: Scan ES+6631.86e713.10 17.07 20.2510.004.1402004006008001000120014001: Scan ES+3174.92e89.3817.3810.004.10m/z25.6220.00V, VII2.412.0e-19.3420.002: Diode Array360III, IV, V,Range:VII 3.574e-12.24663.0513.525.5620.00III6.32 8.9000.00DMP-030315-7479.072.24m/z10.00DMP-030315-7 457 (4.163) Cm (448:481-(398:440+502:592))%AU10002: Diode Array360Range: 3.574e-19.341.0e-180020.001: Scan ES+5017.12e72.0600.00DMP-030315-7501.04I, II3.0e-1600IV11-Mar-2015 13:16:12IV4.16000.00DMP-030315-7487.051036.82DMP-030315-7 1030 (9.381) Cm (1016:1052-(929:988+1063:1133))317.077.11e610013.563.55I1: Scan ES+3031.24e8801.56216.56 19.697.5500.00DMP-030315-7100%303.0120.00II413.780%DMP-030315-7 786 (7.159) Cm (775:798-(816:872+695:757))400V, VIQBA1279.39%1373.69862.67 1037.52654.3820011-Mar-2015 13:16:1227.028.3700.00DMP-030315-700QBA127DMP-030315-7 1908 (17.380) Cm (1893:1929-(1775:1858+1950:2016)) 3317.073.07e6 DMP-030315-71001002.112.2010011-Mar-2015 13:16:12AU%QBA1277.19100II31%11-Mar-2015 13:16:12%QBA127DMP-030315-7 1486 (13.535) Cm (1480:1500-(1525:1585+1421:1475))32.01e6303.08100DMP-030315-7%30.00.007.135.5613.5210.0017.3520.00TimeРис.
5.3.2. ВЭЖХ-хроматограммы и масс-спектры флавоноидов, производныхкверцетина (1) и изорамнетина (V) или рамнетина(VI) (2), НГМ G. woronowii врежиме PS.Пик с RT=7,1 мин в режиме PS соответствует МИ [М+Н] m/z = 464,6([M+Na]+ m/z = 487) (рис. 5.3.2), а в режиме NS m/z = 462.6 (рис. 5.3.3).
Структурагиперозида (I) может быть предположена для этого пика (таб. 5.3.1).Пик с RT=13,5 мин в режиме PS соответствует МИ [М+Н] m/z = 303 (рис.5.3.2), а в режиме NS 301 (рис. 5.3.3). Данный пик соответствует кверцетину (II)(таб. 5.3.1).МИ m/z = 317 в режиме PS наблюдается для 3-х оставшихся пиков с RT=4.1,9.4 и 17.4 мин (рис. 5.3.1). Предположительно, компоненты – производныеизорамнетина (V) или рамнетина (VI) (таб. 5.3.1).Пик с RT=4,1 мин в режиме PS соответствует МИ [М+Н] m/z = 641([М+Na]+ m/z = 663) (рис. 5.3.2), а в режиме NS m/z = 639 (рис.
5.3.3). В литературеотсутствуют подходящие структуры для этого пика, но можно предложить однуиз следующих возможных структур – изорамнетин-О-софорозид (III) (таб. 5.3.1).Пик с RT=9,4 мин в режиме PS соответствует МИ [М+Н] m/z = 479([М+Na]+ m/z = 501) (рис. 5.3.2), а в режиме NS m/z =477 (рис. 5.3.3). В литературеотсутствуют подходящие структуры для этого пика, но исходя из структуры,предложенной выше, можно предложить одну из следующих возможных структур– изорамнетин-3-О-галактозида (IV) (таб. 5.3.1).132Пик с RT=17,4 мин в режиме PS соответствует МИ [М+Н] m/z = 317 (рис.5.3.2), а в режиме NS m/z = 315 (рис.
5.3.3). Предположительно, данный пик –изорамнетин (V) или рамнетин (VI) (таб. 5.3.1).ПрианализеНГМG.nivalisполученаВЭЖХ-хроматограмма,представленная на рис. 5.3.1, наблюдается 1 интенсивный пик и еще 1 пик,интенсивность которого значительно меньше.В режиме PS молекулярный ион m/z = 303 наблюдается у пика с RT=5,7 мин(рис. 5.3.4). Предположительно, компонент – производное кверцетина.Пик с RT=5,7 мин имеет в режиме PS МИ [М+Н] m/z=626,6 (рис. 5.3.4), а врежиме NS МИ [M+H] m/z=624,7 (рис.
5.3.5). Одна из возможных структур дляданного пика – кверцетин-3-О-софорозид (VII), кверцетин-3-галактозил-(1→6)галактозид (VIII) (таб. 5.3.1).МИ m/z = 287 в режиме PS отмечен для 1-го оставшегося пика с RT=6,83мин (рис. 5.3.1). Предположительно, компонент – производное кемпферола.3QBA12712-Mar-2015 14:57:50%V, VI%IV638.70III%100448.561278.83%10.006.3000.00DMP-030315-8%II391.11671.80DMP-030315-8 873 (7.951) Cm (866:875-(852:860+881:892))462.621001.58e6%AUI00.00DMP-030315-8200400600800100012001400m/z1: Scan ES3012.88e713.6310.007.953.045.0e-11.370.00.0020.003.01100%179.011: Scan ES6398.98e7IIIII00.00DMP-030315-820.0010.00100DMP-030315-8 1495 (13.617) Cm (1490:1502-(1452:1482+1510:1529))300.631.96e61001: Scan ES4772.94e8IV%5.43e620.009.70100%0010.00100DMP-030315-8 692 (6.303) Cm (686:699-(659:678+705:727))0V, VI1: Scan ES3153.46e72.8900.00DMP-030315-8954.6412-Mar-2015 14:57:5017.28100DMP-030315-8 1065 (9.700) Cm (1061:1072-(1034:1052+1089:1117))476.692.03e71000QBA127DMP-030315-800.00DMP-030315-8652.5603%DMP-030315-8 1897 (17.278) Cm (1888:1904-(1851:1879+1922:1950))314.691.77e610020.001: Scan ES4632.50e7I11.4910.0017.7020.006.26 I, II, III, IV, V, VI9.687.8813.59 17.2310.0020.002: Diode Array360Range: 6.252e-1TimeРис.
5.3.3. ВЭЖХ-хроматограммы и масс-спектры образца НГМ G. woronowii врежиме NS.13341QBA12704-Mar-201516:56:064QBA127DMP-030315-3 626 (5.700) Cm (623:634-(596:616+643:676))DMP-030315-3359.768.47e7100100VII, VIII04-Mar-2015 16:56:06 41: Scan ES+6274.80e7VII, VIII5.72QBA12704-Mar-2015 16:56:06DMP-030315-3 752 (6.848) Cm (745:757-(708:735+766:792))286.63100%8.25 11.3020.000100200300400500600AUAU4.0e-1626.59156.76214.142.0e-1m/z1.357000.00.0014.5010.00Time20.001: Scan ES+6114.38e624.460100200448.7730040050060020.001: Scan ES+2871.79e86.853.136.0e-1633.10464.659.6410.0000.00DMP-030315-32: Diode Array360Range: 6.106e-15.6827.0921.5512.1314.22 18.182.6610013.5610.0021.3420.006.8600.00DMP-030315-3%%6.0e-17.8315.3528.891: Scan ES+3036.24e8%%2.7100.00DMP-030315-3263.681: Scan ES+6333.66e710.0020.005.73100IX, X19.87 23.4310.0004-Mar-2015 16:56:06IX, X8.35 11.363.44100%2.28302.669.78e600.00DMP-030315-300.00DMP-030315-36.81100%42QBA127DMP-030315-318.1410.0020.002: Diode Array360Range: 6.107e-15.684.0e-12.0e-11.35m/z 0.00.0070014.5010.0020.00TimeРис.5.3.4.
ВЭЖХ-хроматограммы и масс-спектр флавоноида, производногокверцетина (1) и кемпферола (2), в НГМ G. nivalis в режиме PS.Пик с RT=6,85 мин имеет в режиме PS МИ [M+Na]+ m/z = 633,1 (рис. 5.3.4),а в режиме NS [M+Na]+ m/z = 609 (рис. 5.3.5). Одна из возможных структур дляданного пика – кемпферол-3-О-галактозил-(1→6)-галактозид (IX) или кемпферол3-О-софорозид (софорафлавонолозид) (X) (таб. 5.3.1).4QBA127404-Mar-2015 18:46:44DMP-030315-6 750 (6.832) Cm (745:757-(668:716+779:840))608.68100QBA127DMP-030315-63.41e6 10004-Mar-2015 18:46:441: Scan ES6097.50e76.83%IX, X%IX, X010.00DMP-030315-65.71100VII,VIII676.70439.6720.001: Scan ES6251.73e8%0DMP-030315-6 627 (5.712) Cm (622:638-(564:607+659:729))624.701008.34e6VII, VIII010.00DMP-030315-620.002: Diode Array360Range: 6.152e-15.69%6.0e-1AU4.0e-12.0e-11.360200300400500600700m/z0.014.5010.0020.00TimeРис. 5.3.5.
ВЭЖХ-хроматограммы и масс-спектры образца НГМ G. nivalis врежиме NS.Результаты ТСХ-анализа флавоноидов НГМ G. woronowii и G. nivalisпредставлены в Приложениях 4, 6 раздел «Подлинность; 2. ТСХ (флавоноиды)».134Таблица 5.3.1.Формулы идентифицированных флавоноидов в НГМ G. woronowii и G. nivalisOHHOOOHHOOHOOOHOOOHOOHOHOII. Кверцетин. М+Н= 303.CH3OHOHOHOOOHOHH3 COOOHOOHOHOHOHOHOOHIII. Изорамнетин-О-софорозид.М+Н = 641.OHOOHCH3OOHHOCH3OHOHHOOOOHOOHOHOI. Гиперозид.
М+Н= 465.OHOOOHOOHOHHOOOOHHOIV. Изорамнетин-3-Огалактозид. М + Н = 479.V. Изорамнетин. М+Н =317.HOOOHOOOHOOOHOHOOHOHOOHOHOHHOVI. Рамнетин. М + Н = 317.OHOOOOHOHOOOHOOOHOHOHOHOHOHOHOOHOHOOHOOHHOOHVII. Кверцетин-3-Ософорозид. М +Н =627.OHOHIX. Кемпферол-3-Огалактозил-(1→6)-галактозид.М + Н = 611.OHOOHOOHOOHVIII.
Кверцетин-3галактозил-(1→6)галактозид. М + Н = 627.HOOHOOHOOOOHOHOHOHHOX. Кемпферол-3-О-софорозид (софорафлавонолозид). М + Н = 611.135Содержание кверцетина в НГМ G.woronowii составило 0,075±0,0047%, а вНГМ G. nivalis – 0,029±0,0026%; содержание изорамнетина в НГМ G.woronowii –0,043±0,0028 %, кемпферола в НГМ G. nivalis – 0,011±0,0009%.
Метрологическиехарактеристики методики представлены в таб. 5.3.2.Таблица 5.3.2.Метрологические характеристики методики количественного определенияагликонов флавоноидов в НГМ двух видов подснежников (n =5, Px = 0,95,t(p,f)=2,776)Объект,%НазваниеS2xSxΔx,%соединенияG. woronowiiG. nivalisкверцетин0,0751,4·10-50,0037820,0016910,00476,29изорамнетин0,0435,3·10-60,0023020,0010300,00286,59кверцетин0,0294,5·10-60,0021210,0009490,00269,08кемпферол0,0115,5·10-70,0007430,0003320,00098,555.4. Изучение гидроксикоричных кислот НГМ подснежниковСуммарное содержание производных ГКК кислот в НГМ G.
woronowiiсоставило 6,44±0,51 мг/100 мл, а в НГМ G. nivalis 3,17±0,25 мг/100 мл.123Рис. 5.4.1. ВЭЖХ-УФ хроматограмма НГМ G. woronowii. 1 – неохлорогеноваякислота, 2 – хлорогеновая кислота, 3 – криптохлорогеновая кислота.Полученная хроматограмма ГКК НГМ G. woronowii (обнаружены неохлорогеновая, хлорогеновая и криптохлорогеновая кислоты) представлена на рис. 5.4.1.136В НГМ G. nivalis были обнаружены хлорогеновая и криптохлорогеновая кислоты(рис.
5.4.2). Полученные результаты определения индивидуальных ГКК в НГМпредставлены в таб. 5.4.1.x10 2 DAD1 - A:Sig=330,4 Cinnam_Bx1100_2015_11_03.d1.81.71.61.51.41.31.21.110.9* 12.5300.810.70.60.50.420.30.20.1034567891011121314151617 18 19 20 21 22 23 24 25Response Units vs. Acquisition Time (min)26272829303132333435363738Рис. 5.4.2. ВЭЖХ-УФ хроматограмма НГМ G. nivalis. 1 – хлорогеновая кислота, 2– криптохлорогеновая кислота.Таблица 5.4.
1.Гидроксикоричные кислоты НГМ G. woronowii и G. nivalis (M±m, n=5)ГККВремяудерживания, tRнеохлорогеновая кислотахлорогеновая кислотакриптохлорогеноваякислотаСумма9,512,613,0Содержание, мг/100 мл НГМП. ВороноваП.белоснежный3,78±0,30Не обнаружено1,80±0,143,04±0,240,86±0,070,13±0,016,44±0,513,17±0,25Метрологические характеристики методик количесвенного опредленияорганических и гидроксикоричных кислот в НГМ G. woronowii и G.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
